Impact of Lactic Acid Bacteria on Dendritic Cells from Allergic Patients in an Experimental Model of Intestinal Epithelium

Lactic acid bacteria (LAB) are Gram positive nonpathogenic commensal organisms present in human gastrointestinal tract. In vivo, LAB are separated from antigen-presenting cells such as dendritic cells (DC) by the intestinal epithelial barrier. In this study, the impact of one LAB strain (Lactobacillus casei ATCC393) on human monocyte-derived DC from allergic and healthy donors was assessed by using a polarized epithelium model. Confocal and flow cytometer analyses showed that immature DC efficiently captured FITC-labelled L. casei through the epithelial layer. After interaction with L. casei, DC acquired a partial maturation status (i.e., CD86 and CD54 increase) and increased their interleukin (IL)-10 and IL-12 production. Interestingly, after activation by L. casei in the presence of experimental epithelium, DC from allergic patients instructed autologous naïve CD4(+) T cells to produce more interferon-γ than without the epithelium. Thus by modulating human DC reactivity, LAB and intestinal epithelium might modify T cell immune response and regulate the development of allergic reaction

Endocan (un médiateur du dialogue endothélial dans le cancer et le sepsis)

L'incidence et le taux de mortalité des cancers broncho-pulmonaires et des états septiques restent de nos jours un problème majeur de santé publique. La découverte de nouvelles approches thérapeutiques est un axe majeur de la recherche clinique et fondamentale. Le dialogue endothélial, qui permet le développement de la réaction inflammatoire représente un des pivots dans le développement de ces deux pathologies. Mon travail s'est focalisé sur un des médiateurs de ce dialogue : endocan. Il s'agit d'un protéoglycane sécrété spécifiquement par l'endothélium. Des études cliniques, chez des patients atteints de cancers pulmonaires non à petites cellules d'une part, et chez des patients en état de choc septique d'autre part, montrent une augmentation significative du taux d'endocan circulant, et présente un caractère pronostic. Endocan promeut la croissance tumorale de la lignée non tumorigène HEK 293 chez la souris immunodéficiente SCID. Les propriétés d'endocan, sont hautement liées à sa double nature biochimique (protéine et glycosaminoglycane). Ainsi, l'absence de la chaîne de glycosaminoglycane ou la mutation d'une région interne du corps protéique d'endocan abolit son activité pro-tumorale. Le gène d'endocan est transcrit en deux isoformes: une forme majoritaire bien décrite contenant l'exon 2, endocan, et une forme nouvellement découverte, minoritaire, dépourvu de l'exon 2, endocan 2. La caractérisation d'endocan 2 a permis d'étudier l'implication de la séquence dérivée de l'exon 2 dans l'action tumorale d'endocan. Ainsi la délétion de cette séquence modifie le degré de substitution du site unique de O-glycosylation, favorise la formation d'oligomères et diminue le taux de sécrétion, définissant endocan 2 comme un protéoglycane facultatif de type chondroïtine / dermatane sulfate oligomérique faiblement sécrété. Ces modifications structurales expliquent la perte d'activité tumorale de cette isoforme. Le clonage et la caractérisation de l'endocan murin ont ouvert de nouvelles voies dans la compréhension du mode d'action d'endocan dans le développement tumoral. Malgré de nombreuses similitudes dans l'organisation génomique, la structure de la protéine et la nature de la chaîne de glycosaminoglycane avec son orthologue humain, l'endocan murin est sécrété sous les formes d'un protéoglycane et de la partie protéique seule et ne promeut pas la croissance de cellules non spontanément tumorale (HEK 293) chez la souris immunodéficiente. De même, alors qu'endocan humain augmente la croissance de la lignée spontanément tumorale (HT-29) chez la souris SCID, l'endocan murin et les formes non glycosylables d'endocan humain et murin (obtenues par mutagenèse dirigée du site de O-glycosylation) en diminue la croissance. Ces différences mettent en avant une activité antagoniste du corps protéique sur le protéoglycane d'endocan. Endocan lie le LFA-1, inhibe l'interaction ICAM-1/LFA-1 et ainsi inhibe potentiellement le recrutement leucocytaire LFA-1 dépendant. Après la mise en place d'un modèle de choc endotoxinique chez la souris et l'étude de l'expression d'endocan murin, l'intérêt thérapeutique d'endocan en physiopathologie septique a été abordé. Les résultats préliminaires ont montré un rôle protecteur de l'injection d'endocan contre des doses létales de LPS. Par contre l'administration des anticorps anti-endocan ne modifie pas la réaction inflammatoire. La nécessité de quantité importante de biomolécules recombinantes (endocan et anticorps monoclonaux) pour les modèles animaux, nous a amené à développer des outils de production en masse de biomolécules, en cellules eucaryotes. Ces travaux de recherche ont ainsi permis de mieux caractériser endocan en tant que médiateur du dialogue endothélial en pathologie cancéreuse et septique par l'étude de l'isoforme naturelle délétée de l'exon 2 et de son orthologue murinLILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocSudocFranceF

Caractérisation moléculaire et fonctionnelle d'une nouvelle molécule de l'endothélium vasculaire, ESM-1 (applications en pathologies cancéreuses et inflammatoires humaines)

