ORC4変異マウスを用いた個体レベルでの細胞周期研究

金沢大学学際科学実験センター昨年までにOrigin Recognition Complex (ORC)を構成するサブユニットの1つであるOrc4変異マウスが胎生4.5日目以降にアポトーシスを起こして致死となることを明らかにしたが、今年度はホモ変異胚をレスキューするためにloxP配列で挟んだOrc4遺伝子を導入したトランスジェニック(Tg)マウスの作出を行った。Orc4 cDNAをloxP配列で挟み、マーカー遺伝子としてInternal Ribosomal Entry Siteの制御下にGFPが発現するようにしたOrc4-GFPベクターを作製した。プロモーターにはCAGプロモーターとPGKプロモーターを用いた。まず、HeLa細胞およびNIH3T3細胞に導入して、GFPが発現することを確認した。次に、PGKプロモーター制御下にOrc4が発現するベクターを用いてTgマウスの作出を試みた結果、現在のところ2系統のTgマウスの作出に成功したが、内在性Orc4遺伝子のホモ変異マウスをレスキューするものは得られなかった。導入遺伝子由来のOrc4の発現を成体の臓器別に調べた結果、脳、小腸、筋肉、胸腺、脾臓、精巣では強い発現が確認できたが、心臓、肺、肝臓では弱い発現しか認められず、腎臓ではほとんど発現が認められなかった。内在性のOrc4はこれらの臓器においてほぼ同じレベルで発現していることから、ホモ変異マウスが生存できないのは導入遺伝子の発現が弱いためと考えられた。そこで、さらにTgマウスを作成すると共に、初期胚では導入遺伝子由来のOrc4の発現が十分であり、胚性幹細胞が樹立できる可能性があるので、ホモ変異胚の内部細胞塊培養を試みているところである。Orc4ホモ変異胚性幹細胞が樹立できれば、Creの発現によりOrc4を人為的に欠損させて、細胞周期やDNA複製におけるOrc4の役割を詳細に解析することができる。研究課題/領域番号:15657045, 研究期間(年度):2003 – 2004出典：「ORC4変異マウスを用いた個体レベルでの細胞周期研究」研究成果報告書　課題番号15657045（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-15657045/)を加工して作

β4-ガラクトース転移酵素-I欠損によるIga腎症発症機構の解析

金沢大学学際科学実験センターβ4GalT-I KOマウスが自然発症するIgA腎症の病態の進行を明らかにするために,生後2ヶ月齢から12ヶ月齢にわたって2ヶ月ごとに複数匹のマウスの腎臓切片を作成し,PAS染色による糸球体の病変領域の同定,PAM染色による糸球体硬化の程度,蛍光免疫染色によるIgAとC3の沈着程度について定量的な解析を行った。β4GalT-I KOマウスのIgA腎症病変は,生後2-3ヶ月齢ですでに75%の糸球体が分節性病変を示し,12ヶ月齢では25%の糸球体が全節性の病変に進行した。糸球体硬化も半年齢までは約20%の領域が,半年齢から1年齢では約30%の領域が硬化病変を示した。また,IgAとC3の沈着も生後3ヶ月齢から顕著に見られ,加齢と共に沈着の程度が進行した。以上のことからβ4GalT-I KOマウスは,2-3ヶ月齢の若年からIgA腎症を発症し,患者と同じように糸球体病変が進行することがわかった。これまでの結果と今年度の結果をまとめて,Am J Patholに論文として発表すると共に,平成15年4月に出願していた特許「IgA腎症の治療薬のスクリーニング方法」が,平成18年6月に登録された。一方,β4GalT-II KOマウスの乳腺の発達異常については,分娩前後の乳腺上皮の増殖が有意に低下していることを見いだし,乳腺上皮の初代培養系を樹立した。また,C57BL/6に戻し交配したβ4GalT-II KOマウスの一連の行動学的解析から,このマウスは情動性が低い傾向にあり,強い刺激の記録には問題がないが,正確な空間記憶に問題があり,運動学習にも顕著な障害があることが明らかとなった。脳での機能的糖鎖の発現を解析したところ,HNK-1の発現が顕著に低下していることがわかり,行動学的異常の一部はこれが原因であることが示唆された。研究課題/領域番号:17046005, 研究期間(年度):2005 – 2006出典：「β4-ガラクトース転移酵素-I欠損によるIga腎症発症機構の解析」研究成果報告書　課題番号17046005（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-17046005/)を加工して作

