17 research outputs found
Razvoj SPE-HPLC-DAD metode za određivanje florfenikola i florfenikol amina u cerebrospinalnoj tekućini svinja
A study of florfenicol (FF) and its metabo- lite florfenicol amine (FFA) in pig cerebrospinal fluid was conducted following repeated intramuscular administration of the original (reference) and a generic veterinary medicinal product (VMP) under the same experimental conditions (20 mg FF/kg body weight, 48-hour interval). Both VMPs are solutions for injection containing FF as an active substance in the concentration of 300 mg/mL and have been authorized in Croatia for use in cattle and pigs. In this study, clinically healthy pigs were randomly divided into three groups. The first group was treated with the reference VMP, the second with the generic VMP, while the third served as the control group. Animals were sacrificed at 216, 288 and 384 hours after the first drug administration. Cerebrospinal fluid samples were analysed by the optimized and validated high-performance liquid chromatography-diode array detector method (HPLC-DAD). The solid-phase extraction (SPE) technique was chosen for sample preparation. The HPLC-DAD method provides good linearity over the concentration range of 0.05 to 5.00 μg/mL for FF and FFA. Limits of detection were 0.0023 μg/mL for FF and 0.0100 μg/mL for FFA. Extraction recoveries of FF were from 86.6% to 111.8%, and of FFA from 91.7% to 98.8%. The SPE-HPLC-DAD method has been demonstrated to be a selective, sensitive and suitable analytical method for the determination of FF and FFA in cerebrospinal fluid. The present study was based on a preliminary study that quantified FF in pig plasma at 216 hours after the first application of reference or generic VMP. However, FF and FFA were not detected in any of the cerebrospinal fluid samples during the experimental period. According to the nature of biological fluids, the SPE-HPLC-DAD method can be suitable for further pharmacokinetic studies of FF in pig plasma and serum after intramuscular administration of VMPs.Raspodjela florfenikola (FF) i njegovog metabolita florfenikol amina (FFA) u cerebrospinalnoj tekućini svinja istražena je nakon dvokratne primjene u mišić s 48-satnim razmakom originalnog i generičkog veterinarsko-medicinskog proizvoda (VMP) iste terapijske doze (20 mg FF/kg tjelesne mase) u istim uvjetima pokusa. Oba VMP-a imaju odobrenje za stavljanje u promet u Hrvatskoj te su po farmaceutskom obliku otopine za injekcije i sadržavaju 300 mg FF/mL. Pokus je proveden na klinički zdravim svinjama raspoređenim u dvije pokusne i jednu kontrolnu skupinu. Prvoj pokusnoj skupini životinja primijenjen je originalni, drugoj skupini generički lijek, dok je treća skupina bila kontrolna. Žrtvovanje životinja uslijedilo je nakon 216, 288 i 384 sata od prvog davanja VMP-a. Uzorci cerebrospinalne tekućine prikupljeni su u trenutku žrtvovanja i analizirani su optimiranom i validiranom tekućinskokromatografskom metodom uz detekciju UV-detektorom s nizom fotodioda (HPLC-DAD). Obrada uzoraka cerebrospinalne tekućine provedena je ekstrakcijom na čvrstoj fazi C18 (SPE). Primjenom SPE-HPLC- DAD metode ustvrđeno je da matrica ne utječe na linearnost FF i FFA u radnom području od 0,05 do 5,00 μg/mL te je postignuta granica detekcije od 0,0023 μg/mL za FF i od 0,0100 μg/mL za FFA. Vrijednosti analitičkih povrata kreću se od 86,6 % do 111,8 % za FF, odnosno od 91,7% do 98,8% za FFA. U ovom radu je dokazano da je SPE-HPLC-DAD metoda selektivna, osjetljiva i pouzdana analitička metoda za određivanje FF i FFA u cerebrospi- nalnoj tekućini. S obzirom na rezultate našeg preliminarnog istraživanja FF u plazmi svinja tretiranih originalnim, odnosno generičkim VMP-om, cilj ovog istraživanja bila je i usporedba distribucije FF u uzorcima plazme i cerebrospinalne tekućine svinja nakon 216. sata od primjene VMP-a. Međutim, u uzorcima cerebrospinalne tekućine svinja žrtvovanih u navedenom pokusnom razdoblju nisu detektirani ni FF ni FFA. Zbog sličnosti matrica, SPE-HPLC-DAD metoda mogla bi poslužiti u budućim farmakokinetičkim studijama FF u uzorcima plazme i seruma dobivenim od svi- nja nakon primjene u mišić
Dokazivanje gena za enterotoksine koagulaza-negativnih stafilokoka iz autohtonih hrvatskih fermentiranih kobasica.
