Encéphalopathie spongiforme bovine et nouveau variant de la maladie de Creutzfeldt-Jakob ; la crise de la vache folle (médias et psychose)

L'encéphalopathie spongiforme bovine (ESB) et la maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ) sont des maladies neuro-dégénaratives qui appartiennent à la famille des encéphalopathies spongiformes subaiguës transmissibles (ESST) dont l'agent infectieux est appelé prion. Le fait qu'une maladie animale, l'ESB, puisse se transmettre à l'homme, sous la forme du nouveau variant de la maladie de Creutzfeldt-Jakob, a déclenché une grave crise à la fin de l'année 2000 : la crise de la vache folle. Pour beaucoup de monde, les médias ont amplifié et dramatisé le contexte paroxystique de la crise, n'hésitant pas à utiliser le terme de psychose pour qualifier les réactions du consommateur qui s'est détourné de la viande bovine. En fait, l'analyse de la crise montre que le consommateur a réagi en fonction des risques perçus. Reste que le besoin d'information est latent et doit être bien assuré tant que des incertitudes persistent sur les modes de transmission des ESST et sur l'ampleur du nouveau variant de la MCJ.NANTES-BU Médecine pharmacie (441092101) / SudocSudocFranceF

Apport de l'amplification génique en temps réel dans le contrôle de l'absence de contamination par le virus de l'hépatite A des dérivés sanguins et des aliments

Le virus de l'Hépatite A (VHA) est un virus nu particulièrement résistant aux techniques d'inactivation virale. Sa présence dans des pools de plasmas à usage thérapeutique, ainsi que dans des prélèvements issus de l'industrie agro- alimentaire pose un réel problème de santé publique. Le moyen le plus efficace d'assurer la qualité des produits commercialisés est la mise à disposition d'outils technologiques très performants, permettant l'éviction des échantillons contaminés. Deux techniques de détection du VHA ont été mises au point. La première est une technique sensible de détection par RT-PCR en temps réel, qui met en œuvre la technologie Taqman, pour amplifier la région 5' non codante du génome du VHA. La sensibilité de cette technique est de 300 génomes équivalents par ml à 95% et de 50 génomes équivalents à 50%. Après sa validation aux normes européennes, elle est appliquée en routine, depuis plus de 30 mois, ce qui correspond à l'analyse de plus de six millions des dons. La recherche systématique du VHA dans les pools plasmatiques thérapeutiques a permis de garantir l'assurance qualité des produits dérivés du sang. L'autre technique de détection du VHA est basée sur l'immunocapture (IC) de virions. L'approche réalisée par cette technique est l'extraction puis l'amplification des génomes de particules virales entières considérées comme infectieuses (IC-RT-PCR). Des billes magnétiques marquées par un anticorps anti-IgG de souris (billes-IgG) sont mises en contact avec le complexe VHA-Ac monoclonal. L'ensemble est porté à 95ʿC et l'ARN des virions est amplifié par la technique de RT-PCR en temps réel précédemment décrite. L'IC-RT-PCR a une sensibilité de 600 virus par réaction. Une fixation non spécifique d'ARN libre du VHA ou d'autres virus a été constatée. Elle ne représente que 0,2% des génomes présents. Enfin, l'IC-RT-PCR a été utilisée comme une technique de titrage de virions et comparée à la technique de détection des virus par plages de lyse, dans le cadre d'une étude de l'inactivation thermique du VHA, souche HM175 18F cytopathogène, en milieu PBS et dans des milieux modèles proches de la composition de jus de fruits. La décroissance virale constatée par la technique des plages de lyse est plus importante que celle mesurée par la technique génomique montrant que la température a une action sur la désorganisation de la capside virale et non sur l'acide nucléique. Les résultats obtenus mettent en évidence un effet protecteur des milieux modèles évalués, sur l'intégrité du VHA, qui n'existe pas en milieu PBS. La quantification de virus non ou difficilement cultivables comme le VHA, dans des milieux complexes qui subissent des procédés d'inactivation reste encore à évaluer.The Hepatitis A virus (HAV) is a naked virus known to be highly resistant to viral inactivation procedures. Its presence in plasma products used for therapeutic purposes, as well as in samples from the agricultural and food industries represents a major public health issue. The most effective means of ensuring good quality of commercialized products is that highly performant technological tools, allowing for the detection of contaminated samples, be made available. Two HAV detection methods have been developed in our laboratory. The first is a sensitive real time RT-PCR-based assay that uses the Taqman® technology to amplify the 5' noncoding region of HAV RNA. The sensitivity of this assay is of 95% with 300 genome equivalents/ml, and 50% with 50 genome equivalents/ml. This method was recently certified compilant with European standards and has been used routinely for over 30 months, which means that over 6 million blood donations have been analyzed using this method to date. Systematic screening of therapeutic plasma products for HAV ensures quality assurance of blood derived products. The second HAV detection method is based on the immunocapture (IC) of virions. This technique consists in extracting and amplify ing the genomes of viral particles that are considered infectious (IC-RT-PCR). Magnetic beads, labeled with a mouse anti-IgG antibody (IgG beads), are incubated with HAV-mAb complexes. The reaction is heated at 95ʿC and virion RNA is amplified using the above-mentioned real-time RT-PCR approach. IC-RT-PCR has a sensitivity of 600 copies per reaction. Non-specific binding of cell-free RNA from HAV or other viruses has been observed, but only represents 0.2% of all genomes present in the starting material. Finally, in a study of heat inactivation of a cytopathogenic strain of HAV, known as HM175 18F, in PBS medium and other media with a composition close to that of fruit juice, IC-RT-PCR was used as a virion titration method and was compared to the plaque assay. The observed viral decrease with the plaque assay is more important than that assessed using the genomic method, thus showing that temperature acts on viral capsid disassembly and not on nucleic acids. The obtained results demonstrate the protective effect of the selected media on HAV integrity, which is not observed with PBS medium. Viral decrease using inactivation procedures on strains that are difficult to culture or that cannot be cultured is yet to be analyzed.NANTES-BU Médecine pharmacie (441092101) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

Antiviral Action of Methylated β-Lactoglobulin on the Human Influenza Virus A Subtype H3N2

International audienceAntiviral activity of methylated béta-lactoglobulin(Met-BLG) against H3N2 infected into MDCK cell lines depended on concentration of Met-BLG, viral load, and duration of infection. IC50% of the emagglutination activity for 1 and 0.2 MOI (multiplicity of infection) after 24 h of incubation at 37 C in the presence of 5% CO2 were 20 ± 0.8 and 17 ± 0.7 lg mL-1 Met-BLG, respectively.Longer incubation period (4 days) was associated with low IC50% of the hemagglutination activity (7.1 ±0.3 lg mL-1 Met-BLG) and low IC50% of immunofluorescence of viral nucleoproteins (9.7 ± 0.4 lg mL-1 Met-BLG) when using 0.2 and 0.1 MOI, respectively. A concentration of 25 lg mL-1 of Met-BLG reduced the amount of replicating virus by about 2 and 1.3 logs when the viral load was 0.01 and 0.1 MOI, respectively, while higher concentrations reduced it by about 5–6 logs. Antiviral action of Met-BLG was coupled with a cellular protective action, which reached 100% when using 0.01 and 0.1 MOI and 83% when using 1.0 MOI. The time of Met-BLG addition after the viral infection was determinant for its antiviral efficacy and for its protection of the infected MDCK cell lines.Anti-hemagglutination action and cell protective action decreased gradually and in parallel with the delay in the time of Met-BLG addition to disappear totally after 10 h dela