Implication of AMPK in glucose-evoked modulation of Na,K-ATPase

Background and aims: Na,K-ATPase is an integral membrane protein that maintains the gradients of Na+ and K+, using the energy of ATP hydrolysis, maintaining the ionic gradients that allow electrical activity to occur. It has been demonstrated that, in pancreatic β-cells, Na,K-ATPase is regulated by glucose and that this phenomenon is impaired in glucose intolerant subjects. However, the mechanism underlying glucose-induced modulation of Na,K-ATPase is still unclear. The AMP-activated protein kinase (AMPK) is a molecular key player in energy homeostasis, providing exquisite sensitivity to small changes in intracellular AMP levels and thus to intracellular [ATP]/[ADP] ratio, that is known to activate protein regulatory pathways. Since in pancreatic β-cell, glucose has marked effects on oxidative metabolism and total intracellular ATP and AMP levels, the involvement of AMPK in the cascade of events regulating Na,K-ATPase regulation in pancreatic β-cells was postulated. The aim of this work was to evaluate the putative role of AMPK in the glucose-evoked regulation of Na,K-ATPase activity in the pancreatic β-cell. Materials and methods: Pancreatic -cells from normal (control) or glucose-intolerant Wistar rats (GIR) were isolated and cultured (48h). Cell batches were pre-incubated (30min) with 2.1mM glucose to reach basal activity. Afterwards cells were challenged to 8.4mM glucose for 20min, in the presence or absence of AMPK agonists (AICAR) and antagonists (compound C; CC). ATPase activity was assessed in intact cells by colorimetric quantification of Pi formed in 30min. Na,K-ATPase activity was calculated by the difference between the activities obtained in the absence and in presence the of 1mM ouabain. Results: In basal conditions the activity of Na,K-ATPase from normal and GIR pancreatic β-cell was similar (0.184±0.030 and 0.186±0.020 molPi/min/mgProt, respectively). Challenging the control β-cells with glucose 8.4mM evoked a 62% reduction of Na,K-ATPase activity whereas in GIR β-cells a significantly lower inhibition (40%) was observed. The addition of AICAR 1mM abolished glucose-induced Na,K-ATPase inhibition (0,166±0.011 molPi/min/mg). In control β-cell, the addition of CC 10 μM had no effect on glucose-induced inhibition of Na,K-ATPase. In the contrary, in GIR β-cells it significantly potentiated glucose-evoked inhibition of Na,K-ATPase reaching values similar to that observed in the controls (66%). Conclusions: The AMPK agonist AICAR counteracts the inhibitory action of glucose on Na,K-ATPase of control β-cells whereas CC amplified the glucose-induced inhibition of Na,K-ATPase in GIR β-cells. These results suggest that AMPK plays a central role in the cascade of events underlying glucose-induced modulation of Na,K-ATPase and that the defect must be upstream of AMPK. Finally, abnormal glucose-induced regulation of Na,K-ATPase occurs prior to overt type 2 diabetes and might be a feature in the disease development

Abnormal regulation of Na,K-ATPase in Glucose Intolerant Rats.