The aim of this study was to determine the presence of enterotoxin genes in coagulase - negative staphylococci from traditional Croatian fermented sausages. A total of 39 isolates were collected from the dry sausage “kulen” and Slavonian homemade sausages as presumptive CNS, and were subjected to PCR identification to the genus level. All isolates belonged to the Staphylococcus genus. Strains were tested for the presence of 13 enterotoxin genes; seA, seB, seC, seG, seI, tsst1, seD, seE, seH, seJ, seM, seN and seO by the PCR method. All strains were negative to all enterotoxin genes. The observed results indicate the absence of risk related to enterotoxogenic potential of coagulase - negative staphylococci as indigenous microbiota from autochthonous Croatian traditional sausages.Cilj ovog rada bio je utvrditi prisutnost gena za enterotoksine u koagulaza - negativnih stafilokoka iz tradicionalnih hrvatskih fermentiranih kobasica. Ukupno je prikupljeno 39 izolata iz kulena i domaće slavonske kobasice te identificirano PCR - om do razine roda. Svi izolati pripadali su rodu Staphylococcus. PCR - om je određivana prisutnost 13 gena za enterotoksine: seA, seB, seC, seG, seI, tsst1, seD, seE, seH, seJ, seM, seN i seO. Ni u jednom izolatu nije utvrđena prisutnost gena za enterotoksine. Dobiveni rezultati upućuju na odsutnost rizika povezanog s toksogenim potencijalom koagulaza-negativnih stafilokoka kao dijela autohtone mikroflore hrvatskih fermentiranih kobasica
Analiza fenotipa CD3+CD16+ limfocita periferne krvi svinja
The phenotype of porcine peripheral blood T cells and natural killer (NK) cells has been well-studied over the past three decades, though porcine peripheral blood lymphocytes with mixed T/NK-cell phenotype within perforin- and NKp46- positive CD3+ populations have also been identified. Despite the mixed phenotype, both populations showed in vitro NK cell-like major histocompatibility complex-unrestricted cytolysis. In this study, the peripheral blood lymphocytes of 15 crossbreed, 12-week-old pigs of both sexes, were analysed by flow cytometry for the expression of leukocyte surface antigens (cluster of differentiation, CD) that can be found on porcine T cells (CD3, TCR-γδ and CD4), NK cells (CD16) or on both cell populations (CD8α and SLA-DR). We found the presence of a minor population of CD3+CD16+ cells within peripheral blood lymphocytes (2.84%). Peripheral blood CD3+CD16+ lymphocytes consisted of all four subpopulations with respect to the expression of surface antigens CD4 and CD8α; most were CD4-CD8α+ (60.64%) and CD4-CD8α-(36.77%). While the proportion of SLA- DR+ cells within both subpopulations was similar (8.01% of CD3+CD16+CD4-CD8α+ lymphocytes and 7.41% of CD3+CD16+CD4- CD8α- lymphocytes), the proportion of TCR-γδ+ cells was noticeably higher within CD3+CD16+CD4-CD8α+ (43.48%) than CD3+CD16+CD4-CD8α- (16.55%) lymphocytes. When the expression of individual surface antigens was analysed on peripheral blood CD3+CD16+ lymphocytes, most were CD8α+ (62.44%), though some were also TCR- γδ+ (32.56%), SLA-DR+ (7.55%) or CD4+ (2.59%). Expression of CD8α on CD3+CD16+ lymphocytes was not related to co-expression of other surface antigens, though most CD3+CD16+TCR-γδ+ lymphocytes (81.04%) and most CD3+CD16+CD4+ lymphocytes (69.50%) expressed CD8α. Expression of SLA-DR was not related to the co-expression of TCR-γδ or CD8α, or to the co-expression of both antigens (TCR-γδ and CD8α) on CD3+CD16+CD4- lymphocytes. The results also showed the presence of peripheral blood lymphocytes with the combined phenotypeof T cells and NK cells in three-month old pigs. Though a functional analysis of the investigated cells was not performed in this study, future investigations should provide more insight about the functional properties