ノックアウトマウスを用いたIL-1の免疫反応及びストレス応答における機能解析

金沢大学医薬保健研究域医学系 / 東京大学IL-1の機能の全体像を明らかにする目的で,IL-1α IL-1β,IL-1RaKOマウス及びIL-1α/βダブルKOマウスを作製して,免疫系や神経系でのIL-1の機能について研究を行い,以下のような結果を得た。(1)IL-1βはテルピンによる発熱やグルココルチコイドの分泌に重要な役割を果たしているが,IL-1αはこれらの炎症反応にはあまり関与しないことを明らかにした。(2)アポトーシスを誘導するFasは,IL-1の作用を介して炎症反応を誘導することを明らかにした。(3)BALB/c背景のIL-1RaKOマウスは,ヒトの関節リウマチに類似した自己免疫性の関節炎を自然発症することを明らかとした。(4)HIV-1遺伝子の発現にIL-1とTNF-αが関与することを明らかにし,HIV-1発症にIL-1が関与する可能性が示唆された。5)他の研究室との共同研究により,脳虚血時の神経細胞のアポトーシスやCaspase-2が引き起こす生殖細胞のアポトーシスにIL-1がメディエーターとして作用していることを明らかとした。(6)IL-1βはT細胞依存性の抗体産生に重要な働きをしていることを明らかにした。IL-1βはT細胞上のCD40リガンドとOX40の発現を制御することによって,抗原提示細胞によるT細胞のプライミングを誘導していることが示唆された。一方,IL-αは抗体産生には関与しないことを明らかに。した。(7)IL-1αは接触過敏症反応の誘導に重要な役割を果たしており,特に,感作期において抗原特異的なT細胞の増殖を制御していることを明らかとした。一方,IL-1βはこの反応には関与しないことがわかった。(8)HTLV-1のトランスジェニックやコラーゲン誘導関節炎のモデルマウスにおいて,IL-1を欠損させると,関節炎の発症が抑制されることを明らかにした。IL-1 α, IL-1 β, IL-Ira KO and IL-1 α/β double KO mice were generated to elucidate pleiotropic function of IL-1 in an animal body, and roles of IL-1 in immune and stress responses were clarified as described below.(1) IL-1 β , but not IL-1 α, is crucial in terpentine-induced fever development and glucocorticoid secretion.(2) Inflammation induced by apoptosis inducer Fas ligand is mediated by IL-1 β which is released by caspase 1 independent mechanism.(3) Chronic inflammatory arthropathy resembling rheumatoid arthritis is spontaneously developed in IL-Ira KO mice on a BALB/c background.(4) LPS-induced HIV-1 expression in transgenic mice is mediated by TNF α and IL-1.(5) In collaboration with other laboratories, apoptosis in neural cells caused by ischaemia and apoptosis in germ cells caused by loss of ataxia telangiectasia-mutated (Atm) gene function are mediated by IL-1β.(6) T cell-dependent antibody production is regulated by IL-1 β, but not by IL-1 α, through induction of CD40L and OX40 on T cells.(7) IL-1α, but not IL-1β, is required for contact-allergen-specific T cell activation during the sensitization phase in contact hypersensitivity.(8) Suppression of autoimmune arthritis in IL-1 KO mice in which T cell activation is impaired due to low levels of CD40 ligand and OX40 expression on T cells.In support with the Grant-in-Aid for Scientific Research, various roles of IL-1 in fever development, stress response, antibody production, contact hypersensitivity, rheumatoid arthritis development and apoptosis of neural cells and germ cells were elucidated. These results and our IL-1 genes KO mice could be very useful to understand the mechanism of IL-1-mediated human diseases and to develop medical treatment for them.研究課題/領域番号:10670298, 研究期間(年度):1998 – 2000出典：研究課題「ノックアウトマウスを用いたIL-1の免疫反応及びストレス応答における機能解析」課題番号10670298（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-10670298/106702982001kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作

