OTIMASI METODE ISOLASI DNA SAMPEL FTA CARDS MENGGUNAKAN PURELINK® GENOMIC DNA KITS DAN CHELEX-100

Teknologi Flinders Technology Associates (FTA) merupakan sistem berbasis kertas saring, dimana dapat melindungi sampel dari kerusakan dan degradasi, memungkinkan penyimpanan jangka panjang dan penyimpanan asam nukleat pada suhu kamar.Ada berbagai macam metode dan dengan berbagai jenis reagen yang dapat digunakan untuk proses ekstraksi DNA dan masing-masing metode memiliki kelebihan dan kelemahan. Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui hasil optimasi isolasi DNA sampel FTA cards menggunakan variasi metode PureLink® Genomic DNA Kits dan metode Chelex-100. Penelitian ini merupakan penelitian non eksperimental. Sampel berupa darah tepi yang diambil menggunakan pen lanset kemudian disimpan di dalam kertas Whatman sebanyak 16 sampel darah manusia sehat. Penelitian optimasi metode isolasi DNA sampel FTA card jenis Whatman WB120210 FTA Micro Card with 1-Sample Area menggunakan metode PureLink® Genomic DNA Kits dan Chelex-100 dilakukan dengan deskriptif kualitatif yakni dengan melihat pita yang terbentuk setelah dilakukan elektroforesis dan deskriptif kuantitatif dengan melihat kemurnian dan konsentrasi DNA menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Pada metode PureLink ® Genomic DNA kits yang divariasi dengan penambahan SDS 10% dan metode Chelex-100 terbentuk pita DNA pada gel agarose dengan ketebalan pita yang sangat tipis. Data kemurnian yang diperoleh bervariasi antara 1,035 sampai 1,162 dan konsentrasi antara 190 sampai 1240 ng/μl. Hasil dari data kualitatif dan kuantitatif yang diperoleh dapat disimpulkan bahwa hasil isolasi DNA menggunakan variasi metode PureLink® Genomic DNA kits dengan penambahan SDS 10% dan metode Chelex-100 masih terdapat pengotor

Uji Banding Metode Isolasi DNA Sampel FTA Card menggunakan Kit Wizard® Genomic DNA Purification, PureLink® Genomic DNA, dan Chelex-100

FTA Cards are an easy way to collect blood samples, deliveries, and stores. The totalvolume of blood samples is less is needed when compared to the blood samples taken through a vein(venipuncture). The purpose of this research is a method that can be applied to isolate DNA samplesfrom FTA Cards using the Wizard® Genomic DNA Purifi cation Kit (Promega), PureLink® GenomicDNA Kits, and Chelex-100. This research was a type of experimental research, and data analysis wasshowed in qualitative and quantitative descriptively. The samples used were 16 samples of human bloodtaken using a lancet and then placed on the FTA Card, sampling was done by accidental samplingtechnique. The variations of the PureLink® Genomic DNA kits method with the addition of SDS 10%showed thin and smear DNA bands on agarose gels. Furthermore, the Chelex-100 method showed aclear DNA band. The purity data obtained varied between 1 to 1.1 and concentrations between 190 to950 ng/μl. The conclusion of this study is DNA kits method with the addition of 10% SDS and theChelex-100 method still have impurities, with the purity value of DNA was less than 1.8 and a lowconcentration to be used as a DNA template for further molecular analysis.FTA Card merupakan cara mudah untuk pengumpulan, pengiriman, dan penyimpanan darah.Volume darah yang dibutuhkan untuk FTA Card lebih sedikit jika dibandingkan sampel darah yangdiambil melalui vena. Tujuan dari penelitian ini adalah menentukan metode yang tepat digunakan untukmengisolasi DNA sampel darah pada FTA Card menggunakan kit Wizard® Genomic DNA Purifi cation,PureLink® Genomic DNA Kit dan metode Chelex-100. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimentaldan data dianalisis dengan uji kualitatif dan kuantitatif. Sampel yang digunakan sebanyak 16 sampeldari darah manusia yang diambil menggunakan pen lancet kemudian ditotolkan diatas FTA Card,pengambilan sampel dilakukan dengan teknik accidental sampling. Hasil analisa kualitatif elektroforesismemperlihatkan metode isolasi kit PureLink® Genomic DNA yang divariasikan dengan penambahanSDS 10% terdapat pita DNA yang tipis dan smear pada gel agarose. Selanjutnya metode Chelex-100memperlihatkan adanya pita DNA yang jelas. Data kuantitatif yaitu kemurnian dan kosentrasi DNAyang diperoleh bervariasi antara 1-1,1 dengan konsentrasi antara 190-950 ng/μL. Kesimpulan dari studiini adalah tingkat kemurnian isolasi DNA dengan menggunakan metode kit PureLink® Genomic DNAdengan penambahan SDS 10% dan metode Chelex-100 masih terdapat kontaminasi, dengan nilaikermunian yang lebih kecil dari 1,8 dan konsentrasi DNA yang masih rendah untuk dijadikan DNAtemplat analisis molekuler selanjutnya