of porcine peripheral blood CD3+CD16+ lymphocytes with distinct phenotypic characteristics, especially concerning antigen- specific responses and whether the results presented here are solely age-related.Fenotip T limfocita i NK stanica (engl. Natural Killer Cells) periferne krvi svinja dobro je istražen tijekom zadnja tri desetljeća. Međutim, unutar subpopulacija limfocita periferne krvi svinja koje iskazuju površinski antigen CD3 i perforin ili receptor NKp46 ustvrđeni su i limfociti s mješovitim fenotipom T limfocita i NK stanica. Unatoč mješovitom fenotipu, obje subpopulacije limfocita su in vitro pokazale citolitički učinak koji nije bio usmjeren na molekule glavnog sustava tkivne podudarnosti, odnosno citolitički učinak sličan NK stanicama. U našem istraživanju protočnom citometrijom analizirani su limfociti periferne krvi od petnaest svinja oba spola, križane pasmine i u dobi dvanaest tjedana, s obzirom na iskazivanje površinskih antigena koji mogu biti prisutni na T limfocitima (CD3, TCR-γδ i CD4), na NK stanicama (CD16) ili na obje navedene populacije stanica svinja (CD8α i SLA-DR). Naše je istraživanje pokazalo da limfociti periferne krvi sadržavaju manji udio subpopulacije koja iskazuje površinske antigene CD3 i CD16 (2,84%). Limfociti periferne krvi s fenotipom CD3+CD16+ sastojali su se od sve četiri subpopulacije s obzirom na iskaziva- nje površinskih antigena CD4 and CD8α, od kojih je većina bila CD4-CD8α+ (60,64%) i CD4- CD8α- (36,77%). Iako je udio stanica koje iskazuju SLA-DR u obje navedene subpopulacije bio sličan (8,01 % od CD3+CD16+CD4-CD8α+ limfocita i 7,41 % od CD3+CD16+CD4-CD8α- limfocita), udio stanica koje iskazuju TCR-γδ
je bio primjetno veći u CD3+CD16+CD4-CD8α+ limfocitima (43,48 %), nego u CD3+CD16+CD4- CD8α- limfocitima (16,55 %). Analiza iskazivanja pojedinih površinskih antigena na CD3+CD16+ limfocitima periferne krvi poka- zala je da ih je većina bila CD8α+ (62,44 %), ali također i TCR-γδ+ (32,56 %), SLA-DR+ (7,55 %) i CD4+ (2,59 %). Iskazivanje površinskog antigena CD8α na CD3+CD16+ lim- focitima nije bilo povezano s iskazivanjem drugih površinskih antigena. Međutim, ve- ćina CD3+CD16+TCR-γδ+ limfocita (81,04 %) i većina CD3+CD16+CD4+ limfocita (69,50 %) iskazivali su i površinski antigen CD8α. Iska- zivanje molekule SLA-DR nije bilo povezano s iskazivanjem površinskog antigena TCR-γδ ili CD8α, niti s oba površinska antigena (TCR- γδ i CD8α) na CD3+CD16+CD4- limfocitima. Naše je istraživanje pokazalo i prisutnost limfocita s kombiniranim fenotipom T limfocita i NK stanica u perifernoj krvi svinja, u dobi od tri mjeseca, međutim funkcija navedenih stanica nije istraživana. Stoga se nadamo se da ćemo budućim istraživanjima moći pojasniti jesu li dobiveni rezultati vezani uz dob svinja. Nadalje, očekujemo da će dodatna istraživanjima omogućiti bolje spoznaje o funkcijama pojedinih subpopulacija CD3+CD16+ limfocita periferne krvi svinja različitog fenotipa, posebice o odgovoru navedenih stanica specifičnom za određeni antigen
Spektrofotometrijsko određivanje glavnih polifenolnih skupina u uzorcima propolisa iz različitih područja Republike Hrvatske
Spectrophotometric procedures for the rapid characterization of propolis have been performed on propolis samples from different regions of Croatia. In order to determine the major groups of bioactive compounds in propolis, the following optimised and validated spectrophotometric methods were carried out: the Folin-Ciocalteu method for the content of total phenolics (TPs) and two distinct methods for the content of total flavonoids: aluminium chloride (AlCl3 ) complexation method for total flavones/flavonols (TFFs) and the 2.4-dinitrophenylhydrazine (2.4-DNPH) method for total flavanones/dihydroflavonols (TFDs). Validation parameters, including