ノックアウトマウスを用いたガラクトース転移酵素遺伝子群の役割分担の解明

金沢大学学際科学実験センター細胞の増殖と分化には細胞間の相互作用が重要であり,細胞表面の糖鎖を介した相互作用はその中でも重要な機構の一つである。我々はβ-1,4-ガラクトース転移酵素-I(β4GalT-I)遺伝子KOマウスを作成して,生体内でのガラクトース糖鎖の役割を解析してきた。しかし,最近β4GalTが7つの遺伝子からなるファミリーを形成していることがわかり,β4GalT遺伝子群に役割分担があることがわかってきた。そこで,β4GalT-I KOマウスの糖鎖構造を詳細に解析して,β1,4-結合のGalを定量し、糖鎖生合成における細胞種ごとのβ4GalT-I遺伝子の寄与を検討した。次に、β4GalTが生合成に関与することが知られているセレクチンのリガンド糖鎖について解析し、その生合成におけるβ4GalT-Iの寄与を検討した。さらに、セレクチンが関与する炎症反応について、β4GalT-I KOマウスの応答性を解析し、β4GalT-I遺伝子の欠損が炎症反応に与える影響を明らかにした。また、皮膚創傷治癒過程におけるβ4GalT-I遺伝子欠損の影響を解析した。以上の結果、β4GalT-Iはセレクチンのリガンド糖鎖の生合成に重要な役割を担っており、β4GalT-I KOマウスでは、その欠損のために炎症反応の減弱や皮膚創傷治癒過程の遅延が生じたと考えられた。以上の解析はすべて交雑系のβ4GalT-I KOマウスを用いて行ったが、一方、近交系のβ4GalT-I KOマウスは胎生後期に致死となることを明らかにした。致死となる数日前から胎仔よりはむしろ胎盤の成長遅延が顕著に認められ、胎盤の異常が致死の原因であることが示唆された。このようにマウスの遺伝的背景により致死性が変化する理由として、他のβ4GalT遺伝子群による相補が考えられたので、他のβ4GalT遺伝子のKOマウスも作製して両者の役割分担の解析を現在進めている。Cell-to-cell, interactions are important for cell growth and differentiation. The interaction through cell surface carbohydrates is one of indispensable mechanisms among them. We have been studying on the role of carbohydrates in vivo by generating a gene knockout mouse deficient in β-1.4-galactosyhransferase-I(β4GalT-I). β4GalTs are recently found to form the gene family consisting of 7 genes, which have their own roles.We analyzed carbohydrate structures of β4GalT-I KO mice in detail. Contribution of β4GalT-I gene to the biosynthesis of carbohydrates of various cell types was estimated by measuring Gal residues in the β1,4-linkage. Next, carbohydrate ligands of selectins, which are known to be synthesized by β4GalTs and other glycosyltransferases, were analyzed in β4GalT-I KO mice. Contribution of β4GalT-I gene to their biosynthesis was also estimated. Furthermore, Inflammatory responses of β4GalT-I KO mice and the effect of β4GalT-I deficiency were examined. In addition, the effect of β4GalT-I deficiency on skin wound healing was examined. Our results indicated that β4GalT-I plays an important role in the biosynthesis of carbohydrate ligands of selectins and their deficiency results in reduction of inflammatory responses and delayed wound healing in β4GalT-I KO mice.While these results were obtained using β4GalT-I KO mice on mixed genetic backgrounds, we found β4GalT-I KO mice on inbred background to be lethal during late embryogenesis. Since growth retardation of the placenta rather than the embryo was remarkable several days before its death, the defect of placenta was suggested to be a cause of the embryonic lethality. Since the reason of changeable lethality depending on genetic background might be a compensatory activity by other β4GalTs, gene knockout mice deficient in another β4GalT gene were generated. Studies on elucidating the role of these p4GalT genes are in progress.研究課題/領域番号:13480280, 研究期間(年度):2001 – 2003出典：「ノックアウトマウスを用いたガラクトース転移酵素遺伝子群の役割分担の解明」研究成果報告書　課題番号13480280（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-13480280/134802802003kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/)を加工して作

