39 research outputs found
ΠΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅, Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΡΡΠΎΠΏΠΈΠ½Π° ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°
Growth hormone (GH) is a polypeptide produced in the anterior pituitary lobe that triggers different biochemical pathways and increases cell proliferation and growth. In this work, the pNic based vector for periplasmatic secretion was developed. Recombinant human growth hormone was produced via periplasmatic secretion (42h, 30 Β°Π‘) followed by several steps of purification. GH obtained does not contain His-tag. Expression level of 2,85 mg per1 literof bacterial culture was achieved.Π‘ΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΡΡΠΎΠΏΠΈΠ½ β Π³ΠΎΡΠΌΠΎΠ½ ΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΄Ρ, ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉΡΡ Π² ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄Π½Π΅ΠΉ Π΄ΠΎΠ»Π΅ Π³ΠΈΠΏΠΎΡΠΈΠ·Π° ΠΈ ΡΡΠΈΠ»ΠΈΠ²Π°ΡΡΠΈΠΉ ΠΏΡΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΠΈ ΡΠΎΡΡ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°. Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½Π° ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΡ Π΄Π»Ρ ΠΏΠ΅ΡΠΈΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΡΡΠΎΠΏΠΈΠ½Π° ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ° Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ pNic, ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±ΡΠ°Π½Ρ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡ Π΄Π»Ρ ΠΏΠ΅ΡΠΈΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ (42 Ρ, 30 Β°Π‘), ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Ρ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΈ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠΈ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ° ΡΠ΅Π»Π΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°, Π½Π΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠ΅Π³ΠΎ Π³ΠΈΡΡΠΈΠ΄ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠ»Π°ΡΡΠ΅ΡΠ°. ΠΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°Ρ ΡΠ΅Π»Π΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½ΠΈ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠΈ ΠΈ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌΡ ΠΏΠΎ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ°ΡΡΠ΅ (MW 22301,9 ΠΠ°). ΠΠ±ΡΠ΅Π΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΡΡΠΎΠΏΠΈΠ½Π° ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ° ΡΠΎΡΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΠΎ 2,85 ΠΌΠ³ Π½Π° Π»ΠΈΡΡ ΡΡΠ΅Π΄Ρ
ΠΠΠΠΠΠ£ΠΠ―Π ΠΠΠ ΠΠΠΠΠΠ ΠΠΠΠΠΠ, ΠΠΠ’ΠΠ ΠΠΠΠΠΠ§ΠΠ‘ΠΠΠ― ΠΠΠ‘ΠΠ ΠΠ‘Π‘ΠΠ― Π ΠΠΠΠ£Π§ΠΠΠΠ Π ΠΠΠΠΠΠΠΠΠΠ’ΠΠΠΠ Π‘ΠΠΠΠ’ΠΠ’Π ΠΠΠΠΠ GALLUS GALLUS
Growth hormones (GH) are polypeptides that trigger different biochemical pathways. GH main function is to regulate anabolic and catabolic processes. GH also plays an important role as immunomodulator. In this paper, molecular cloning, heterological expression and purification of the recombinant G. gallus growth hormone have been conducted. Two biotechnological schemes have been developed: cytosol expression followed by inclusion bodies solubilisation and periplasmatic secretion. Expression levels of 2.43 and 15 mg per 1 liter of bacterial culture respectively were achieved. It has been shown that the best way of expression is periplasmatic secretion, which does not require complex solubilisation and refolding procedures and results in higher product yield and purity.Π‘ΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΡΡΠΎΠΏΠΈΠ½Ρ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡΡΡ ΠΊ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ
Π³ΠΎΡΠΌΠΎΠ½ΠΎΠ², Π·Π°ΠΏΡΡΠΊΠ°ΡΡΠΈΡ
ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠ°ΡΠΊΠ°Π΄Ρ Π±ΠΈΠΎΡ
ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΒΡΠΊΠΈΡ
ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΎΠ². ΠΡΠ½ΠΎΠ²Π½Π°Ρ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΡ ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΡΡΠΎΠΏΠΈΠ½Π° β Π²Π»ΠΈΡΠ½ΠΈΠ΅ Π½Π° Π°Π½Π°Π±ΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΈ ΠΊΠ°ΡΠ°Π±ΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΡΠ³Π°ΒΠ½ΠΈΠ·ΠΌΠ°, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΌΠΎΠ΄ΡΠ»ΠΈΡΡΡΡΠ°Ρ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΡ. Π ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΎ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅, Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΈ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠ° ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΡΡΠΎΠΏΠΈΠ½Π° Gallus gallus. Π‘ΠΎΠ·Π΄Π°Π½Ρ Π΄Π²Π΅ ΡΠ΅Ρ
Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΒΡΠΊΠΈΠ΅ ΡΡ
Π΅ΠΌΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΡΡΠΎΠΏΠΈΠ½Π°: Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½Π°Ρ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠΎΠ»ΡΠ±ΠΈΠ»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠ΅ΠΉ ΡΠ΅Π»Π΅Ρ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠΈΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΡΡΠΎΠΏΠΈΠ½Π° Π² Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ
. ΠΡΡ
ΠΎΠ΄ ΡΠ΅Π»Π΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ Π³ΠΎΡΠΌΠΎΠ½Π° ΡΠΎΡΡΠ°Π²ΠΈΠ» 2,43 ΠΈ 15 ΠΌΠ³ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Π½Π° Π»ΠΈΡΡ ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅Π΄Ρ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ. Π ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΡΡΠ°ΡΠ΅Π³ΠΈΡ ΠΏΠ΅ΡΠΈΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ, ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ Π½Π΅Ρ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ Π² ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΡΡ
ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Ρ
ΡΠΎΠ»ΡΠ±ΠΈΠ»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΈ ΡΠ΅ΡΠΎΠ»Π΄ΠΈΠ½Π³Π° ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΠΌΡΠΉ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²ΡΠΉ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ Ρ
Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΈΠΌ Π²ΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΈ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½ΡΡ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠΈ
Π‘ΠΠΠ’-Π‘ΠΠΠ¦ΠΠ€ΠΠ§ΠΠΠ ΠΠΠΠ’ΠΠΠΠΠΠ ΠΠΠΠΠΠ ΠΠΠΠΠΠ Π ΠΠΠΠ’ΠΠΠΠ, ΠΠΠΠΠΠΠΠΠΠΠΠΠΠΠ«Π₯ ΠΠ ΠΠΠΠ ΠΠ§ΠΠ‘Π’ΠΠ¦ΠΠ₯, Π ΠΠΠΠΠΠΠΠΠΠ’ΠΠΠ ΠΠΠΠ’ΠΠ ΠΠΠΠΠΠΠ
To obtain catalytically active recombinant biotin ligase (rBirA), we developed an approach for heterologous expression of BirA-MBP-fusion protein in E. coli cells, its purification and subsequent rBirA release by highly specific proteolysis using TEV protease. The recombinant protein is obtained in homogeneous state and retains specific catalytic activity. Enzyme immobilization on magnetic microparticles has allowed to develop an approach for effective enzymatic biotinylation combined with purification of target protein molecules on the affinity matrix.Π‘ ΡΠ΅Π»ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΠΎΠΉ Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠ½ Π»ΠΈΠ³Π°Π·Ρ (rBirA) ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½ ΠΏΠΎΠ΄Ρ
ΠΎΠ΄ ΠΊ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠΈΡΠΎΠ³ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° MBP-BirA ΠΏΡΡΠ΅ΠΌ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ
E. coli, Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅ΠΉ Π΅Π³ΠΎ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠΎΠΉ ΠΈ Π²ΡΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ rBirA Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΎΠ»ΠΈΠ·Π° TEV ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π°Π·ΠΎΠΉ. Π Π΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ Π² Π³ΠΎΠΌΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ. ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠΌΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π½Π° ΠΌΠ°Π³Π½ΠΈΡΠ½ΡΡ
ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ°Ρ
ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΎ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Ρ
ΠΎΠ΄ ΠΊ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΌΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΌΡ Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠ½ΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ, ΡΠΎΠ²ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΌΡ Ρ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠΎΠΉ ΡΠ΅Π»Π΅Π²ΡΡ
Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²ΡΡ
ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» Π½Π° Π°ΡΡΠΈΠ½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅.
