NO-independent regulatory site of direct sGC stimulators like YC-1 and BAY 41-2272

BACKGROUND: The most important receptor for nitic oxide is the soluble guanylate cyclase (sGC), a heme containing heterodimer. Recently, a pyrazolopyridine derivative BAY 41-2272, structurally related to YC-1, was identified stimulating soluble guanylate cyclase in an NO-independent manner, which results in vasodilatation and antiplatelet activity. The study described here addresses the identification of the NO-independent site on soluble guanylate cyclase. RESULTS: We developed a photoaffinity label ((3)H-meta-PAL) for the direct and NO-independent soluble guanylate cyclase (sGC) stimulator BAY 41-2272 by introducing an azido-group into the tritium labeled compound. The synthesized photoaffinitylabel directly stimulates the purified sGC and shows in combination with NO a synergistic effect on sGC activity. Irradiation with UV light of (3)H-meta-PAL together with the highly purified sGC leads to a covalent binding to the α(1)-subunit of the enzyme. This binding is blocked by unlabeled meta-PAL, YC-1 and BAY 41-2272. For further identification of the NO-independent regulatory site the (3)H-meta-PAL labeled sGC was fragmented by CNBr digest. The (3)H-meta-PAL binds to a CNBr fragment, consisting of the amino acids 236–290 of the α(1)-subunit. Determination of radioactivity of the single PTH-cycles from the sequencing of this CNBr fragment detected the cysteines 238 and 243 as binding residues of the (3)H-meta-PAL. CONCLUSIONS: Our data demonstrate that the region surrounding the cysteines 238 and 243 in the α(1)-subunit of the sGC could play an important role in regulation of sGC activity and could be the target of this new type of sGC stimulators

Alcance y limitaciones de la justicia internacional

El presente libro hace parte de los trabajos del grupo de justicia internacional de la Red Multidisciplinar de Investigación “Perspectiva Epistemológica Ibero-Americana sobre la Justicia” Volumen 4, coordinada desde el Instituto Ibero-Americano de la Haya para la Paz, los Derechos Humanos y la Justicia Internacional. Así mismo, se inscribe dentro de los siguientes proyectos de investigación: (i) “Principios de armonización entre la función y alcance de la Justicia Internacional y las demandas surgidas en los procesos políticos de transición”, financiado por el Fondo de Investigación de la Universidad del Rosario, Bogotá, Colombia —FIUR—; y (ii) “La función de los órganos judiciales y arbitrales internacionales en la ejecución de un eventual acuerdo de paz en Colombia fruto de la renegociación resultante del Referéndum del 2 de octubre de 2016”, financiado por la Facultad de Jurisprudencia de la Universidad del Rosario. Ambos proyectos se encuentran adscritos a la línea de investigación “Crítica al Derecho Internacional desde Fundamentos Filosóficos”, del Grupo de Investigación de Derecho Internacional de la Facultad de Jurisprudencia de la Universidad del Rosario, Bogotá, Colombia