Viabilidade da produção de proteases por espécies de Aspergillaceae e triagem de coagulantes do leite bovino / Feasibility of protease production by Aspergillaceae species and screening of coagulants from bovine milk

Proteases são enzimas de elevada importância econômica e com ampla aplicabilidade industrial. Enzimas proteolíticas com atividade coagulante do leite bovino, sintetizadas por Aspergillus sp., vêm demonstrando características bioquímicas com potencial para uso na produção de queijos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a produção de proteases por treze culturas de Aspergillus provenientes da coleção de culturas DPUA da Universidade Federal do Amazonas. A avaliação da viabilidade das espécies e pureza das colônias foi realizada com base nas características macro, micromorfológicas e forma de reprodução. Após autenticação, as espécies de Aspergillus foram submetidas ao cultivo em meio líquido para produção de enzimas proteolíticas. A determinação da atividade proteolítica foi realizada em meio sólido e por colorimetria, utilizando como substratos ágar leite e solução de azocaseína 1% (p/v), respectivamente.  As proteases do fungo que apresentou atividade proteolítica significativa pela análise colorimétrica foram submetidas à caracterização bioquímica. A produção de proteases coagulantes do leite bovino pelas espécies de Aspergillus também foi determinada. Nos testes de autenticação foi verificada a viabilidade de 100% das espécies de Aspergillus. As proteases das espécies de Aspergillus demonstraram diferentes perfis de degradação do substrato, formando halos translúcidos e opacos em meio sólido. Os halos de hidrólise significativa foram determinados nos extratos brutos de A. niger DPUA 399 (39,67 mm) e A. japonicus DPUA 1727 (34,27 mm). Na avaliação da síntese de protease utilizando técnica colorimétrica foi verificada produção significativa por A. oryzae DPUA 541 (32,00 U/mL). Este fungo sintetiza serinoproteases e metaloproteases que demonstram atividade catalítica ótima em pH 5, a 50 °C, mantendo estabilidade na faixa de pH 7 a 10, até 40 °C. Atividade coagulante significativa foi determinada nos extratos de A. melleus DPUA (19,84 U) e A. oryzae DPUA 541 (19,74 U). Entretanto, A. oryzae DPUA 541 e A. oryzae DPUA 1624 sintetizaram enzimas proteolíticas com forte coagulação do leite bovino. Os resultados indicam o potencial das espécies de Aspergillus avaliadas como forte de proteases com aplicabilidade industrial na área de alimentos, em especial para a produção de queijos

Alternativa de fontes nutricionais para desenvolvimento da fase micelial e produção de hidrolases por cogumelo comestível de floresta tropical / Alternative of nutritional sources for the development of the mycellial phase and production of hydrolases by edible mushroom from tropical forest

Cogumelos do gênero Pleurotus são reconhecidos como alimentos de alto valor nutricional e por sintetizarem enzimas hidrolíticas com ampla aplicação industrial. Estas características incentivam a busca por meios que estimulem a produção de biomassa e hidrolases. Este estudo teve como objetivo avaliar meios de cultivo para crescimento, assim como, a síntese de hidrolases e a caracterização de proteases produzidas por P. ostreatoroseus DPUA 1720. A cultura estoque foi mantida em BDAYE (Ágar Batata Dextrose+Extrato de Levedura), a 25 °C por oito dias. O crescimento radial e vigor micelial foram avaliados em seis meios suplementados com Extrato de Levedura (YE): BDAYE (ágar Batata Dextrose), SABYE (Ágar Sabouraud), GYP (ágar Glicose + Peptona), MGYP (Ágar Extrato de Malte-Glicose-Peptona), ágar CEINYE ou CEDYE (Dioscorea altissima in natura ou desidratado). A avaliação da síntese de amilase, celulase e protease foi realizada em meio sólido pelo método do bloco de gelose. A influência do meio e do tempo de cultivo na produção de proteases foram realizadas por fermentação submersa. A atividade proteolítica foi determinada em solução de azocaseína 1% (p/v). As proteases produzidas por fermentação com atividade significativa foram caracterizadas quanto ao efeito do pH e da temperatura na atividade. P. ostreatoroseus apresentou crescimento rápido e micélio cotonoso em BDAYE (17,80 mm/dia) aos cinco dias de cultivo. Entretanto, SABYE e CEINYE são meios promissores para crescimento desse cogumelo. Pleurotus ostreatoroseus sintetizou quantitativo superior de amilase (17,53 mm), seguido de protease (14,33 mm) e celulase (13,61 mm) em CEINYE, BDAYE, GYP, respectivamente. Os valores significativos de atividade das proteases produzidas por fermentação submersa foram determinados em CEINYE (25,87 U/mL) e BDAYE (22,00 U/mL), aos quatro dias de cultivo. As proteases dos cultivos em CEINYE apresentaram atividade ótima em pH 5,0 e 50 °C. Pleurotus ostreatoroseus cresce, sintetiza enzimas tanto em meios de cultura tradicionais como em meios naturais e suas proteases tem potencial para aplicação na biotecnologia de alimentos