Detection of coffee ringspot virus (CoRSV) in the mite vector by RT-qPCR.

The mite Brevipalpus phoenicis (Geijskes, 1939) (Acari: Tenuipalpidae) is responsible for the transmission of coffee ringspot. There is a great interest in the study of Brevipalpus transmitted viruses (BrTVs), and the interaction between them, their vectors and hosts. Electron microscopy analyses suggest that CoRSV replicates in the mite tissue, what would characterize a persistent propagative virus-vector relationship. This study aimed to establish a transcriptase quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) method to evaluate and compare the replication capacity of the virus in the vector. Total RNA was extracted from a sample of 100 mites reared in symptomatic plants for CoRSV using two different methods: CTAB and Nucleo Spin RNA XS Kit (Macherey-Nagel) and quantified in a NanoDrop 8000 (Thermo Scientific).Abstract 10

Citrus bright spot virus: a new dichorhavirus, transmitted by Brevipalpus azores, Causing Citrus Leprosis Disease in Brazil.

Citrus leprosis (CL) is the main viral disease affecting the Brazilian citriculture. Sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) trees affected by CL were identified in small orchards in Southern Brazil. Rod-like particles of 40 × 100 nm and electron lucent viroplasm were observed in the nucleus of infected cells in symptomatic tissues. RNA extracts from three plants, which proved negative by RT-PCR for known CL-causing viruses, were analyzed by high throughput sequencing and Sanger sequencing after RT-PCR. The genomes of bi-segmented ss(?)RNA viruses, with ORFs in a typical organization of members of the genus Dichorhavirus, were recovered. These genomes shared 98?99% nt sequence identity among them but <73% with those of known dichorhavirids, a value below the threshold for new species demarcation within that genus. Phylogenetically, the three haplotypes of the new virus called citrus bright spot virus (CiBSV) are clustered with citrus leprosis virus N, which is a dichorhavirus transmitted by Brevipalpus phoenicis sensu stricto. In CiBSV-infected citrus plants, B. papayensis and B. azores were found, but the virus could only be transmitted to Arabidopsis plants by B. azores. The study provides the first evidence of the role of B. azores as a viral vector and supports the assignment of CiBSV to the tentative new species Dichorhavirus australis

Genômica da interação de citros com patógenos.

Como plantas perenes de propagação vegetativa, agravada pela estreita base genética, os citros estarão sujeitos a várias doenças de diferentes etiologias, comprometendo significativamente a produtividade e a competitividade da citricultura brasileira. Por outro lado, o melhoramento no grupo é limitado por fatores de ordem botânica, genética e horticulturais. Com os avanços no conhecimento sobre genomas, seja de plantas como de microrganismos patogênicos, ampliaram-se as possibilidades de um melhor entendimento das interações planta-patógeno, passando a ser importantes ferramentas de conhecimento, essenciaias na busca de novas abordagens de controle, incluindo o melhoramento genético. Ferramentas como bibliotecas de sequências expressas (EST e SSH), análise de expressão gênica global (microarranjos de DNA) ou específica (RT-pCPR), assim como informações genômicas o Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Genômica no Melhoramento de Citros atua nas plataformas de geração de informações sobre genomas, de interação planta-patógeno e de aplicação ao melhoramento com vistas a resistência a doenças como huanglongbing, clorose variegada dos citros (CVC), leprose, tristeza, mancha marrom de alternaria, cancro cítrico, gomose e tristeza. Os desafios de programas dessa natureza estão associados principalmente com a complexidade do modelo biológico, o grande volume de informações, a ausência de modelos alternativos validados e natural falta de recursos humanos em novas áreas. No patossistema CVC o foco tem sido a busca de genes da bactéria que estejam envolvidos no processo de formação de biofilme, assim como genes de resistência de tangerinas que são expressos no processo inicial de infecção. Interações Xanthomonas axonopodis pv citri com citros têm sido focalizadas na produção de mutantes da bactéria com reduzida capacidade de secreção de exoenzimas, essenciais no processo de infecção. Expressão de genes de Citrus tristeza vírus (CTV) tem sido avaliado em hospedeiros tolerantes e suscetíveis. Análise de expressão global com microarranjos de DNA a partir de genes únicos da base de dados do CitEST tem sido empregada para avaliar a resposta de laranja doce à infecção por Candidatus Liberibacter americanus e C. L. asiaticus, Citrus leprosis vírus (CiLV), e porta enxerto à infecção por Phytophthora parasítica. Proteoma de variedades tolerantes e suscetíveis à mancha marrom de alternaria, assim como plantas infectadas com CiLV tem sido também avaliado. Mais que a busca de soluções imediatas para graves problemas de doenças de citros, as informações de genoma representam a consolidação de informações básicas que permitirão a adoção de novas estratégias de manejo dessas doenças.Edição dos Resumos do XLII Congresso Brasileiro de Fitopatologia, Rio de Janeiro, ago. 2009. Suplemento. Mesa redonda 9