Introduction: Glucose is the most important physiological insulin secretagogue. However, the mechanisms underlying glucose-induced insulin release are not fully understood. The role of electrogenic systems such as ionic pumps, to these events remains essentially uninvestigated. Na,K-ATPase, responsible for maintaining Na+ and K+ gradients across the plasma membrane and generates a net outward current, thus changes in its activity may contribute to the early ionic events regulating insulin secretion (Therien and Blostein, 2000). Objective: The aim of this work was to evaluate the regulation of Na,K-ATPase activity by glucose in intact -cells of normal and glucose intolerant (GI) rats and its putative contribution to the regulation of insulin secretion. Material and Methods: Pancreatic -cells, from normal or control or GI rats, were isolated and cultured (48h). Cell batches were pre-incubated (30min) with 2mM glucose to reach basal. Afterwards cells were challenged with glucose in the interval 0-11mM for 60min, for dose-dependence evaluation, or with 8mM glucose for 5-120min, for time-dependence evaluation. ATPase activity was assessed in intact cells by colorimetric quantification of Pi formed in 30min. Na,K-ATPase activity was calculated by the difference between the activities obtained in the absence and in presence the of 1mM ouabain (Costa et al., 2009). Results: In β-cells from normal rats, glucose induced a bimodal regulation of Na,K-ATPase. In the absence of glucose, Na,K-ATPase activity was 0.056±0.015 U/mg. Stimulation with 2mM glucose induced an increase of Na,K-ATPase activity of ~4 fold whereas for [glucose] above 2mM it was observed a significant inhibition of Na,K-ATPase activity (0.061±0.013, 0.080±0.009 and 0.064±0.005 U/mg for 5.6, 8.4 and 11mM glucose, respectively, compared to 0.188±0.035 U/mg observed in 2mM G; n=3-8). β-cells from GI rats does not present this profile; in the absence of glucose, Na,K-ATPase activity was 0.202±0.036 U/mg and no significant differences from this value were observed with the other glucose concentration tested. Addicionally, in β-cells from normal rats, glucose (8mM) induced a time-dependent inhibition, with a biphasic profile, of Na,K-ATPase - it was observed a decrease in the pump activity between 0 and 20min stimulation where it reached a minimum value (77%). For incubation periods over 20min, the pump activity slowly and partially recovered (54%, 55% and 52%, for 30, 60 and 120min, respectively; n=7). In β-cells from GI animals, an less accentuated decrease of Na,K-ATPase activity between 0 ans 20min was also observed (34%), and is not observed further recover in activity. Conclusions: This work demonstrates there Na,K-ATPase is strictly regulated by glucose in pancreatic β-cell. This regulation is unpaired in GI animals. Na,K-ATPase contribution to glucose-induced ionic events and insulin secretion might be relevant and must be explored as a possible therapeutic target in TD2 . 1. Therien AG, Blostein R (2000) Mechanisms of sodium pump regulation. Am J Physiol Cell Physiol 279:C541-C566 2. Costa AR, Real J, Antunes CM, Cruz-Morais J (2009) A new approach for determination of Na,K-ATPase activity: application to intact pancreatic beta-cells. In Vitro Cell Dev Biol Ani

Estudo para o desenvolvimento de métodos para quantificação de Phl p5 em amostras de ar exterior colhidas na cidade de Évora

Estudo para o desenvolvimento de métodos para quantificação de Phl p5 em amostras de ar exterior colhidas na cidade de Évora R Ribeiro1, CM Antunes1,4 & R Brandão2,3 1Departamento de Química, 2Instituto de Ciências Agrárias e Ambientais Mediterrânicas (ICAAM); 3Departamento Biologia, Universidade de Évora, Largo dos Colegiais 2, 7000 Évora UE; 4Centro de Neurociências e Biologia Celular (CNC), Universidade de Coimbra, 3004-517 Coimbra; [email protected] As doenças alérgico-respiratórias decorrentes da exposição a pólenes na atmosfera constituem na actualidade um problema de saúde pública, afectando cerca de 40% da população europeia. Em Portugal, os pólenes das gramíneas são uma das principais fontes de aeroalergénios atmosféricos, sendo o Phl p5 o principal alergénio da família Phleum pratense. e responsável por 80 a 90% das rinites e asma brônquica que atingem das crianças e adolescentes e 40 a 50% dos adultos já asmáticos. Assim, a realização de estudos para o desenvolvimento de metodologias que permitam prever o potencial alergénico da atmosfera e assim contribuir para desenvolver estratégias de prevenção da patologia alérgica são muito relevantes. Neste trabalho pretende-se desenvolver um teste imunoquímico para detecção e quantificação do alergénio Phl p5. Numa plataforma meteorológica situada no centro da cidade de Évora (Colégio Luís António Verney, Fase III), foram monitorizados em simultâneo e diariamente o conteúdo polínico atmosférico de Poaceae e o aeroalergénio Phl p5. Para a contagem dos primeiros, utilizou-se um colector volumétrico do tipo “Hirst” (Burkard Seven Day Recording Volumetric Spore Trap) e os segundos foram monitorizados mediante a utilização de um colector de impacto de médio volume (CHEMVOL) com filtros de poli-uretano, entre os dias 30 de Abril e 8 de Julho de 2009. Após extracção, a quantificação dos aeroalergénios efectuou-se mediante uma técnica de ELISA tipo “sandwich”, utilizando anticorpos específicos. Durante a época polínica de 2009 observaram-se níveis elevados de pólenes de gramíneas (entre 2 de Maio e 1 de Junho de 2009). Observou-se ainda que o conteúdo de alergénio Phl p5 estava directamente correlacionado com as contagens polínicas de pólenes de Poaceae. Estes resultados sugerem que a quantificação directa dos aeroalergénios pode contribuir, em conjunto com as contagens polínicas, para definir com melhor precisão do risco alérgico. Este estudo prosseguirá na época polínica de 2010 com vista à certificação do método. Agradecimentos: Este trabalho realiza-se no âmbito do projecto europeu HIALINE (“grant agreement” 20081107 II.5.1)

