Protocol forin vitro propagation of Zingiber officinale Roscoe via organogenesis

Ginger (Zingiber officinale Roscoe) is traditionally propagated by rhizomes and can carrydiseases that decrease production.In vitro propagation allows healthy seed to beobtained, in high volumes and in less time. The objective of this work was to present aprotocol for thein vitro propagation of Z. officinale via organogenesis. Procedures for in vitro establishment from axillary buds of primary rhizomes of field-grown plants areincluded. In addition, thein vitro multiplication and planting in theex vitro acclimatizationphase with high survival rates

Efecto de filtrados cultivo bacterianos con actividad antifúngica in vitro en la interacción Musa spp.- Mycosphaerella fijiensis

Although certain bacterial species may be in vitro antagonistic of Mycosphaerella fijiensis, as it was demonstrated, they are discrete results that have their effect on the Musa spp.-M. fijiensis interaction. The results will help to design new strategies for genetic improvement and development of biological products for control of black Sigatoka. The aim of this study was to determine the effect of bacterial culture filtrates, with antifungal activity in vitro against M. fijiensis in the interaction between the pathogen and plants of Musa spp., artificially inoculated in greenhouse. Culture filtrates of two strains of Bacillus sp. (CCIBP-B.1 and CCIBP-M27) with in vitro antifungal activity against M. fijiensis were used, with two treatments: application of bacterial culture filtrates three hours before and three days after inoculation of M. fijiensis. The application of bacterial culture filtrates delayed the development of the disease. It also depended on the strain and time of application.Keywords: artificial inoculation, Bacillus sp., biocontrol, Black SigatokaAunque se ha demostrado que determinados géneros bacterianos pueden ser antagonistas in vitro de Mycosphaerella fijiensis, son discretos los resultados que se tienen sobre el efecto de estos en la interacción Musa spp.-M. fijiensis. Tales conocimientos pudieran contribuir a diseñar nuevas estrategias de mejoramiento genético y a la formulación de productos biológicos para el control de la Sigatoka negra. Teniendo en cuenta lo anterior, el objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de filtrados de cultivo bacterianos, con actividad antifúngica in vitro frente a M. fijiensis, en la interacción entre el patógeno y plantas de Musa spp. inoculadas artificialmente en casa de cultivo. Se emplearon filtrados de cultivo de dos cepas de Bacillus sp. (CCIBP-B.1 y CCIBP-M27) con actividad antifúngica in vitro frente a M. fijiensis y se conformaron dos tratamientos: aplicación de los filtrados de cultivo bacterianos tres horas antes y tres días posteriores a la inoculación de M. fijiensis. Se comprobó que la aplicación de filtrados de cultivo bacterianos tuvo efecto retardante sobre el desarrollo de la enfermedad y que este dependió de la cepa y del momento de aplicación.Palabras clave: Bacillus sp., biocontrol, inoculación artificial, Sigatoka negr

Efecto de la aplicación del H2O2 durante la interacción ‘Grande naine’-Mycosphaerella fijiensis

In Musa spp. considerable economical lost are cause by Mycosphaerella fijiensis infection around the world, that is why the study of the pathosystem constitute a priority. However, the main mechanisms activated in banana after infection are still unknown and are a limitation for a better understanding of this complex relationship. The objective of this study was to determine the effect of hydrogen peroxide (H2O2) application, on leaves of ‘Grande naine’ plants, on black leaf streak disease development (BLSD). For this purpose, the first three open leaves of banana plants were inoculated with the monoascosporic isolate of M. fijiensis CCIBP-Pf-83. At three days post-inoculation different H2O2 concentrations (10, 20, 30 and 40 mmol l-1) were sprayed to these plants as well as to non-inoculated ones. During the time course of the experiment for inoculated, sprayed plants and for control plants (infected with M. fijiensis) epidemiological variables as well as the area of necrotic lesions at 49 dpi were measured. The findings of this analysis showed that the early application of H2O2 have influence on the BLSD development. Keywords: banana, black leaf streak disease, hemibiotrophic, hydrogen peroxideEn Musa spp. la infección con Mycosphaerella fijiensis Morelet causa considerables pérdidas económicas alrededor del mundo, por lo cual el estudio del patosistema constituye una prioridad. Sin embargo, los principales mecanismos activados en bananos después de la infección aún se desconocen y son una limitante para el mejor entendimiento de esta compleja relación. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de la aplicación de peróxido de hidrógeno (H2O2), en hojas de plantas de ‘Grande naine’, en el desarrollo de la enfermedad del rayado negro de la hoja (BLSD). Para este propósito, las tres primeras hojas abiertas de las plantas de banano se inocularon con el aislado monoascospórico de M. fijiensis CCIBP-Pf-83. A los tres días posteriores a la inoculación diferentes concentraciones de H2O2 (10, 20, 30 y 40 mmol l-1)se asperjaron a estas plantas así como a las no-inoculadas. Durante el curso de tiempo del experimento en plantas inoculadas, asperjadas y para las plantas control (infectadas con M. fijiensis) se determinaron variables epifitiológicas así como el área de las lesiones necróticas a los 49 dpi. Los resultados mostraron que la aplicación temprana de H2O2 tiene influencia en el desarrollo de BLSD. Palabras clave: banano, enfermedad del rayado negro de la hoja, hemibiotrófico, peróxido de hidrógen