ΠΠ΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈ ΡΠΈΠ·ΠΈΠΊΠΎ-Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π° ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΡΠΎΡ ΡΠΎΠΌΠ° CYP1B1 ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°
In order to study the catalytic properties of CYP1B1 toward a number of steroid compounds, we have developed an effective system of heterologous expression of hemoprotein in E.coli and isolated the preparation of recombinant CYP1B1 Β«solubleΒ» form in a highly purified state. The interaction parameters of the purified enzyme with steroid ligands have been determined.Π‘ ΡΠ΅Π»ΡΡ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ
ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ² Π‘YP1B1 ΠΏΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊ ΡΡΠ΄Ρ ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΈΠ΄Π½ΡΡ
ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠΉ Π½Π°ΠΌΠΈ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½Π° ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½Π°Ρ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈΠΈ Π³Π΅ΠΌΠΎΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΈΠ΄Π° Π² E.coli ΠΈ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ Π² Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΎΡΠΈΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ Β«ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΈΠΌΡΠΉΒ» ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°Ρ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ CYP1B1. Π£ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²Π»Π΅Π½Ρ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΡ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° Ρ ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΈΠ΄Π½ΡΠΌΠΈ Π»ΠΈΠ³Π°Π½Π΄Π°ΠΌΠΈ
Π‘ΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ½Π°Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΈΠ΄ 21-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»Π°Π·Ρ ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ° ΠΈ Π²Π»ΠΈΡΠ½ΠΈΠ΅ ΡΠΈΡΠΎΡ ΡΠΎΠΌΠ° b5 Π½Π° Π΅Π΅ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ
Human cytochrome CYP21 (steroid 21-hydroxylase) has been expressed in Escherichia coli DH5Ξ± and the expression level was 150 nmol from 1 liter of bacterial culture. Utilizing two steps of column chromatography has allowed to obtain highly purified protein. Steroids have been screened as potential substrates for the enzyme. CYP21 showed typical spectral change (type I of spectral responce) when binding with progesterone, 17Ξ±-hydroxyprogesterone and 11-hydroxyprogesterone. In addition, it has been shown that cytochrome b5 does not affect hydroxylase activity of CYP21 toward progesterone, 17a-hydroxyprogesterone and 11-hydroxyprogesterone.Π¦ΠΈΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌ CYP21 ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ° (ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΈΠ΄ 21-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»Π°Π·Π°) Π±ΡΠ» ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ
Escherichia coli DH5Ξ± (ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠΎΡΡΠ°Π²ΠΈΠ» 150 Π½ΠΌΠΎΠ»Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Π½Π° 1 Π»ΠΈΡΡ ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅Π΄Ρ). ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π²ΡΡ
ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΎΡΠ½ΡΡ
Ρ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΠ³ΡΠ°ΡΠΈΠΉ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΡΡ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½ΠΈ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠΈ, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡΠΈΠΉ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ 21-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»Π°Π·Π½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΏΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊ ΠΏΡΠΎΠ³Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ½Ρ, 17Ξ±-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ³Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ½Ρ ΠΈ 11-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈ-ΠΏΡΠΎΠ³Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ½Ρ. Π Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΡΡ ΡΠΊΡΠΈΠ½ΠΈΠ½Π³ ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΠΎΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠΎΠ² Π΄Π»Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°. ΠΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΠ΅ Π΄ΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ 11-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ³Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ½ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΠΌ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ CYP21. ΠΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΠΈΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌ b5, Π² ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΎΡ Π΅Π³ΠΎ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠ° Π½Π° CYP17A1, Π½Π΅ ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π²Π»ΠΈΡΠ½ΠΈΡ Π½Π° 21-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»Π°Π·Π½ΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ CYP21 ΠΏΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊ ΠΏΡΠΎΠ³Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ½Ρ, 11-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ³Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ½Ρ ΠΈ 17-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ³Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ½Ρ, ΡΡΠΎ ΡΠ²ΠΈΠ΄Π΅ΡΠ΅Π»ΡΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ ΠΎ ΡΠ°Π·Π½ΡΡ
ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°Ρ
ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ Π΄Π²ΡΡ
ΠΈΠ·ΠΎΡΠΎΡΠΌ ΡΠΈΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ° Π 450 Π² ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Π°Ρ
ΡΠ½Π΄ΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΈΠΊΡΠ»ΡΠΌΠ° ΠΊΠΎΡΡ Π½Π°Π΄ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΈΠΊΠΎΠ²
Π€ΠΠΠΠΠ«Π ΠΠΠ‘ΠΠΠΠ Π ΠΠΠΠ‘Π’Π Π£ΠΠ ΠΠΠΠΠΠ ΠΠΠ’ΠΠ’ΠΠ Π‘ ΠΠΠΠΠΠΠ«ΠΠ Π‘ΠΠΠΠ‘Π’ΠΠΠΠ
Antibodies are an essential tool being a part of immunodiagnostics, therapeutics and life science research instruments. In this paper we analyze the recent developments in recombinant antibodies generation by means of phage display technology. We also provide our own results dedicated to antibodies development process. Analysis of antibody-antigen complexes with resolved structures allow to create synthetic phage display library of Fab antibody fragments with the diversity of 1010 independent clones. Utilizing a negative selection approach, we succeeded in generation and characterization of specific single-domain antibodies that has substantially different binding kinetics to CYP11B2 and CYP11B1 isoenzymes β proteins with 93% sequence identity. We also generated specific binders to a few high-molecular weight human antigens β erytropoetin, growth hormone and thyroperoxidase.Π£Π½ΠΈΠΊΠ°Π»ΡΠ½Π°Ρ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΡ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΊΠ»ΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ
Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π» Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ Ρ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ»Π° ΠΈΠΌ Π·Π°Π½ΡΡΡ Π²Π΅Π΄ΡΡΠ΅Π΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π² ΡΠ΅ΡΠ°ΠΏΠΈΠΈ ΠΎΠ½ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ
ΠΈ Π°ΡΡΠΎΠΈΠΌΠΌΡΠ½Π½ΡΡ
Π·Π°Π±ΠΎΠ»Π΅Π²Π°Π½ΠΈΠΉ, ΡΡΠ°ΡΡ Π½Π΅Π·Π°ΠΌΠ΅Π½ΠΈΠΌΡΠΌ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠΌ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΎΠΌΠ½ΡΡ
ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ ΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΎΠΌ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ
ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌ. ΠΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ ΠΎΠ±Π·ΠΎΡ Π½ΠΎΠ²Π΅ΠΉΡΠΈΡ
Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ½ΡΡ
Π΄Π°Π½Π½ΡΡ
ΠΏΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΡΠ°Π³ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΈΡΠΏΠ»Π΅Ρ Π΄Π»Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΡ
Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π», ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠΌΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π°ΠΌΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΡΡ Π½Π΅Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΡΠΎΠ±ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΎΡΠΈΠ³ΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ Π² ΡΡΠΎΠΉ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠΈ. ΠΠ° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π±ΠΈΠΎΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΡΡΡΡΠΊΡΡΡ Π΄Π΅ΠΏΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠ² Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π» Ρ Π°Π½ΡΠΈΠ³Π΅Π½Π°ΠΌΠΈ Π½Π°ΠΌΠΈ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π½Π° ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°ΡΠΎΡΠ½Π°Ρ Π±ΠΈΠ±Π»ΠΈΠΎΡΠ΅ΠΊΠΈ Fab ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π» ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡΠ°Ρ ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΈΠ΅ΠΌ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ 1010 Π½Π΅Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΡ
ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΎΠ² ΠΈ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Π°Ρ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΡΡ ΠΈΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΊΠΎΠΌ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΡ
Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π». Π‘ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π½Π΅Π³Π°ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π»Π΅ΠΊΡΠΈΠΈ Π½Π°ΠΌΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Ρ ΠΈ Ρ
Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ΄ΠΎΠΌΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π° ΠΊ Π°Π»ΡΠ΄ΠΎΡΡΠ΅ΡΠΎΠ½-ΡΠΈΠ½ΡΠ°Π·Π΅ (ΡΠΈΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌ Π 45011Π2, CYP11B2), Π½Π΅ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡΠΈΠ΅ Π² ΠΠ€Π ΠΊΡΠΎΡΡ-ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ Ρ Π΅Π΅ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΎΠΌ CYP11B1 (93% ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ), Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π° ΠΊ ΡΠ°ΠΊΠΈΠΌ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΠΌ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΠΌ, ΠΊΠ°ΠΊ ΡΡΠΈΡΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠ½, ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΡΡΠΎΠΏΠ½ΡΠΉ Π³ΠΎΡΠΌΠΎΠ½ ΠΈ ΡΠΈΡΠ΅ΠΎΠΏΠ΅ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ΄Π°Π·Π° ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°.
