ENRAIZAMENTO IN VITRO E ACLIMATIZAÇÃO DE MUDAS DE MARMELEIRO

The objective of this work was to determine salts and sucrose concentration of the culture medium that favor the in vitro rooting of quince cvs. MC and Adams, and the substrate that it makes possible the largest survival of the scions in acclimatization. In the Experiment 1 they were studied the salts concentration of the MS culture medium (50, 75 and 100% of the original concentration) and the sucrose concentration in the medium (0, 15, 30 and 45 g.L-1), in the completely randomized experimental design, in factorial outline 3 x 4. To the 35 days were evaluated the rooting percentage, the number and the length of roots and the intensity of callus formation in the basis of the explants. In the Experiment 2, it was studied the substrate type (substrate Plantmax, Plantmax + vermiculite [mixture 1:1] and Plantmax + vermiculite + soil [mixture 1:1:1]), in the blocks at random experimental design. In this experiment the survival percentage was evaluated to the 10, 20 and 30 days of acclimatization, exposing the scions gradually the environmental conditions. The in vitro rooting of the cvs. MC and Adams was favored with the reduction of the salts of the MS medium to 75% of it original concentration, and with 15 g.L-1 of sucrose in the culture medium. In spite of none of the substrate it was previously sterilized, just the substrate that contained soil in the mixture presented total death of the scions already to the ten days of acclimatization, caused by rottenness in the lap of the plant. The substrate Plantmax and the mixture Plantmax + vermiculite made possible the largest survival of the scions in the acclimatization.O objetivo deste trabalho foi determinar a concentração dos sais e de sacarose do meio de cultura que favoreçam o enraizamento in vitro de marmeleiro cvs. MC e Adams, e o substrato que possibilite a maior sobrevivência das mudas na aclimatização. No Experimento 1 foram estudadas a concentração dos sais do meio de cultura MS (50, 75 e 100% da concentração original) e a concentração de sacarose no meio (0, 15, 30 e 45 g.L-1), no delineamento experimental inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3 x 4. Aos 35 dias avaliou-se a percentagem de enraizamento, o número e o comprimento médio de raízes e a intensidade de formação de calo na base dos explantes. No Experimento 2, estudou-se o tipo de substrato (substrato Plantmax, Plantmax + vermiculita [mistura 1:1] e Plantmax + vermiculita + solo [mistura 1:1:1]), no delineamento experimental blocos ao acaso. Neste experimento avaliou-se a percentagem de sobrevivência aos 10, 20 e 30 dias de aclimatização, expondo as mudas gradualmente as condições ambientais. O enraizamento in vitro das cvs. MC e Adams foi favorecido com a redução dos sais do meio MS a 75% de sua concentração original, e com 15 g.L-1 de sacarose no meio de cultura. Apesar de nenhum dos substratos ter sido previamente esterilizado, apenas o substrato que continha solo na mistura apresentou total morte das mudas já aos dez dias de aclimatização, causada por podridão no colo da planta. O substrato Plantmax e a mistura Plantmax + vermiculita possibilitaram a maior sobrevivência das mudas na aclimatização

Avaliação da fidelidade genotípica por marcadores RAPDs de brotações de pereira (Pyrus communis L.) cv. Carrick, regeneradas in vitro

O objetivo deste trabalho foi avaliar a fidelidade genotípica de brotações de pereira (Pyrus communis L.) cultivar Carrick, regeneradas in vitro, utilizando marcadores RAPDs. O DNA genômico foi extraído de folhas oriundas das brotações de pereira regeneradas a partir de diferentes tratamentos e de plantas matrizes micropropagadas (planta controle), utilizando-se o protocolo descrito por FERREIRA & GRATTAPAGLIA (1996). Para triagem dos primers foram utilizados os kits OPAN, OPA e OPF (Operon Technologies, Inc.) e, destes, foram escolhidos sete primers: OPAN-03, OPAN-14, OPAN-15, OPAN-16, OPA-02, OPA-08 e OPF-04. A separação dos produtos da amplificação foi realizada através de eletroforese horizontal em gel de agarose 1,2%, corado com brometo de etídio. Após a corrida, os géis foram visualizados sobre um transiluminador de luz ultravioleta e fotografados com câmara Polaroid para registro dos dados. A ausência ou adição de uma ou mais bandas comparativamente ao padrão da planta matriz (planta controle) foi considerado variação somaclonal. Dos 66 fragmentos produzidos pelos sete primers, observou-se 100% de bandas monomórficas, indicando que nenhum dos primers utilizados detectou variação somaclonal nas brotações regeneradas