Estudo para o desenvolvimento de métodos para quantificação de Ole e1 em amostras de ar exterior colhidas na cidade de Évora

Estudo para o desenvolvimento de métodos para quantificação de Ole e1 em amostras de ar exterior colhidas na cidade de Évora. R Ferro1*, CM Antunes1,4 & R Brandão2,3 1Departamento de Química, 2Instituto de Ciências Agrárias e Ambientais Mediterrânicas (ICAAM); 3Departamento Biologia, Universidade de Évora, Largo dos Colegiais 2, 7000 Évora UE; 4Centro de Neurociências e Biologia Celular (CNC), Universidade de Coimbra, 3004-517 Coimbra; [email protected] As doenças alérgico-respiratórias decorrentes da exposição a pólenes na atmosfera representam um dos principais problemas clínicos da actualidade, afectando cerca de 40% da população europeia. Em Portugal, a polinização da oliveira é seguramente uma das principais fontes de aeroalergénios atmosféricos e consequentemente uma das maiores causas de alergia respiratória, sendo a Ole e1 a glicoproteína mais abundante do grão de pólen e o alergénio que mais significativamente contribui para o grau de alergenicidade deste pólen. Assim, o desenvolvimento de metodologias que permitam prever o potencial alergénico da atmosfera são da maior relevância já que poderão contribuir para desenvolver estratégias de prevenção da patologia alérgica. Neste trabalho pretende-se desenvolver e optimizar testes imunoquímicos para detecção e quantificação de Ole e1. Numa plataforma meteorológica situada no centro da cidade de Évora (Colégio Luís António Verney - Fase III), foram monitorizados em simultâneo e diariamente o conteúdo polínico atmosférico da Olea europaea e do aeroalergeno Ole e1. Para a contagem do primeiro, utilizou-se um colector volumétrico do tipo “Hirst” (Burkard Seven Day Recording Volumetric Spore Trap) e o segundo foi monitorizado mediante a utilização de um colector de impacto de médio volume (CHEMVOL) com filtros de poli-uretano, entre os dias 30 de Abril e 8 de Julho de 2009. Após extracção, a quantificação do aeroalergénio efectuou-se mediante uma técnica de ELISA tipo “sandwich”, utilizando um anticorpo específico. Durante a época polínica de 2009, observaram-se níveis elevados de pólen de oliveira entre 2 de Maio e 30 de Maio. Observou-se ainda que o conteúdo do alergénio Ole e1 estava directamente correlacionado com as contagens polínicas de Oleaceae. Estes resultados sugerem que a quantificação directa dos aeroalergénios pode contribuir, em conjunto com as contagens polínicas, para definir com melhor precisão o risco alérgico. Este estudo continuará na época polínica de 2010 com vista à certificação do método. Agradecimentos: Este trabalho realiza-se no âmbito do projecto europeu HIALINE (“grant agreement” 20081107 II.5.1)

Glucose-evoked Na+,K+-ATPase modulation in pancreatic ß-cells from normal and impaired glucose tolerance: role of AMPK