ΠΠΠΠ’ΠΠΠΠ«Π Π€ΠΠΠΠΠ«Π ΠΠΠ‘ΠΠΠΠ Π Π‘ΠΠ ΠΠΠΠΠΠ ΠΠΠΠ’ΠΠΠΠΠΠΠΠ’ΠΠΠΠ Π’Π ΠΠΠΠΠΠ‘ΠΠ Π‘ΠΠΠ’ΠΠΠ«
In order to identify potential inhibitors and modulators of thromboxane synthase, its molecular cloning, heterologousΒ expression, isolation, and purification have been carried out. The recombinant protein is isolated in the homogenous state andΒ possesses the functional activity. Peptide with an amino acids sequence SGVYKVLYDWQHGGF is identified using the randomΒ dodecapeptides phage library. It is revealed that this peptide has a great similarity to thrombopoietin peptidomimetic.Β This allows one to suppose the role of this hormone in the thromboxane synthase regulation.Π‘ ΡΠ΅Π»ΡΡ ΠΏΠΎΠΈΡΠΊΠ° ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΠΎΡΠΎΠ² ΠΈ ΠΌΠΎΠ΄ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠΎΠ² Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌΠ±ΠΎΠΊΡΠ°Π½ ΡΠΈΠ½ΡΠ°Π·Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Π° Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠ° ΡΡΠΎΠΌΠ±ΠΎΠΊΡΠ°Π½ ΡΠΈΠ½ΡΠ°Π·Ρ ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°. Π Π΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ Π² Π³ΠΎΠΌΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π΅Ρ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ. Π‘ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΠ°Π³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ Π±ΠΈΠ±Π»ΠΈΠΎΡΠ΅ΠΊΠΈΒ ΡΠ°Π½Π΄ΠΎΠΌΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
Π΄ΠΎΠ΄Π΅ΠΊΠ°ΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ ΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄ Ρ Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΎΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΡΒ SGVYKVLYDWQHGGF, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡΠΈΠΉ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΈΠΌ ΡΡΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΠΊ Π±Π΅Π»ΠΊΡ. ΠΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠ΅ ΡΡ
ΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎ Π΅Π³ΠΎ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΡ ΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄ΠΎΠΌΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠΊΠ° ΡΡΠΎΠΌΠ±ΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠ½Π°, ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ ΡΠΎΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎΒ Π³ΠΎΡΠΌΠΎΠ½Π° Π² ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌΠ±ΠΎΠΊΡΠ°Π½ ΡΠΈΠ½ΡΠ°Π·Ρ
ΠΠ‘ΠΠΠΠΠΠΠ‘Π’Π ΠΠΠΠΠΠΠΠΠΠ‘Π’ΠΠΠ― ΠΠΠΠΠ‘ΠΠΠΠ ΠΠΠ©ΠΠ₯ Π‘ΠΠΠΠΠΠΠΠΠ Π‘ ΠΠΠΠΠΠΠ Π€ΠΠ«ΠΠ ΠΠΠΠ€ΠΠ ΠΠΠΠ CYP2C9
Azole-containing compounds are often co-administrated with different classes of medications, and are widely used as pesticides in agriculture. Besides the main action, azole-containing compounds can directly affect the human cytochrome P450 system, inhibiting the human CYP catalytic activity, and thereby leading to metabolism disturbances and the elimination of other drugs, causing the toxic effect or resulting in a complete absence of the effect of the drug used. In the context of polypharmacy, it is important to take into account the influence of the genetic polymorphism of CYP2C9 both on the metabolism of individual drugs and on drug-drug interactions. In this paper, a comprehensive comparative study was conducted to assess the binding of various pesticides and antifungal drugs to the active center of CYP2C9*1, CYP2C9*2, CYP2C9*3. We have shown significant differences in the azole affinity to CYP2C9*1, CYP2C9*2, and CYP2C9*3. The obtained findings allow us to predict drug-drug interactions, as well as changes in the metabolism of drugs in the presence of specific xenobiotics.ΠΠ·ΠΎΠ»ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠ΅ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ°ΡΡΠΎ Π½Π°Π·Π½Π°ΡΠ°ΡΡΡΡ ΡΠΎΠ²ΠΌΠ΅ΡΡΠ½ΠΎ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠΌΠΈ ΠΊΠ»Π°ΡΡΠ°ΠΌΠΈ Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ², Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΡΠΈΡΠΎΠΊΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡΡΡΡ Π² ΡΠ΅Π»ΡΡΠΊΠΎΠΌ Ρ