ESTABELECIMENTO IN VITRO DE MIRTILO A PARTIR DE SEGMENTOS NODAIS

Com o objetivo de definir a constituição do meio de cultura, o comprimento do explante e o estado físico do meio de cultura que favoreçam o estabelecimento in vitro de mirtilo, cvs. Flórida e Delite, dois experimentos foram realizados. No experimento I, onde segmentos nodais da cv. Flórida foram utilizados como explantes, estudou-se quatro diferentes constituições do meio de cultura WPM (T1: WPM - testemunha; T2: WPM + 24,6 µM de 2iP; T3: WPM + 24,6 µM de 2iP + 2,68 µM de ANA; e, T4: WPM + 24,6 µM de 2iP + 2,68 µM de ANA + 1,44 µM de AG3). Os meios de cultura com as vitaminas de Gamborg, foram adicionados de mio-inositol (100 mg.L-1), sacarose (30 g.L-1) e ágar (6 g.L-1). No experimento II, com material vegetal da cv. Delite, foram estudados dois estados físicos do meio de cultura (semi-sólido e líquido) e três comprimentos dos explantes - segmentos nodais (0,5; 1 e 1,5 cm). Neste experimento, o meio de cultura WPM com as vitaminas de Gamborg foi acrescido de 2iP (24,6 µM), mio-inositol (100 mg.L-1) e sacarose (30 g.L-1). Ao meio semi-sólido adicionou-se ágar (6 g.L-1), e no meio líquido, chumaços de algodão sustentaram os explantes. No experimento I, o meio de cultura WPM + 24,6 µM de 2iP propiciou a maior percentagem de estabelecimento (70,74%). No experimento II, o comprimento do explante não teve efeito sobre o estabelecimento. Em relação ao estado físico do meio de cultura, a percentagem de estabelecimento foi superior utilizando-se o meio semi-sólido (79,23%), comparado ao meio líquido (0,74%)

Morfogênese in vitro de brotos de macieira (Malus domestica Borkh.) a partir de fragmentos delgados de folhas In vitro morphogenesis of shoots of apple tree (Malus domestica Borkh.) Starting from thin fragments of leaves

O pré-requisito para se obter sucesso na transformação genética de plantas, e também para a multiplicação rápida do genótipo modificado pela micropropagação, é um protocolo de regeneração eficiente. Objetivou-se com este trabalho estudar a expressão do potencial morfogenético de fragmentos delgados de folhas de macieira e otimizar um protocolo de regeneração visando futuros trabalhos de transformação genética. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3 x 2 x 6, com três cultivares de macieira (Galaxy, Maxigala e Mastergala), dois tipos de explantes (fragmentos finos de folhas cortados no sentido transversal e longitudinal), e seis concentrações de thidiazuron (TDZ) no meio de cultura (0; 4,54; 9,08; 13,62; 18,16 e 22,7 µM), totalizando 36 tratamentos. Os sais e vitaminas do meio MS foram acrescidos de mio-inositol (100 mg.L-1), sacarose (30 g.L-1), ágar (6 g.L-1) e adicionados de 1,6 µM ácido naftalenoacético (ANA). Foram utilizados frascos com capacidade para 150 mL com 6 mL de meio de cultura. Os explantes foram obtidos de plantas cultivadas in vitro, em fase de multiplicação, 45 dias após a repicagem, e se constituíram de finos fragmentos da parte mediana de folhas, cortados no sentido transversal (comprimento de 8 a 10 mm) ou longitudinal (comprimento de 10 a 12 mm), ambos com largura aproximada de 1 mm. A porcentagem de regeneração, a intensidade de formação de calo e o número de brotos por explante foram avaliados aos 45 dias de cultivo. A partir dos resultados obtidos concluiu-se que a expressão do potencial morfogenético dos fragmentos delgados de folhas cortados no sentido transversal é maior do que o daqueles cortados no sentido longitudinal, e o seu cultivo em meio de cultura com 4,54 µM de TDZ, propicia, simultaneamente, elevada porcentagem de regeneração, maior número de brotos e menor intensidade de calo.The prerequisite to obtain success in the plants genetic transformation, and also for the fast multiplication of the modified genotype through the micropropagation, it is a efficient regeneration protocol. The objective of this work was to study the expression of the morphogenetic potential of thin fragments of apple tree leaves, and to optimize a regeneration protocol seeking futures works of genetic transformation. The completely randomized experimental design was used, in factorial outline 3 x 2 x 6, with three cultivate of apple tree (Galaxy, Maxigala and Mastergala), two explants types (thin fragments of leaves cut in the transversal and longitudinal direction), and six concentrations of thidiazuron (TDZ) in the culture medium (0; 4.54; 9.08; 13.62; 18.16 and 22.7 µM), totaling 36 treatments. The MS medium salts and vitamins were added of myo-inositol (100 mg.L-1), sucrose (30 g.L-1), agar (6 g.L-1) and 1.6 µM naphthaleneacetic acid (NAA). Flasks with capacity for 150 mL with 6 mL of culture medium were used. The explants were obtained of plants in vitro cultivated, in multiplication phase, 45 days after the inoculation, and they were constituted of fine fragments of the medium part of leaves, cut in the tranversal direction (length from 8 to 10 mm) or longitudinal (length from 10 to 12 mm), both with approximate width of 1 mm. The regeneration percentage, the intensity of callus formation and the number of shoots formed by explant were evaluated by the 45 days of cultivation. Starting from the obtained results it was ended that the expression of the morphogenetic potential of the thin fragments of leaf cut in the transversal direction is higher than those cut in the longitudinal direction, and its cultivation in culture medium with 4.54 µM of TDZ, propitiates, simultaneously, high regeneration percentage, great number of shoots formation and smaller callus intensity