Respuesta histoquímica de plantas de banano cv. `Grande naine' inoculadas con Mycosphaerella fijiensis y filtrado de cultivo de Bacillus pumilus CCIBP-C5

In recent years, interest has won biocontrol Mycosphaerella fijiensis with the use of microorganisms or their products. Nevertheless, the knowledge of the biochemical events involved in Musa- M. fijiensis-microorganism interaction, is still limited. The objective was to determine the histochemical response of `Grande naine' (Musa AAA) plants inoculated or not with the pathogen in the presence of culture filtrate of Bacillus pumilus CCIBP-C5. For this, techniques that allow visualization of callose, superoxide anion, lignin and phenolic compounds in the early days post inoculation (dpi) were used. As a result, at 6 dpi callose deposition were observed within the stomata in plants where the culture filtrate was applied regardless of the presence or absence of the pathogen. Furthermore, a blue halo was observed around stomas, indicative of the presence of superoxide anion. It was not possible to detect accumulation of lignin or phenolic compounds with the technique used. It was demonstrated the accumulation of biochemical compounds related to defense response of `Grande naine' plants to pathogen infection. Furthermore, it was shown that the plant responds in early infection with the use of bacterial culture filtrates. These results demonstrate the possible mechanism of induction of defense response in plants of Musa sp. in the presence of bacterial culture filtrate. Key words: Black Sigatoka, callose, lignin, phenols, superoxide anionEn los últimos años, ha ganado interés el biocontrol de Mycosphaerella fijiensis con el empleo de microorganismos o sus productos. Sin embargo, el conocimiento de los eventos bioquímicos involucrados en la interacción Musa-M. fijiensis-microorganismo, es aún limitado. El objetivo del trabajo fue determinar la respuesta histoquímica de plantas de `Grande naine' (Musa AAA) inoculadas o no con el patógeno, en presencia de filtrado de cultivo de Bacillus pumilus CCIBP-C5. Para esto, se emplearon técnicas que permitieran la visualización de calosa, anión superóxido, lignina y compuestos fenólicos en los primeros días posteriores a la inoculación (dpi). Como resultado, a los 6 dpi se observaron deposiciones de calosa dentro de los estomas en plantas donde se aplicó el filtrado de cultivo, independientemente de la presencia o no del patógeno. Además, se observó un halo azul, alrededor de estomas, indicativo de la presencia de anión superóxido. Con la técnica empleada no fue posible detectar lignina o acumulación de compuestos fenólicos. Se demostró la acumulación de compuestos bioquímicos relacionados con la respuesta de defensa de plantas de `Grande naine' ante la infección del patógeno. Además, que con el empleo de filtrados de cultivo bacterianos la planta responde en los primeros días de la infección. Estos resultados evidencian el posible mecanismo de inducción de la respuesta de defensa en plantas de Musa spp. en presencia de filtrado de cultivo bacteriano. Palabras clave: anión superóxido, calosa, fenoles, lignina, Sigatoka negr

Influencia de maltosa y sacarosa en la maduración de embriones somáticos de Glycine max cv. 'Incasoy-27'