Na+,K+-ATPase is regulated by glucose in pancreatic ß-cells, a process that is altered in glucose impaired tolerance. Although AMP dependent protein kinase (AMPK), a metabolic sensor, is believed to be central in the signal transduction cascade underlying the Na+,K+-ATPase regulation in pancreatic β-cells, its role remains unknown. The aim of this work was to clarify the role of AMPK in glucoseevoked inhibition of Na+,K+-ATPase and to evaluate whether AMPK is differently regulated in pancreatic β-cells from subjects with normal and impaired glucose tolerance. Pancreatic β-cells or islets from normal (control) or glucose-intolerant Wistar rats (GIR) were isolated and cultured. After a pre-incubation (30min) with 2.1mM glucose (G2), batches were challenged for 20min with 2.1 or 8.4mM glucose (G8) in the presence or absence of AMPK agonist (AICAR, 1mM) and antagonist (Compound C (CC), 10μM). Na+,K+-ATPase activity was assessed by quantification of Pi, in the absence and in presence of 1mM ouabain. Phosphorylation levels of α1 subunit of Na+,K+-ATPase- (Ser-23) and αAMPK-(Thr-172) was evaluated by Western blot (WB). In G2 Na+,K+-ATPase activity from normal and GIR β-cell was similar (0.184±0.030 and 0.186±0.020 μmolPi/min/mgProt, respectively). Challenging the β-cells with G8 evoked a lower inhibition of Na+,K+- ATPase activity in GIR (40%) compared to controls (62%). In control β-cell, AICAR abolished glucoseinduced Na+,K+-ATPase inhibition (0,166±0.011 μmolPi/min/mg) whereas CC had no effect. In the contrast, CC significantly potentiated glucose-evoked inhibition of Na+,K+-ATPase in GIR β-cells, reaching values similar to the controls (66%), For both GIR and control islets, G8 induced a 50% decrease of AMPK phosphorylation level compared to G2. CC mimicked the effect of G8, but was less efficient in GIR. Concomitantly, α1-Na+,K+-ATPase-(Ser-23) phosphorylation level was increased upon G8 or CC stimulation, compared to G2 or AICAR. These results suggest that AMPK plays a key role in the signaling mechanism underlying glucoseinduced modulation of the pump, a process dependent on phosphorylation cascades, and that the defect in GIR must be upstream of AMPK. Glucose-induced inhibition of Na+,K+-ATPase may result from AMPK inhibition by the fuel metabolism and subsequent activation of PKC, known to phosphorylate α1-Na+,K+-ATPase-(Ser-23). This mechanism is impaired in GIR, thus potentially contributing to the impaired glucose-induced insulin secretion in IGT. Occurring prior to overt type 2 diabetes, this might be a feature in the disease development

Caracterização do nível de consciência fonológica em crianças de idade pré-escolar. Contributo para validação de um instrumento de avaliação

Dissertação apresentada para cumprimento dos requisitos necessários à obtenção do grau de Mestre em Desenvolvimento e Perturbações da Linguagem na Criança – Área de Especialização em Terapia da Fala e Perturbações da Linguagem/Educação e Ensino da LínguaA consciência fonológica consiste na capacidade de mobilizar a atenção do sujeito permitindo-lhe refletir e manipular as unidades fonológicas da língua. À medida que a criança vai desenvolvendo a habilidade fonológica, apercebe-se da natureza segmental da linguagem, tornando-se cada vez mais consciente de que a fala é composta por palavras e sílabas, e por sua vez estas são constituídas por elementos mais pequenos, os fonemas. Estudos recentes continuam a evidenciar a relevância do desenvolvimento da consciência fonológica em idade pré-escolar, bem como da sua relação com o sucesso na leitura. Nesta dissertação pretendeu-se averiguar o desenvolvimento fonológico de crianças falantes de português europeu em idade pré-escolar, nos seus diferentes níveis (silábico, intrassilábico e fonémico), bem como em outras dimensões fonológicas (consciência lexical e consciência de acento), recorrendo a um instrumento de avaliação da consciência fonológica em fase de construção. Este estudo procurou ainda averiguar a validade e fiabilidade do instrumento elaborado para o efeito. Em particular, investigou-se a capacidade do instrumento discriminar níveis de desenvolvimento de consciência fonológica, verificar a adequação das provas aplicadas nas diferentes faixas etárias e avaliar a coesão entre os itens. Foram descritos os dados obtidos com a aplicação do instrumento a 104 crianças de idade pré-escolar, entre os 3 e os 6 anos, falantes monolingues do português europeu, com desenvolvimento típico da linguagem e boa capacidade de discriminação auditiva. Estes dados foram analisados segundo o grupo etário e níveis de desenvolvimento fonológico. Os principais resultados encontrados confirmam a hipótese de que o desempenho da consciência fonológica melhora com o aumento da idade e que as provas em que as crianças apresentam maior êxito correspondem aos níveis de consciência silábica e intrassilábica; porém, o seu desempenho varia com o tipo de tarefa realizada. Verificou-se também que em idade pré-escolar as crianças são ainda pouco sensíveis à consciência de palavra e de acento. Conclui-se ainda que o instrumento é válido na avaliação da consciência fonológica e apresenta uma boa coesão entre os itens