自己免疫疾患におけるアスパラギンエンドペプチダーゼによる免疫記憶の調節

金沢大学学際科学実験センターアスパラギンエンドペプチダーゼ(AEP)は、AsnのC末端側で切断するシステインプロテアーゼであり、後期エンドソームからリソソームに局在する。最近、AEPは外来抗原や自己抗原(ミエリン塩基性タンパク質:MBP)のプロセッシングの初期過程を担うことを示唆する報告が相次いだ。しかし、これらの報告はAEP阻害剤を用いたin vitroの実験系であったので、AEP KOマウスを用いて、抗原のプロセッシングと抗原提示並びに免疫寛容の成立と破綻におけるAEPの役割を明らかにすることを本研究の目的とした。本年度は、MBPペプチドを用いた実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)発症におけるAEPの役割を中心に研究を進めた。EAEはMHC拘束性であるので,まずEAE感受性のSJL系統との交配によりH-2^sをホモに持つEAE感受性のAEP KOマウスを作出した。つぎにAEPの切断点を含むMBP_ペプチドを用いて、AEP KOマウスとコントロールマウスでEAEの発症を比較したが、発症率やピークスコア、発症日数に有意な差は認められなかった。MBP_ペプチドはcryptic-dominantなエピトープを中央に持つが、両端にはsub-dominantなエピトープを含むことと、カテプシンGの切断点も含んでいたので、現在各々のエピトープだけを持つペプチドでEAE発症を比較している。なお、マウスでは胸腺並びに末梢のB細胞において、AEPとカテプシンGは両方とも発現していることを明らかにした。一方、AEP KOマウスは、加齢と共に脾臓が異常に肥大することがわかった。赤脾随と白脾随の境界や濾胞構造が形成されず、リンパ球の比率が半分以下となり、未成熟な単球系や顆粒球系の細胞が異常に増加していた。抗原提示とどのように繋がるかは不明であるが、ヒトの疾患との関連も模索しながら原因解明を進めている。研究課題/領域番号:16043221, 研究期間(年度):2004出典：「自己免疫疾患におけるアスパラギンエンドペプチダーゼによる免疫記憶の調節」研究成果報告書　課題番号16043221（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-16043221/)を加工して作

糖転移酵素遺伝子欠損マウスを用いた発癌・転移における糖鎖機能の解析

金沢大学医薬保健研究域医学系癌細胞の表面には特徴的な糖鎖構造が見い出されており,それらが細胞のがん化や浸潤・転移に関連していると言われている。実際,癌細胞特異的な腫瘍抗原の多くは糖鎖抗原であり,腫瘍マーカーとして診断にも利用されている。しかし,今までの研究はこれらの糖鎖構造と細胞のがん化やその悪性度との相関関係を調べたものがほとんどであり,糖鎖が癌細胞の性質にどのような影響を与えているかはよくわかっていない。本研究では,我々が作製したβ-1,4-ガラクトース転移酵素-I(GalT-I)KOマウスを用いて,ルイス(Le)抗原などの腫瘍糖鎖抗原の構造の変化が,細胞のがん化と形成された腫瘍細胞の増殖や浸潤,転移などの性質に与える影響を明らかにする。そのために,本年度はこのマウスにおける基幹糖鎖構造の解析を行うと共に,化学発がん剤による誘発腫瘍から得た腫瘍細胞株の単離を行い,GalT-I遺伝子を再導入して双方の細胞株の性質の解析を行った。GalT-I KOマウスにおける血清糖タンパクの基幹糖鎖構造を調べたところ,GalT-1が合成に関与する2型糖鎖の合成量が低下していることに加え,通常は殆ど合成されていない1型糖鎖の合成量が顕著に増加していた。そこで,GalT-IKOマウスの皮膚に化学発癌剤を塗布して得た腫瘍から細胞を分離・株化し,その性状を解析した、発癌剤塗布により誘発したGalT-IKOの腫瘍に比べ,対照群では増殖の早い腫瘍が多い傾向が見られた。しかしながら腫瘍から細胞を株化して比較寸ると,増殖速度の差はむしろ株間の性質の多様性に負うところが大きかった。そこでGalT-IKOマウス由来腫瘍細胞株にGalT-1遺伝子を導入して比較したところ,細胞接着能に差は見られなかったが,in vitroでのmigration活性やinvasion活性は導入GalT-1遺伝子の発現量と相関した活性低下が観察された、今後はin vivoでの浸潤や転移能を解析して,どのような糖鎖構造ががん細胞の性質に影響を与えているかを明らかにしていく予定である。研究課題/領域番号:13216038, 研究期間(年度):2001出典：「糖転移酵素遺伝子欠損マウスを用いた発癌・転移における糖鎖機能の解析」研究成果報告書　課題番号13216038（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-13216038/)を加工して作