En 1996, une nouvelle sequence d'adnc fut clonee a partir d'une banque d'adnc de cellules endotheliales (huvec) dans notre laboratoire et brevetee sous le nom de endothelial-cell specific molecule-1 (esm-1). Nos travaux ont caracterise esm-1 moleculairement et fonctionnellement. La strategie de recherche fut basee sur l'etude structure/activite de la molecule. Nos travaux ont demontre progressivement (1) que esm-1 est une molecule de 50kd relarguee dans le sang, dont la secretion est controlee positivement par le tnf et negativement par l'ifn- et dont l'elevation du taux serique chez des patients presentant un choc septique constitue un marqueur diagnostique de la gravite du syndrome ; (2) qu'il s'agit en fait d'un nouveau proteoglycane extracellulaire de type chondroitine/dermatane sulfate, constitue d'un core proteique original et d'un glycosaminoglycane (gag) particulier potentialisant fortement l'activite mitogenique du hgf/sf sur des cellules epitheliales renales humaines (hek) ; (3) que esm-1 se fixe sur les lymphocytes humains au niveau de la 2 integrine lfa-1 et inhibe ainsi l'interaction lfa-1/icam-1, essentielle dans de nombreuses cooperations intercellulaires (adhesion, reponse anti-tumorale) ; (4) que esm-1 se fixe avec une forte affinite au fgf-2 et au fgf-7, par l'intermediaire de son gag, et controle leur activite biologique ; (5) que la transfection ectopique et stable de esm-1 dans des cellules hek leur confere un fort potentiel tumoral dans un modele tumoral xenogenique chez la souris scid.A ce jour, nos travaux soulignent le role primordial joue par esm-1 dans des pathologies telles que le cancer et la reaction inflammatoire systemique, ainsi que l'interet d'utiliser le taux serique de esm-1 comme valeur pronostique dans ces pathologies. De plus, ils constituent une base solide pour elaborer des strategies therapeutiques nouvelles anti-esm-1 contre le cancer et l'inflammation (strategies anti-peptide, anti-gag ou genique).LILLE1-BU (590092102) / SudocSudocFranceF

Endothélium et agressions pulmonaires aiguës

LILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocSudocFranceF

Mécanismes de sensibilisation par voie aérienne (interactions entre cellules épithéliales bronchiques et cellules dendritiques)

LILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocSudocFranceF

Complications sévères de l'immunothérapie intravésicale par BCG (étude de 11 cas)

LILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

Mécanismes inflammatoires dans l'asthme sévère

LILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocSudocFranceF

Prostaglandin D 2

peer reviewedAmong the factors produced at inflammatory sites and those capable of modulating dendritic cell (DC) functions, PGD(2) may be important in the outcome of immune responses. The biological roles for PGD(2) are in part effected through two plasma membrane G protein-coupled receptors: the D prostanoid (DP) receptor and the chemoattractant receptor-homologous molecule expressed on Th2 lymphocytes (CRTH2). In this report, we studied the effects of PGD(2) and of its major physiological metabolite, 15-deoxy-Delta(12,14)-PGJ(2) (15d-PGJ(2)), on the functions of human monocyte-derived DC. First, we show that PGD(2) exerts in vitro chemotactic effects on monocytes via CRTH2 activation while it inhibits the chemokine-driven migration of monocyte-derived DC through DP. We also report that PGD(2) and 15d-PGJ(2) alter the LPS- and allergen-induced DC maturation and enhance the CD80/CD86 ratio on mature DC in a DP- and CRTH2-independent manner. Moreover, PGD(2) and 15d-PGJ(2) strongly reduce the secretion of the Th1 promoting cytokine IL-12 and affect the synthesis of chemokines involved in Th1 cell chemotaxis, particularly CXCL10. Inhibition of cytokine/chemokine secretion implicates at least in part DP, but not CRTH2. The effects exerted by PGD(2) are associated with the phosphorylation of CREB, but do not parallel with the deactivation of the NF-kappa B and mitogen-activated protein kinase pathways. In contrast, 15d-PGJ(2) seems to target other cellular proteins. Finally, in a model of Th CD45RA(+) differentiation induced by allergen- and superantigen-pulsed DC, PGD(2) impacts on the orientation of the immune response by favoring a Th2 respons

Release of granule proteins by eosinophils from allergic and nonallergic patients with eosinophilia on immunoglobulin-dependent activation

International audienceThe release of eosinophil peroxidase (EPO) and eosinophil cationic protein (ECP) was evaluated after incubation of eosinophils (EOSs) from allergic subjects with the specific allergen or with anti-IgE monoclonal antibodies (MAbs). High levels of EPO could be released after addition of the specific allergen (and not unrelated ones) or anti-IgE MAb. Moreover, EPO release with the two stimuli was significantly correlated both in allergic and in nonallergic patients. In the same supernatants, another granule protein, ECP, could not be detected, suggesting a lack of correlation between EPO and ECP release after IgE-dependent stimulation. However, when EOSs with surface-IgA antibodies were incubated with anti-IgA MAb, both EPO and ECP were released. In contrast, incubation of EOSs with anti-IgG MAb induced mainly the release of ECP and not EPO. These results indicate that pharmacologically active mediators can be released by EOSs from allergic and nonallergic patients on immunoglobulin-dependent activation. The results also confirm the hypothesis of a selective release of the various granule proteins and raise the question of transduction signals delivered by the three Fc receptors (Fc epsilon R, FC alpha R, and FC gamma R) present on human EOSs