Caracterização do nível de consciência fonológica em crianças de idade pré-escolar

Dissertação de Mestrado em Desenvolvimento e Perturbações da Linguagem na Criança, área de especialização em Terapia da Fala e Perturbações da LinguagemA consciência fonológica consiste na capacidade de mobilizar a atenção do sujeito permitindo-lhe refletir e manipular as unidades fonológicas da língua. À medida que a criança vai desenvolvendo a habilidade fonológica, apercebe-se da natureza segmental da linguagem, tornando-se cada vez mais consciente de que a fala é composta por palavras e sílabas, e por sua vez estas são constituídas por elementos mais pequenos, os fonemas. Estudos recentes continuam a evidenciar a relevância do desenvolvimento da consciência fonológica em idade pré-escolar, bem como da sua relação com o sucesso na leitura. Nesta dissertação pretendeu-se averiguar o desenvolvimento fonológico de crianças falantes de português europeu em idade pré-escolar, nos seus diferentes níveis (silábico, intrassilábico e fonémico), bem como em outras dimensões fonológicas (consciência lexical e consciência de acento), recorrendo a um instrumento de avaliação da consciência fonológica em fase de construção. Este estudo procurou ainda averiguar a validade e fiabilidade do instrumento elaborado para o efeito. Em particular, investigou-se a capacidade do instrumento discriminar níveis de desenvolvimento de consciência fonológica, verificar a adequação das provas aplicadas nas diferentes faixas etárias e avaliar a coesão entre os itens. Foram descritos os dados obtidos com a aplicação do instrumento a 104 crianças de idade pré-escolar, entre os 3 e os 6 anos, falantes monolingues do português europeu, com desenvolvimento típico da linguagem e boa capacidade de discriminação auditiva. Estes dados foram analisados segundo o grupo etário e níveis de desenvolvimento fonológico. Os principais resultados encontrados confirmam a hipótese de que o desempenho da consciência fonológica melhora com o aumento da idade e que as provas em que as crianças apresentam maior êxito correspondem aos níveis de consciência silábica e intrassilábica; porém, o seu desempenho varia com o tipo de tarefa realizada. Verificou-se também que em idade pré-escolar as crianças são ainda pouco sensíveis à consciência de palavra e de acento. Conclui-se ainda que o instrumento é válido na avaliação da consciência fonológica e apresenta uma boa coesão entre os itens.Abstract: Phonological awareness is the ability to prompt the attention of the subject allowing him to reflect and manipulate phonological units of the language. As the child develops the phonological awareness, she notices the segmental nature of language, becoming increasingly aware that speech is composed of words and syllables, and these in turn are composed of smaller elements, the phonemes. Recent studies continue to show the relevance of the development of phonological awareness in preschool, as well as its relationship to reading success. This dissertation aims at investigating the phonological development of european portuguese speaking children in preschool, in its different levels (syllabic, and phonemic intrasylabic) as well as in other phonological dimensions (lexical and word stress awareness), by using an instrument for the assessment of phonological awareness under construction. Therefore, it contributes for the validity and reliability study of the instrument. In particular, we investigate the ability of the instrument to discriminate levels of development of phonological awareness, checking the adequacy of the tests applied in different age groups and evaluate the consistency among the items. The sample includes 104 preschoolers aged between 3 and 6 years, monolingual speakers of european portuguese, with typical language development and good auditory discrimination ability. Analises were performed considering age group and level of phonological awareness level. The main findings confirm the hypothesis that the performance of phonological awareness improves with age and that preeschollers are more successful corresponds to levels of syllabic and intrasyllabic awareness, but their performance varies with the type of task performed. It was also found that preschool-age children are still not sensitive to speech and accent awareness. It was also concluded that the instrument is valid in the assessment of phonological awareness and presents a good cohesion between items