The somatic embryogenesis in soybean crop has as limitation the low percentage of conversion to plant that is obtained, attributed to the presence of somatic embryos with abnormal morphologies during the maturation phase. This work aim was to determine the influence of maltose and sucrose on somatic embryos maturation of soybean cultivar 'Incasoy-27'. A culture medium containing 6.0% maltose or sucrose and activated carbon as carbon sources was used. The embryos were placed in sunlight growth chamber for eight weeks. The higher percentage (29.75%) of mature somatic embryos with dicotyledonal morphology was achieved when maltose was used. The use of sucrose increased the number of somatic embryos that showed abnormal morphologies as trumpet shape, fasciated, fused, rudimentary cotyledon and long hypocotyl type. These results indicated that carbon source influences the maturation of soybean somatic embryos cultivar 'Incasoy-27'. The somatic embryos cultivated in maltose, increase the morphologies dicotyledonal shape, monocotyledonal and polycotyledonal type, with development of apical and radical meristems. Keywords: in vitro, osmotic, regeneration, soy, tissue culture La embriogénesis somática en el cultivo de soya (Glycine max) tiene como limitante el bajo porcentaje de conversión a planta que se obtiene, atribuido a la presencia de embriones somáticos con morfologías anormales durante la fase de maduración. Este trabajo tuvo como objetivo determinar la influencia de maltosa y sacarosa en la maduración de embriones somáticos de soya cultivar 'Incasoy-27'. Se empleó un medio de cultivo que contenía como fuentes de carbono maltosa o sacarosa 6.0% y carbón activado. Los embriones se colocaron en cámara de crecimiento con luz solar durante ocho semanas. Se logró en presencia de la maltosa, el mayor porcentaje de embriones somáticos maduros con morfología dicotiledonal (29.75%). El empleo de la sacarosa, incrementó el número de embriones somáticos con morfologías anormales en forma de tipo trompeta, fasciados, fusionados, cotiledón rudimentario e hipocótilo largo. Estos resultados indicaron que la fuente de carbono influye en la maduración de los embriones somáticos de soya cultivar 'Incasoy-27'. Los embriones somáticos cultivados con maltosa, incrementan las morfologías de tipo dicotiledonal, monocotiledonal y policotiledonal, con desarrollo de los meristemos apical y radical. Palabras clave: cultivo de tejidos, in vitro, osmótico, regeneración, soy

Evaluación en casa de cultivo de la respuesta a la Sigatoka negra de dos cultivares de Musa mediante la inoculación artificial de suspensiones conidiales de Pseudocercospora fijiensis

For evaluating the resistance of Black sigatoka in genotypes from breeding programmes different methods have been used, the artificial inoculation of pathogens reproduction structures is one of them. Nevertheless, is necessary the standardization of condition for it in vitro production and to know the response of cultivars to the diseases in greenhouse. It will permit to establish methods for evaluating and selecting the new resistant genotypes. This work was carried out with the objectives to evaluate different culture media and incubation conditions for obtaining P. fijiensis conidia and for evaluating the response of two cultivars to the artificial inoculation with conidial suspensions of this fungus. Different culture media and incubation conditions for obtaining the conidia and the cultivars Grande naine (susceptible) and FHIA-18 (partially resistant) were used. The conidia of P. fijiensis could be obtained in vitro at 20ºC and constant light from 10 days of incubation in culture media Potato Carrot Agar, modified V-8 Agar and Potato Dextrose Agar. However, the greatest concentration was reached in Potato Dextrose Agar after 20 days of incubation at 20ºC under continuous white fluorescent light. The artificial inoculation of conidial suspensions of P. fijiensis allowed to evaluate the response of Grande Naine and FHIA-18 cultivars in greenhouse. By the use of qualitative scale of symptoms stages and the quantitative variables symptoms evolution time and disease development time was possible to differentiate both cultivars. They maintained in greenhouse similar response to the disease that in the field.Key words: conidia, culture medium, FHIA-18, Grande naine, sporulationPara la evaluación de la resistencia a la Sigatoka negra en genotipos procedentes de programas de mejoramiento genético se han empleado diferentes métodos entre los que se encuentra la inoculación artificial con estructuras de reproducción del patógeno. Sin embargo, se precisa estandarizar las condiciones para su obtención in vitro y conocer la respuesta en casa de cultivo de cultivares de respuesta conocida en campo a dicha enfermedad. Con ello se podrán establecer métodos adecuados de evaluación y selección de nuevos genotipos resistentes. Con los objetivos de evaluar diferentes medios de cultivo y condiciones de incubación para la obtención de conidios de P. fijiensis así como la respuesta de dos cultivares de Musa a la inoculación artificial con suspensiones conidiales de este hongo, se realizó este trabajo. Se probaron diferentes medios de cultivo y condiciones de incubación para la obtención de conidios y se utilizaron los cultivares Grande naine (susceptible) y FHIA-18 (parcialmente resistente). Los conidios de P. fijiensis pudieron ser obtenidos in vitro a 20ºC y luz constante a partir de los 10 días de incubación en los medios de cultivo Agar Papa Zanahoria, Agar V-8 modificado y Agar Papa y Dextrosa, no obstante la mayor concentración se alcanzó en Agar Papa y Dextrosa a los 20 días de incubación a 20ºC y luz fluorescente blanca continua. Mediante el empleo de una escala cualitativa del estado de los síntomas y las variables cuantitativas tiempo de evolución de los síntomas y tiempo de desarrollo de la enfermedad se pudieron diferenciar ambos cultivares que mantuvieron en casa de cultivo una respuesta similar a la observada en campo.Palabras clave: conidios, esporulación, FHIA-18, Grande naine, medios de cultiv

Diversidad de cepas bacterianas de la filosfera de Musa spp. con actividad antifúngica frente a Mycosphaerella fijiensis Morelet