linearity, sensitivity, range, accuracy, limit of detection, limit of quantification, precision and robustness were implemented. The following polyphenol standards were used for the validation procedure: gallic acid (GA), pinocembrin (PC), galangin (GN), quercetin (QC) and a mixture of PC and GN. Validated methods were applied to analyse six samples of raw propolis from Croatian continental and Adriatic regions. The high qualitative/quantitative variability of the TP, TFF and TFD content was observed. Although the method of extraction (ultrasonic-assisted extraction or microwave assisted extraction) showed a non-significant effect on extraction yield (P>0.05) and the polyphenolic concentrations obtained of each sample in general, ultrasonic extraction was found to be more selective. Furthermore, the calibration compound used for constructing the calibration curve highly influenced the final concentrations of TPs and TFFs. The study showed good linearity, accuracy, repeatability, intermediate precision, LOD and LOQ for all three spectrophotometric methods, considering that these analyses are the basis for further research into the individual polyphenolic compounds in the propolis samples covered by this research.U ovom su radu provedene spektrofotometrijske metode za brzu analizu uzoraka propolisa iz različitih područja Republike Hrvatske. S ciljem određivanja glavnih skupina bioaktivnih spojeva u propolisu, optimizirane i validirane su tri spektrofotometrijske metode: Folin-Ciocalteuova metoda za određivanje ukupnih fenola i dvije različite metode za sadržaj ukupnih flavonoida - metoda kompleksiranja s aluminijevim kloridom za ukupne flavone/ flavonole te 2,4-DNPH metoda za ukupne flavanone/dihidroflavonole. Validacijom su određeni sljedeći parametri: linearnost, osjetljivost, raspon, točnost, granica detekcije, granica kvantifikacije, preciznost i robusnost. Za provedbu validacijskog protokola korišteni su standardi polifenola, uključujući galnu kiselinu (GA), pinocembrin (PC), galangin (GN), kvercetin (QC) te smjesu pinocembrina i galangina (PC-GN). Validiranim metodama analizirano je šest uzoraka sirovog propolisa iz kontinentalne i jadranske regije Hrvatske. Primijećena je velika raznolikost u sadržaju ukupnih fenola, ukupnih flavona/flavonola te ukupnih flavanona/dihidroflavonola među uzorcima iz dviju hrvatskih regija. Iako metode ekstrakcije (ultrazvučna ekstrakcija ili ekstrakcija potpomognuta mikrovalovima) nisu pokazale statistički znakovitu razliku u obliku prinosa ekstrakcije (P > 0,05), te gledajući koncentracije polifenola cjelokupno, ultrazvučna je ekstrakcija bila selektivnija. Nadalje, velik utjecaj na konačne koncentracije ukupnih fenola i ukupnih flavona/flavonola imao je standard korišten za izradu kalibracijske krivulje. Dobivena je dobra linearnost, točnost, ponovljivost, srednja preciznost, granica detekcije i granica određivanja u svim trima spektrofotometrijskim metodama te su ovi rezultati temelj za daljnja istraživanja pojedinačnih polifenolnih spojeva u uzorcima propolisa
Utjecaj imunomodulatora virusnog ili bakterijskog podrijetla i cjepiva protiv bolesti Aujeszkoga na udio B limfocita periferne krvi na tovljenu prasad
The consequences of infection by Suid herpesvirus type 1 (SuHV-1) that causes Aujeszky’s disease (AD) are well studied, however, the effects of immunomodulators (IMs) of microbial origin (viral and bacterial) when administered solely or in combination with the attenuated SuHV-1 vaccine are less known. The effects of parenteral administration of IMs, inactivated Parapoxvirus ovis (P. ovis) or a combination of inactivated Propionibacterium granulosum (P. granulosum) and detoxified Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) and attenuated SuHV-1, strain Bartha, on the proportion