NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN INSULIN NGƯỜI Ở E. coli

SUMMARYInsulin is a hormone that produced by beta cells in the pancreas and regulated the glucose blood levels. Briefly, our strategy for the gene construction and expresion is described as follow. pET14bInsA vector contained gene A that encoding for the A peptide chain and pET14bInsB vector contained gene B that encoding for the B peptide chain. These vectors and the expression pET-32c(+) vector were digested by NcoI and BamHI. The released insulin A/B fragment and the opened plasmid pET-32c(+) were purified and ligated by T4 DNA ligase at 22oC, overnight. The resulting recombinant plasmid pET32cInsA/B was transformed into the E. coli BL21(DE3) strain. The expression of the  fusion protein was observed by induction with 1 mM IPTG and analysed by SDS-PAGE. Two new protein bands with the size of aproximately 22 kDa (equvalent the size  equvalent the size of fusion A) and 23 kDa (the size of fusion B) were then excised and digested with trypsin overnight. The results of identifying by NanoLC-MS/MS (Nano Liquid Chromatography – Tandem Mass Spectrometry) showed that the recombinant protein was truely the fusion A(B)-Trx that contained different peptides from chain A/B and thioredoxin. This result is an evidence to confirm the successful construction and expression of chain A/B of insulin in the fusion form in E. coli with pET-32c(+) vector.Key words. Insulin; pET-32 c(+); E. coli BL21 (DE3); NanoLC-MS/MS1. ĐẶT VẤN ĐỀInsulin là một hormone quan trọng có vai trò điều hòa đường huyết do các tế bào beta trong đảo Langerhans của tuyến tụy sản xuất [9]. Hàm lượng đường (glucose) trong máu là nguồn năng lượng thiết yếu cho cơ thể, nếu không duy trì ở mức bình thường có thể gây ra những căn bệnh nguy hiểm [3]. Khi đường huyết tăng có thể gây ra sự bài tiết đường qua nước tiểu, dẫn đến mất/thiếu hụt glucose, hiện tượng này còn gọi là bệnh đái tháo đường [7, 5]. Nguyên nhân là do sự thiếu hụt insulin hoặc vì một lí do nào đó cơ thể không thể sử dụng được insulin dẫn đến đường huyết tăng cao và gây đái tháo đường [8]. Bệnh đái tháo đường được chia làm hai loại là type I và type II [10]. Đái tháo đường type I là loại bệnh phụ thuộc insulin, thường gặp ở người trẻ tuổi ( 35 tuổi), lứa tuổi hay gặp nhất là 10 - 16 tuổi. Đây là một dạng bệnh nặng trong đó các tế bào của tuyến tụy có nhiệm vụ tiết insulin bị khiếm khuyết nên cơ thể không có insulin để sử dụng. Nếu không điều trị bằng cách tiêm insulin, bệnh nhân sẽ hôn mê và tử vong [8]. Đái tháo đường type II là loại đái tháo đường không phụ thuộc insulin, bệnh thường gặp ở người               40 tuổi, người béo phì, trong đó cơ thể vẫn sản xuất insulin nhưng vì một lí do nào đó không thể sử dụng được nó [4].Về cấu trúc, ở người phân tử insulin bao gồm hai chuỗi polypeptide: chuỗi A gồm 21 axit amin và chuỗi B gồm 30 axit amin [1, 2]. Hai cầu nối disulfide (vị trí A7 - B7, và A20 - B19) đồng hóa trị như hai sợi dây buộc chặt hai chuỗi với nhau, trong chuỗi A còn có một cầu nối disulfide giữa gốc A6 và A11 đảm bảo phân tử khá ổn định trong không gian. Đặc biệt là cả 3 cầu nối này đều bất biến ở tất cả các dạng insulin của động vật.Hiện nay, tình hình phát triển bệnh đái tháo đường ở Việt Nam cũng như trên thế giới đang có xu hướng tăng nhanh. Insulin là hormon đầu tiên được tổng hợp nhân tạo, được sản xuất bằng công nghệ DNA tái tổ hợp phục vụ điều trị bệnh này [14]. Năm 2005, nhu cầu insulin dùng trong trị bệnh đái tháo đường ước tính khoảng 4 đến 5 tấn và dự kiến năm 2010 là 16 tấn [12]. Nhu cầu về insulin của thế giới vượt qua con số vài tấn/năm và vì thế nguồn cung cấp insulin cho trị bệnh tiểu đường đang ngày càng thiếu hụt [13]. Trong bài báo này, chúng tôi trình bày một số kết quả nghiên cứu biểu hiện và xác định insulin người từ vector pET 32c (+).Từ khoá: Insulin; pET-32 c(+); E. coli BL21 (DE3); NanoLC-MS/M

Khả năng hấp phụ crom(III) bằng vật liệu compozit polyanilin-lignin

Polyaniline-lignin composite were prepared by polymerization of aniline in the presence of lignin using (NH4)2S2O8 as oxidant. Properties of the obtained polyaniline-lignin composite were studied by FT-IR spectra, thermal gravimetric analysis (TGA) and scanning electron microscopy (SEM). Results on absorption of Cr(III) by polyaniline-lignin composite showed the optimal absorption conditions of Cr(III) were pH of solution 5,0 and contact time of one hour. Absorption of Cr(III) followed the Langmuir model as evidenced by a good coefficient of correlation value (R2 = 0.9986). The maximum adsorption capacity, qmax from the Langmuir model was found to be 71.43 mg/g for Cr(III) and are higher than the separate polyaniline or lignin

Xây dựng và phát triển tập đoàn kinh tế ở Việt Nam : Sách chuyên khảo

285 tr. ; 21 cm