The search for alternatives to agricultural pesticides used for the management of black Sigatoka (Mycosphaerella fijiensis Morelet) includes the selection of microorganisms strains with potential for the control of this pathogen. The objective of the work was to characterize bacterial strains isolated from the phylosphere of Musa spp. with antifungal effect against M. fijiensis. A morphological, cultural, physiological and molecular characterization of the strains was performed and the antifungal activity of these strains was quantified by dual culture. It was verified the diversity of bacteria with antifungal properties against M. fijiensis present in the phylosphere of Musa spp.  In addition, it was found that the phyllosphere of these crops can be used as a source of obtaining possible biological controls of M. fijiensis. Keywords: bacteria, biocontrol, Black Sigatoka, epiphytesLa búsqueda de alternativas a los plaguicidas agrícolas que se emplean para el manejo de la Sigatoka negra (Mycosphaerella fijiensis Morelet) incluye la selección de cepas de microorganismos con potencial para el control de este patógeno.  El objetivo del trabajo fue caracterizar cepas bacterianas aisladas de la filosfera de Musa spp. con efecto antifúngico frente a M. fijiensis. Se realizó una caracterización morfológica, cultural, fisiológica y molecular de las cepas y se cuantificó la actividad antifúngica de estas mediante cultivo dual. Se comprobó la diversidad de bacterias con propiedades antifúngicas frente a M. fijiensis presentes en la filosfera Musa spp. Además, se constató que la filosfera de estos cultivos puede utilizarse como fuente de obtención de posibles controles biológicos de M. fijiensis. Palabras clave: bacterias, biocontrol, epifitos, Sigatoka negr

Relación entre caracteres fenotípicos de plantas de ‘Grande naine’ y ‘Calcutta 4’ cultivadas in vitro y su respuesta a la inoculación con Mycosphaerella fijiensis en casa de cultivo

Resistance of some varieties of Musa sp. to Black Sigatoka is related to the presence of physical barriers associated with leaf anatomy. However, knowledge about the relationship between morphological characters and the type of interaction established in this pathosystem in some Musa genotypes is limited. Then, this work is aimed to analyze the relationship between phenotypic characters of ‘Grande naine’ and ‘Calcutta 4’ plants cultured in vitro and their response to Mycosphaerlla fijiensis inoculation in greenhouse. Morphological description of ‘Calcutta 4’ (resistant) and ‘Grande naine’ (susceptible) plants was carried out under greenhouse conditions. Leaves thickness, stomata density and lignin content were determined on leaves of plants from both genotypes. Phenotypic differences between ‘Grande naine’ and ‘Clacutta 4’ plants were observed. These largely coincided with those described for adult plants under field conditions. Additionally, there were not significant differences in thickness and lignin content of leaves. Though, stomata density was significantly higher in leaves of plants from resistant cultivar compared to susceptible genotype. In the case of ‘Grande naine’ and ‘Calcutta 4’ Musa genotypes, these phenotypic characteristics are not totally determinant in the kind of susceptible or resistant response established in this pathosystem.lignin, black sigatokaKey words: banana, stomata density, foliar anatomy,Aunque se ha planteado que la resistencia de algunas variedades de Musa sp. a la Sigatoka negra está relacionada a la presencia de barreras físicas asociadas a la anatomía foliar, aun es limitado el conocimiento de dicha relación en algunos genotipos de Musa. Es por esta razón que el objetivo de este trabajo fue determinar la relación entre caracteres fenotípicos de plantas de ‘Grande naine’ y ‘Calcutta 4’ cultivadas in vitro y su respuesta a la inoculación con Mycosphaerella fijiensis en casa de cultivo. Se describieron morfológicamente plantas de ‘Calcutta 4’ (resistente) y ‘Grande naine’ (susceptible) en casa de cultivo y se determinó el grosor, la densidad estomática y el contenido de lignina constitutiva en hojas de plantas de ambos genotipos. Se evaluó además el desarrollo y evolución de los síntomas en plantas inoculadas con M. fijiensis en casa de cultivo. Se observaron diferencias fenotípicas entre las plantas de ambos genotipos, las cuales en su mayoría coincidieron con las descritas para plantas adultas en condiciones de campo. Adicionalmente, no se obtuvieron diferencias significativas en cuanto al grosor y el contenido de lignina de las hojas, mientras que la densidad estomática fue significativamente mayor en las hojas de las plantas del cultivar resistente respecto al susceptible. Finalmente, se demostró, que en el caso de los genotipos de Musa ‘Grande naine’ y ‘Calcutta 4’, dichas características fenotípicas no parecen ser determinantes en el tipo de respuesta susceptible o resistente que se establece en este patosistema.Palabras clave: anatomía foliar, bananos, densidad estomática, lignina, Sigatoka negr