of peripheral blood CD3- CD21+ B cells were analysed in 30 crossbred, 3-month old pigs using flow cytometry (FCM). Specific antibodies for gE and gB of SuHV- 1 were detected using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Data were compared among six experimental groups: (1) pigs that separately received the vaccine, (2) IM of bacterial origin, (3) IM of viral origin, (4) simultaneous administration of the vaccine and bacterial IM, (5) simultaneous administration of the vaccine and viral IM, and (6) the control group of untreated pigs. Comparison of B cell proportions and the detection of specific antibodies in blood samples of vaccinated pigs on Day 11 of the experiment showed a transient decrease in B cell contents, though this could not be assumed to be related since the control group showed a decrease in B cell proportion on the same day. The results showed that the use of IMs alone or in combination with the attenuated SuHV-1 vaccine did not have a significant impact on the proportion of peripheral blood B cells in growing pigs.Posljedice infekcije herpes virusom-1 svinja (SuHV-1) uzročnikom bolesti Aujeszkoga (BA) dobro su istražene, ali, manje je poznat učinak imunomodulatora (IM) mikrobnog podrijetla (virusnog ili bakterijskog) primijenjenih u kombinaciji s atenuiranim cjepivom protiv BA. Učinak parenteralne primjene IM-a, inaktiviranog virusa Parapoxvirus ovis ili kombinacije inaktivirane bakterije Propionibacterium granulosum i lipopolisaharida bakterije Escherichia coli i cjepiva koje sadržava atenuirani virus BA (SuHV-1, soj Bartha) na udio CD3-CD21+ B limfocita periferne krvi analiziran je protočnom citometri¬jom u krvi 30 komercijalnih križanaca svinja u dobi od tri mjeseca bez protutijela za virus BA. Prisustvo je protutijela za glikoproteine B (gB) i E (gE) virusa BA provjereno imunoenzimnim testom (engl. Enzyme Linked Immunosorbant Assay, ELISA). Dobiveni su rezultati uspoređeni između 6 pokusnih skupina tj. između svinja koje su primile: cjepivo (1. skupina), IM bakterijskog podrijetla (2. skupina), IM virusnog podrijetla (3. skupina), svinja koje su istovremeno primile cjepivo i IM bakterijskog podrijetla (4. skupina) ili cjepivo i IM viruisnog podrijetla (5. skupina) te netretirane, kontrolne skupine svinja (6. skupina). Usporedba udjela B limfocita u uzorcima krvi cijepljenih svinja 11. dan pokusa pokazali su prolazno smanjenje sred¬nje vrijednosti udjela B limfocita za koje se nije moglo pretpostaviti da je povezano s pojavom specifičnih protutijela, jer je smanjenje srednje vrijednosti udjela B limfocita bilo i u kontrolnoj skupini istoga dana. Naši su rezultati pokazali da primjena samo IM-a, kao i njihovih kombinacija s atenuiranim cjepivom protiv BA, nisu imali značajan utjecaj na udio B limfocita periferne krvi u tovljene prasadi
Council of Europe Convention on counterfeiting of medicinal products and similar crimes involving threats to public health
Dana 1. siječnja 2020. godine u Republici Hrvatskoj na snagu je stupila Konvencija Vijeća Europe o krivotvorenju farmaceutskih proizvoda i sličnim kažnjivim djelima koja uključuju prijetnje javnom zdravlju (engl. Council of Europe Convention on counterfeiting of medicinal products and similar crimes involving threats to public health). Konvencija je potpisana 3. rujna 2015. godine, a Vlada Republike Hrvatske ju je ratificirala 20. rujna 2019. godine. Konvencija se odnosi i na medicinske proizvode koji se koriste u veterinarskoj medicini. Važnost borbe protiv krivotvorenih lijekova prepoznata je u Hrvatskoj godinama, a Hrvatska je i jedna od brojnih sudionica Interpolovih akcija protiv krivotvorenih lijekova. Prihvaćanjem ove Konvencije otvara se mogućnost učinkovitijeg nadzora nad krivotvorenim lijekovima za primjenu u humanoj i veterinarskoj