ガラクトース転移酵素遺伝子ノックアウトマウスを用いた糖鎖機能の解析

金沢大学医学部交雑系(129/Sv x C57BL/6)のGalT-I KOマウスは,予想に反して発生過程に問題はなく正常に発生した。そこでGalT-I欠損の影響を更に解析するために,近交系のマウスに8世代戻し交配したGalT-I KOマウスを作製した,すると驚いたことに,C57BL/6背景のKOマウスは出生時に100%死亡し,BALB/c背景のKOマウスは胎生後期に致死となることが明らかとなった。BALB/c背景のKO胎仔の死亡時期を明らかにするために,胎仔を経時的に取り出して解析したところ,胎生14.5日から16.5日の間に死亡することが明らかとなった。胎仔と胎盤の重量を測定して同腹のコントロールと比較したところ,KO胎仔は胎生14.5日では若干小さく,その後成長が止まって16.5日までに死亡した。それに対して胎盤は胎生12.5日ですでに小さい傾向が見られ,14.5日では有意に発達が遅延していた。胎盤の組織切片を解析したところ,母体と胎仔を繋ぐ海綿状栄養膜層が薄く,胎仔側の迷宮層の血管形成が不全で,血流が著しく減少していた。胎仔組織の解析がまだ終了していないが,胎盤の所見からBALB/c背景のGalT-I KOマウスは胎盤の発達に異常があるために,胎生後期に致死となることが示唆された。C57BL/6背景の胎仔は胎生17.5日から有意に成長の遅延が認められ,出生時の体重がコントロールの70%しかなく,未熟児の状態で出生することがわかった。新生児を調べると肺胞が全く膨らまずに死亡していたので,直接の死因は未熟児で出生するために肺呼吸に移行できないことであると考えられた。しかし出生前の胎盤を調べてみると程度は軽いもののBALB/c背景のGalT-I KOマウスと同じ異常が認められたので,このマウスも胎盤の発達異常が胎仔の成長遅延の原因と考えられた。以上の結果,GalT-Iが合成する糖鎖は胎盤の成長に必須であり,その機能はマウスの遺伝的背景により非常に強く影響を受けることが明らかとなった。研究課題/領域番号:12033202, 研究期間(年度):2000出典：研究課題「ガラクトース転移酵素遺伝子ノックアウトマウスを用いた糖鎖機能の解析」課題番号12033202（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-12033202/）を加工して作

The germline: its developmental cycle and epigenome network

金沢大学学際科学実験センターHP1Y欠損マウスを用いた解析から,HP1γは減数分裂時の相同染色体の対合(Takada,Naruse,et al.,Development,2011)及びPGCの増殖(Abe et al.,Biol Reprod,2011)に重要な役割を果たしていることを明らかにして論文として発表した。24年度は転写抑制性ヒストン修飾H3K27me3の脱メチル化酵素Jmjd3の解析を中心に進めた。Jmjd3欠損マウスは出生直後に致死となり,体軸形成に異常が認められた。体軸形成に重要な役割を担っているHox遺伝子群を中心に,定量RT-PCRやクロマチン沈降法を用いて,Jmjd3が体軸形成を制御するメカニズムを解析した。その結果,Jmjd3はHox遺伝子群に結合し,転写抑制マークのH3K27me3を脱メチル化することにより,一部のHox遺伝子群の発現をその発現開始時において制御していることを明らかにした(論文投稿中)。一方,Jmjd3欠損マウスの胎盤が過形成を生じることもわかった。Jmjd3欠損胎盤では胎盤特異的インプリント遺伝子群の発現が異常になっており,一部のインプリント遺伝子群の発現は,やはりJmjd3によるH3K27me3の脱メチル化で制御されていることを明らかにした(論文準備中)。Jmjd3欠損マウスは出生直後に致死であったので,生後の生殖細胞について解析することができなかった。そこでJmjd3-floxマウスと雄性生殖細胞で特異的にCreを発現するTNAP-Creマウスとを交配して,雄性生殖細胞特異的Jmjd3欠損マウスを作製したが,生殖細胞の異常は観察できなかった。研究課題/領域番号:23013012, 研究期間(年度):2011 – 201