Subsídios do governo no âmbito do SNC - NCRF 22

Mestrado em Contabilidade - AuditoriaA globalização dos mercados, articulada com a abertura das fronteiras dentro da UE, e com a diversidade de sistemas contabilísticos, acentuou a necessidade de criar um único sistema contabilístico que fosse aceite internacionalmente e, ao mesmo tempo, que facilitasse o acesso aos mercados de capitais internacionais. Em Portugal, a normalização contabilística, sob a forma de um plano de contabilidade, iniciou-se em Portugal há mais de 30 anos, coma aprovação em 1977 do primeiro Plano Oficial de Contabilidade, que viria a ser reformulado em 1989, 1991, 1995 e 2005, culminando em 2010 com a sua total substituição por um novo Sistema de Normalização Contabilístico. Constata-se que os procedimentos contabilísticos impostos pelo SNC, no caso particular da NCRF 22 - Contabilização dos Subsídios do Governo e Divulgação de Apoios do Governo, são mais exigentes e pormenorizados do que os previstos no anterior sistema normativo nacional, em vigor até 31/12/2009. Apresentando um relato financeiro mais moderno e internacional e que melhora a informação financeira prestada a quem dela necessita, a aplicação da NCRF 22 permite, às entidades nacionais, evidenciar indicadores financeiros efectivamente equivalentes aos que são apresentados por outras entidades, de outros países, tais como Espanha, França e Bélgica, onde o tratamento contabilístico dos subsídios relacionados com activos não segue o preconizado na actual IAS 20 - Contabilização dos Subsídios do Governo e Divulgação de Apoios do Governo, possibilitando assim, a nível europeu e internacional, um melhor e maior acesso, quer a financiamentos, quer a concursos, bem como, potenciar o aumento da competitividade das empresas portuguesas, no que concerne à capacidade de reporte das suas demonstrações financeiras, em ambiente de concorrência, para uma melhor captação de fontes de financiamento internacionais.The globalization of markets together with the opening of frontiers inside the EC and the diversity of accounting systems have enhanced the necessity for the creation of only one accounting system which would be internationally accepted and, at the same time, would facilitate the access to international capital markets. In Portugal, the accounting standards process took the form of a chart of accounts and appeared more than thirty years ago when in 1977 the first Official Chart of Accounts was approved; it would be reformulated in 1989, 1991, 1995 and 2005 when it was finally entirely substituted by a new Accounting Standards System (SNC). It can be observed that the accounting procedures imposed by SNC, particularly concerning NCRF 22 – Accounting for Government Grants and Disclosure of Government Assistance – are more demanding and detailed than those prescribed by the former national standards system in force until 31st December 2009. NCRF 22 offers a more modern and international financial report and provides more precise financial information; in addition, its application allows national entities the ability to highlight financial indicators accurately equivalent to the ones presented by entities from other countries such as Spain, France and Belgium, where accounting treatment of subsidies related to assets does not follow what is advised in the current IAS-20 – Accounting for Government Grants and Disclosure of Government Assistance, therefore permitting at an European and international level a better and wider access either to financing or to tenders, as well as to assistance in the increase of competiveness of Portuguese companies concerning their capacity to carry forward their financial reports through international financing sources in a highly competitive environment

Alterações na modulação da Na,K-ATPase pela glicose em célula β-pancreática de animais intolerantes à glicose.