medicini te bolja međunarodna suradnja.On 1 January 2020, the Council of Europe Convention on counterfeiting of medicinal products and similar crimes involving threats to public health came into force in Croatia. The Convention was signed on 3 September 2015 and ratified by the Croatian Government on 20 September 2019. Veterinary medicinal products are also covered by this Convention. Although Croatia has long been battling counterfeit medicinal products and participates actively in Interpol campaigns, the ratification of this Convention enables more efficient supervision of counterfeit products for use in medicine and veterinary medicine and leads to better international collaboration
Determination of antimicrobial substances in wastewaters
Rastućom primjenom antimikrobnih lijekova u humanoj i veterinarskoj medicini povećava se i njihova prisutnost u okolišu pa tako i u otpadnim vodama što izaziva veliku zabrinutost u javnosti. Najčešće primjenjivane skupine antimikrobnih lijekova su makrolidi, tetraciklini, kinoloni te sulfonamidi i trimetoprim. Brojnim istraživanjima dokazan je njihov štetan utjecaj na vodene organizme i biljni svijet, a najveći problem prisutnosti antibiotika i njihovih ostataka u okolišu je pojava i širenje rezistencije bakterija na antibiotike. Zbog navedenih razloga vrlo je važno osigurati kvalitetnu, pouzdanu i osjetljivu analitičku metodu koja može dati nedvojbeni uvid u stanje antibiotika u vodi. U ovom preglednom radu prikazana je primjena vezanog sustava tekućinske kromatografije visoke djelotvornosti sa spektrometrijom masa (LC-MS/MS) koji se najčešće upotrebljava zbog svoje specifičnosti, brzine, osjetljivosti i pouzdanosti kao i tijek priprave, ekstrakcije te pročišćavanja analita u uzorku tijekom multirezidualne analize. Zbog prirode matrice (otpadna voda) pročišćavanje se provodi SPE, SPME ili kapilarnom SPME tehnikom nakon koje slijedi analiza LC-MS/MS. Molekule analita u uzorku podliježu ionizaciji elektroraspršenjem (ESI), a primjenom spektrometra masa s više analizatora, trostrukog kvadrupola moguće je određivanje vrlo malih koncentracija analita, a ujedno i strukture određene ciljne molekule.Expanded use of antimicrobial substances in human and veterinary medicine and their presence in effluents and the environment is a cause of major concern. The most commonly used antimicrobials are macrolides, tetracyclines, quinolones, sulfonamides and trimethoprim. Numerous studies have demonstrated their adverse effects on aquatic organisms and plant life, and the biggest issue concerning the presence of antimicrobial substances and their residues in the environment is the emergence and spread of antibiotic resistance. Therefore, it is important to provide high-quality, reliable and sensitive analytical methods that can provide unambiguous results and give insight into the distribution of antimicrobial substances in water. Multi-residual analysis of antimicrobials involves the preparation, extraction, purification and chromatographic analysis of the analyte in the sample. This report examines the application of high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (LC-MS/ MS) due to its specificity, speed, sensitivity and reliability. Regarding the nature of the matrix (such as wastewater ), purification is performed by SPE, SPME or SPME capillary technique, followed by LC-MS/MS analysis. Molecules of the analyte in sample aliquots are subjected to electrospray ionization (ESI), and the triple quadrupole analyser provides determination of very low concentrations of the analyte and the structure of the desired target molecule
Off-label use of veterinary medicinal products