The germline: its developmental cycle and epigenome network

金沢大学 学際科学実験センター(1)HP1γ変異マウスの始原生殖細胞(PGC)の解析HP1γはメチル化ヒストン(H3K9me)に結合するエピジェネティック制御因子の一つである。22年度はHP1γ変異マウスにおいてPGCの数が少ない原因をさらに追及した。PGCの運命決定や生殖隆起への移動,細胞死,ヒストン修飾に異常はなく,PGCの増殖に問題があることを明らかにした。E12.5の増殖期のHP1γ変異PGCはBrdUの取込みが有意に低下しており,フローサイトメトリーの解析からもHP1γ変異PGCはG1期に集積しており,S期への移行が抑制されていた。様々な細胞周期制御因子を解析したところ,HP1γ変異胚ではサイクリン依存性キナーゼ阻害活性を持つp21(Cip)を発現するPGCの割合が増加し,p21の集積がG1/S期移行の遅延を引き起こしている可能性が示唆された。しかしながらE11.5の野生型PGCとHP1γ変異PGCとのマイクロアレイ解析では,他の細胞周期制御遺伝子の発現に有意な違いは見られなかった。以上の結果をまとめて論文を投稿したところ,いくつかの追加実験を求められた。特にPGCの数の減少が最初に認められるE7.25のHP1γ変異PGCでもBrdUの取込みが低下していること,PGCのin vitro培養系でもHP1γ変異PGCの増殖が低下していることを明らかにして再投稿を行った。(2)ヒストン脱メチル化酵素の欠損マウスの作製ヒストンのメチル化はエピジェネティックな制御の中心的な役割を果たしているが,脱メチル化酵素はまだ不明な点が多い。二つの脱メチル化酵素遺伝子についていわゆるfloxマウスを作製し,TNAPCreマウスと交配することにより,生殖細胞特異的に欠損したマウスを作製している。これらの生殖細胞の解析は,次の2年間の本特定領域の研究テーマとして解析を進める予定である。研究課題/領域番号:21028007, 研究期間(年度):2009 – 201

改良遺伝子トラップ法による新規発生制御遺伝子の単離と機能解析

金沢大学学際科学実験センター哺乳類の発生システムを理解するために、原腸陥入・中胚葉形成期に働く転写因子の下流に存在する発生制御遺伝子を、改良遺伝子トラップ法によって単離して、機能を解析することが本研究の目的である。Brachyury、HNF-3β、Pax1により発現調節されると考えられる遺伝子をトラップしたES細胞が4クローン得られたが、これまでに、Heterochromatin Protein(HP)1γとWilms\u27 tumor 1-associating protein (WTAP)をトラップしたクローンより生殖系列キメラマウスが得られ、遺伝子変異マウスの作成に成功した。ヘテロ同士の交配を行ったところ、WTAPホモ変異マウスは胎生期に完全に致死であること、HP1γホモ変異マウスもごく一部生存するもののほとんどが胎生期に致死であることがわかり、改良遺伝子トラップ法により発生に必須の遺伝子が単離されてくることがわかった。トラップベクター内の発現マーカーであるLacZを用いて、それぞれの胚における発現パターンを調べた結果、HP1γは受精後5.5日より、WTAPは受精後3.5日より発現が検出でき、両遺伝子とも発生の非常に早い時期から発現が認められた。現在、死亡時期の同定と死亡原因の解明を行っているが、両遺伝子とも発生初期に重要な役割を担っている可能性が考えられる。今後、発生過程での発現パターンを詳細に明かにして、スクリーニングに用いたBrachyury、HNF-3β、Pax1によって、その発現が制御されているかどうかも明かにして行く予定である。研究課題/領域番号:14034218, 研究期間(年度):2002 – 2003出典：「改良遺伝子トラップ法による新規発生制御遺伝子の単離と機能解析」研究成果報告書　課題番号14034218（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-14034218/)を加工して作