Avaliação da fidelidade genotípica por marcadores RAPDs de brotações de pereira (Pyrus communis L.) cv. Carrick, regeneradas in vitro Evaluation of the genotypic fidelity by RAPD markers of pear shoots (Pyrus communis L.) cv. Carrick, in vitro regenerated

O objetivo deste trabalho foi avaliar a fidelidade genotípica de brotações de pereira (Pyrus communis L.) cultivar Carrick, regeneradas in vitro, utilizando marcadores RAPDs. O DNA genômico foi extraído de folhas oriundas das brotações de pereira regeneradas a partir de diferentes tratamentos e de plantas matrizes micropropagadas (planta controle), utilizando-se o protocolo descrito por FERREIRA & GRATTAPAGLIA (1996). Para triagem dos primers foram utilizados os kits OPAN, OPA e OPF (Operon Technologies, Inc.) e, destes, foram escolhidos sete primers: OPAN-03, OPAN-14, OPAN-15, OPAN-16, OPA-02, OPA-08 e OPF-04. A separação dos produtos da amplificação foi realizada através de eletroforese horizontal em gel de agarose 1,2%, corado com brometo de etídio. Após a corrida, os géis foram visualizados sobre um transiluminador de luz ultravioleta e fotografados com câmara Polaroid para registro dos dados. A ausência ou adição de uma ou mais bandas comparativamente ao padrão da planta matriz (planta controle) foi considerado variação somaclonal. Dos 66 fragmentos produzidos pelos sete primers, observou-se 100% de bandas monomórficas, indicando que nenhum dos primers utilizados detectou variação somaclonal nas brotações regeneradas.The aim of this work was to evaluate the genotypic fidelity of pear shoots (Pyrus communis L.) cultivar Carrick regenerated in vitro, using RAPD markers. Genomic DNA was extracted from leaves regenerated from pear shoots submitted to different treatments and from micropropagated matrix plants (control plant), using the protocol descripted by FERREIRA & GRATTAPAGLIA (1996). For primer selection, the Kits OPAN, OPA, and OPF (Operon Technologies, Inc.) were used. Seven primers were chosen: OPAN-03, OPAN-14, OPAN-15, OPAN-16, OPA-02, OPA-08 and OPF-04. Amplified products were submitted to horizontal electrophoresis in 1.2% agarose gel, stained with ethidium bromide and visualized under UV light. The result was documented by using a Polaroid Camera. The absence or addition of bands, compared to the control plant pattern was considered somaclonal variation. The seven primers generated 66 fragments with 100% monomorphics bands indicating that none of the primers used was able to detect somaclonal variation on the regenerated shoots