Alterações na modulação da Na,K-ATPase pela glicose em célula β-pancreática de animais intolerantes à glicose AR Costa1,2, CM Antunes1,3, J Cruz-Morais1,2 1Departamento de Química, 2Instituto de Ciências Agrárias e Ambientais Mediterrânicas (ICAAM), Universidade de Évora, Largo dos Colegiais 2, 7000 Évora; 3Centro de Neurociências e Biologia Celular (CNC), Universidade de Coimbra, 3004-517 Coimbra;[email protected] A diabetes tipo 2 é uma síndrome metabólica, que se caracteriza por alterações da secreção ou acção da insulina, cujas bases bioquímicas não estão completamente esclarecidas. Na célula-, a resposta fisiológica à glicose envolve a despolarização, resultante principalmente do fecho de canais de K+ sensíveis ao ATP, seguido do influxo de Ca2+ por canais sensíveis à voltagem tipo-L e consequente aumento da concentração intracelular de Ca2+, necessário à exocitose da insulina, hormona responsável pela homeostasia da glicose. A Na,K-ATPase (ou bomba de sódio), é o sistema de transporte activo responsável por manter o gradiente transmembranar de Na+ e K+. Estudos recentes têm sugerindo que a inibição da Na,K-ATPase possa contribuir para a despolarização induzida por glicose. Como o acoplamento estímulo-secreção se encontra alterado em célula- de animais diabéticos, proposemo-nos estudar a participação da Na,K-ATPase neste mecanismo utilizando um modelo de pré-diabetes que se caracteriza essencialmente por apresentar alterações na curva de tolerância à glicose. Para isso, desenvolveu-se um método que permite avaliar a actividade da bomba em células β-pancreáticas primárias, mantidas em culturas aderentes, que preservam os processos de transdução de sinal. Com este método observámos que a glicose inibe a Na,K-ATPase em animais normais, estando este processo significativamente atenuado em animais pré-diabéticos. Observámos ainda que a secreção de insulina estimulada por glicose, nas células de pré-diabéticos, é cerca de 4 vezes menor relativamente aos controlos. Estes dados permitem-nos sugerir que a regulação da bomba por glicose se encontra modificada em animais pré-diabéticos, podendo contribuir para as alterações dos mecanismos iónicos responsáveis pelo acoplamento estímulo-secreção, nomeadamente na cinética da despolarização, comprometendo a secreção de insulina. O trabalho prossegue no sentido de esclarecer os mecanismos através dos quais a glicose induz inibição na Na,K-ATPase, bem como no levantamento dos factores que podem contribuir para as diferenças observadas entre os animais normais e pré-diabéticos, nomeadamente ao nível da expressão isoenzimática

Estudo de caso: viabilidade de um pequeno negócio de contabilidade

Este trabalho tem como o grande objectivo encontrar caminhos para a viabilização de um pequeno negócio de contabilidade, situado na região centro. A metodologia empregue foi o estudo de caso, complementado com um inquérito para conhecer a realidade do sector onde se insere este gabinete. A revisão da literatura é reveladora da necessidade de planeamento estratégico para as PME´s, sendo fundamental a sua aplicação para atingir o sucesso nos negócios. Tendo isto em conta, efectuou-se a análise estratégica do gabinete com ajuda dos dados do mesmo e dos recolhidos no inquérito, utilizando a metodologia relativa ao planeamento estratégico desenvolvida na revisão bibliográfica. Desta análise, concluiu-se que a viabilização do gabinete depende de se incrementar o número de clientes, por via da divulgação dos serviços do gabinete junto dos organismos promotores do empreendedorismo; de se promover o contacto pessoal com o cliente ou futuros clientes; de se criar incentivos ao marketing boca-a-boca e divulgá-los junto de clientes existentes; de se desenvolver de um manual de controlo da qualidade para garantir regularidade da qualidade dos serviços e de se continuar o investimento em formação