Unatoč brojnim odobrenim veterinarsko-medicinskim proizvodima (VMP) u Republici Hrvatskoj povremeno se javlja potreba za određenim VMP-ima među kojima su posebice oni za pse, mačke, ali i konje. Ulaskom RH u Europsku uniju (EU) dostupnost VMP-a se bitno poboljšala, ali još uvijek postoje i situacije kada se poseže za neodobrenim lijekovima. Osim njihova nedostatka na tržištu, postoje
i drugi razlozi uporabe neodobrenih VMPa; kao primjerice cijena zamjenskih lijekova, očekivanja veće učinkovitosti ili kvalitete humanih lijekova i sl. Europsko i nacionalno zakonodavstvo predvidjelo je nekoliko mogućnosti primjene neodobrenog VMP-a
u svrhu smanjenja patnje životinja, odnosno u svrhu njihova izlječenja. Tako je jedna od mogućnosti primjena VMP-a koji nije odobren u RH nego u nekoj od država članica EU ili i izvan EU (treće zemlje), ali pod određenim uvjetima. Druga je mogućnost primjena VMP-a odobrenog u RH, ali za drugu životinjsku vrstu, a treća je mogućnost primjena lijekova za humanu primjenu. U svim navedenim
slučajevima primjena VMP-a koji se primjenjuje vrsti ili kategoriji životinja koje nisu navedene u odobrenju, u količini i na različiti
način od odobrene te za indikaciju koja nije navedena u uputi, smatra se primjenom izvan odobrenja (engl. „off-label use“ ili „extra
label use“). U slučaju potrebe primjene neodobrenog VMP-a doktor veterinarske medicine može na osobnu odgovornost, temeljem procjene koristi i rizika, primijeniti neodobreni VMP u skladu s nacionalnim propisima vodeći računa o karenciji u slučaju životinja za
hranu. Pri tome je obvezno vođenje evidencije koja mora sadržavati identifikacijske podatke o životinji i vlasniku, sve podatke o primijenjenim ljekovima, uključujući i dozu lijeka te sve provedene postupke (dijagnoza, trajanje liječenja) i karenciju, ako je primjenjiva. S obzirom da lijekovi koji se koriste bez odobrene upute mogu imati i nuspojave, potrebno je i o tome voditi računa, evidentirati ih i prijavljivati nadležnim tijelima.Despite the number of approved veterinary medicinal products (VMPs) in Croatia, there is an occasional need for certain other VMPs, including those for dogs, cats and horses. Availability of VMPs improved significantly with Croatia’s accession to the European Union in 2013, though there are still situations when unauthorized medicines are used. Apart from their lack on the market, there are other reasons for their use, such as the price of substitute medicines, expectations of greater efficacy or quality of human medicines, etc. European and national legislation provides several possibilities for using unapproved VMP to reduce animal suffering or for treatment purposes. One is the possibility to use a VMP that is not approved in Croatia, but is approved in one of the EU Member States or outside the EU (third countries) under certain conditions. The second possibility is use of a VMP approved in Croatia, but for a different
target species, and the third possibility is the use of these drugs in humans. In all these cases, the use of a VMP in non-target species or category, or in a dosage or route of administration different from that approved, or for an indication not specified on the label is considered off-label use or extra-label use. If required, the veterinarian may administer the unapproved VMP at his own risk, on the basis of a benefit-risk assessment and in accordance with national regulations, taking into account the withdrawal period in the case of food-producing animals. Records on such use must be kept, including identification data about the animal and owner, all data on
the administered drugs, including dose, all performed procedures (diagnosis, duration of treatment) and the withdrawal period, if applicable. Since medicines used outside the approved instructions can also have side effects, it is necessary to ensure they are recorded and reported to the competent authorities