ΠΎΠ·ΡΠΉΡΡΠ²Π΅ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΏΠ΅ΡΡΠΈΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². ΠΠΎΠΌΠΈΠΌΠΎ ΡΠ΅Π»Π΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ²ΠΎΠ³ΡΠΈΠ±ΠΊΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ, Π΄Π°Π½Π½ΡΠΉ ΠΊΠ»Π°ΡΡ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠΉ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π½Π΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π²Π»ΠΈΡΡΡ Π½Π° ΡΠΈΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΡ P450 ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°, ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΡΡ ΠΈΡ
Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ, ΠΈ ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ°ΠΌΡΠΌ Π·Π°ΠΌΠ΅Π΄Π»ΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠ°Π±ΠΎΠ»ΠΈΠ·ΠΌ ΠΈ Π²ΡΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ
Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ² ΠΈΠ· ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°, Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°Ρ ΡΠΎΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΠ΅ ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠ° ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ°. Π ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ
ΡΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΡΠ°ΡΠΌΠ°ΡΠΈΠΈ Π²Π°ΠΆΠ½ΠΎ ΡΡΠΈΡΡΠ²Π°ΡΡ Π²Π»ΠΈΡΠ½ΠΈΠ΅ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈΠ·ΠΌΠ° ΡΠΈΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠΎΠ² Π 450 ΠΊΠ°ΠΊ Π½Π° ΠΌΠ΅ΡΠ°Π±ΠΎΠ»ΠΈΠ·ΠΌ ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΡΡ
Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ², ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π½Π° ΠΌΠ΅ΠΆΠ»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠ΅ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ. Π Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΎ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΠ΅ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ
ΠΏΠ΅ΡΡΠΈΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ²ΠΎΠ³ΡΠΈΠ±ΠΊΠΎΠ²ΡΡ
Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ² Ρ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΎΠΌ CYP2C9*1, CYP2C9*2, CYP2C9*3 ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°. ΠΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈΠ·ΠΌ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π²Π»ΠΈΡΠ΅Ρ Π½Π° ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΡ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π°Π·ΠΎΠ»ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΡ
ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠΉ Ρ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΎΠΌ CYP2C9. ΠΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ ΠΌΠ΅ΠΆΠ»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠ΅ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠ°Π±ΠΎΠ»ΠΈΠ·ΠΌΠ° Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ² Π² ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ
ΠΊΡΠ΅Π½ΠΎΠ±ΠΈΠΎΡΠΈΠΊΠΎΠ².
ΠΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠΈΠΏΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ CYP2D6, CYP2C9, CYP2C19, CYP1A2 ΠΈ MDR1 Π² ΠΏΠ΅ΡΡΠΎΠ½Π°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈΡ ΠΎΡΠ°ΡΠΌΠ°ΠΊΠΎΡΠ΅ΡΠ°ΠΏΠΈΠΈ
Accurate and reproducible techniques for determining key polymorphism of drug metabolizing CYP450 and MDR1 genes have been designed. Based on those techniques, pharmacogenetic test as well as genetic data interpretation algorithm has been developed, which allows to personalize and improve the effectiveness of psychopharmacotherapy.Π Π°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½Ρ ΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅ Π²ΠΎΡΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠΈ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈΠ·ΠΌΠ° Π³Π΅Π½ΠΎΠ² CYP 450, ΡΡΠ°ΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ
Π² Π±ΠΈΠΎΡΡΠ°Π½ΡΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΠΈ Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ², ΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ° Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ² MDR1. ΠΠ° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ
ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½ ΡΠ°ΡΠΌΠ°ΠΊΠΎΠ³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΡΠ΅ΡΡ, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π°Π»Π³ΠΎΡΠΈΡΠΌ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΏΡΠ΅ΡΠ°ΡΠΈΠΈ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ
ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΏΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΏΠΎ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅ΠΌΡΠΌ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈΠ·ΠΌΠ°ΠΌ, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡΠΈΠΉ ΠΏΠ΅ΡΡΠΎΠ½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΏΡΠΈΡ
ΠΎΡΠ°ΡΠΌΠ°ΠΊΠΎΡΠ΅ΡΠ°ΠΏΠΈΡ ΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠΈΡΡ Π΅Π΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ
Π‘ΡΡΡΠΊΡΡΡΠ° ΠΈ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΈ Π°ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠ°Π·Ρ ΠΈ Π΅Π΅ Π½Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΠΎΡΡ
The analysis of the structure and function of aromatase (SYP19) - enzyme from the family of cytochrome P-450 that catalyzes the aromatization of six-membered ring A of the steroidal skeleton, namely transformation of androgens into estrogens peripheral and tumor tissues in the body, has been performed, and data in its non-steroidal inhibitors have been summarized.ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ ΠΈ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΈ Π°ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠ°Π·Ρ (Π‘YP19) - ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΠΉΡΡΠ²Π° ΡΠΈΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠΎΠ² Π -450, ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠΌ Π½Π° ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΎΠΌ ΠΏΠ»Π΅ΡΠ΅ 15-ΠΉ Ρ
ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΡ (Π»ΠΎΠΊΡΡ 15q21) Π³Π΅Π½ΠΎΠΌ CYP19A1, ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ Π°ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΡΠ΅ΡΡΠΈΡΠ»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΊΠ»Π° Π ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΈΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΊΠ΅Π»Π΅ΡΠ° ΠΈ ΠΎΠ±ΡΡΠ»Π°Π²Π»ΠΈΠ²Π°ΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠ°Π±ΠΎΠ»ΠΈΠ·ΠΌ ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΈΠ΄Π½ΡΡ
Π³ΠΎΡΠΌΠΎΠ½ΠΎΠ², Π° ΠΈΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ ΡΡΠ°Π½ΡΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΡ Π°Π½Π΄ΡΠΎΠ³Π΅Π½ΠΎΠ² Π² ΡΡΡΡΠΎΠ³Π΅Π½Ρ ΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΈ ΠΎΠΏΡΡ
ΠΎΠ»Π΅Π²ΡΠΌΠΈ ΡΠΊΠ°Π½ΡΠΌΠΈ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°. ΠΠ±ΠΎΠ±ΡΠ΅Π½Ρ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎ Π΅Π΅ Π½Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΈΠ΄Π½ΡΠΌ ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΠΎΡΠ°ΠΌ. ΠΠ±ΡΡΠΆΠ΄Π΅Π½Ρ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ ΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ Π‘YP19, ΠΎΠ±ΡΡΠ»Π°Π²Π»ΠΈΠ²Π°ΡΡΠΈΠ΅ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅ Ρ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½ΠΎΠΉ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ ΠΈ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ, ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄Π½Π΅Π³ΠΎ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ Π»ΠΈΠΏΠΈΠ΄Π½ΡΠΌ Π±ΠΈΡΠ»ΠΎΠ΅ΠΌ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ ΠΈ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°. ΠΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌΠΈ ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ Π‘YP19 Π² Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠ΅ Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ Π°Π·ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈ Π°Π·ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠ΅ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡΠΈΠΊΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