경계선 성격장애 성향자의 부적응적 정서조절 : 정서적 회피를 중심으로

학위논문(석사) --서울대학교 대학원 :심리학과 임상·상담심리학 전공,2006.Maste

Staphylococcus aureus 살균 인공 리신 (gCHAP-LysK) 개발

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 수의과대학 수의학과, 2019. 2. 김재홍.Staphylococcus aureus는 사람, 가축 및 가금의 다양한 감염증을 초래하며 다양한 항생제 내성을 갖는 다약제 내성균의 증가로 대체 항생제 개발이 활발히 이루어지고 있다. 이들 중 박테리오파지에 의해 생성되는 리신(lysin)은 세포벽을 구성하는 두꺼운 펩티도글리칸(peptidoglycan) 층의 화학 결합을 끊어주는 효소 활성으로 세포벽을 약화시켜 살균 효능을 나타낸다. 박테리오파지 리신은 역할에 따라 효소 활성 및 세포벽 결합 도메인으로 구성되어 있으며 효소 활성 도메인은 한 개 또는 두 개 효소 기능을 갖는 경우가 대부분이다. 각각의 효소 활성 및 세포벽 결합 부분은 모듈로 존재하여 개별 분리해도 고유의 활성을 보이므로 이들을 다양하게 조합하여 활성이 높고 살균 범위도 넓은 다양한 인공 리신이 개발되고 있다. 최근 활발한 게놈 연구를 통해 S.aureus의 게놈 상에 다양한 리신 유전자뿐만 아니라 세균 분열 시 작용하는 자가 리신(autolysin) 유전자도 알려져 있어 이들의 모듈을 조합하여 새로운 인공 리신을 개발할 수 있다. 본 연구에서는 S.aureus의 강력한 용균 파지인 ϕK 리신 유전자의 cysteine, histidine-dependent amidohydrolases/peptidase (CHAP) 또는 amidase (Ami) 모듈을 모든 S.aureus의 게놈 상에 존재하는 CHAP 또는 Ami 모듈로 치환함으로써 2개의 인공 리신을 작출하였다(gCHAP-LysK 및 gAmi-LysK). 대장균 S30 추출물을 기반으로 한 시험관전사/번역 (in vitro transcription/translation, IVTC/TL)과 집락 감소 효능 시험을 이용하여 인공 리신의 소 유방염 유래 S.aureus (PMB4)의 살균 활성을 평가한 결과 gCHAP-LysK의 살균 활성을 확인하였다. 또한 인공 리신을 대장균에서 발현하고 Ni-NTA chromatography로 정제하여 PMB4에 대한 살균 효능을 집락 감소 및 탁도 감소 효능시험으로 검사한 결과 살균 효능을 재확인 하였다. 따라서, 시험관전사/번역법은 대장균 발현 과정 없이 다양한 인공 리신의 살균 효능을 시험관에서 신속하게 동정하는데 사용될 수 있으며 새로운 인공 리신인 gCHAP-LysK는 소 유방염의 주요 원인인 S.aureus에 대한 항생제 후보 물질로서 유용 할 것으로 기대된다The increasing prevalence of antibiotic-resistant isolates of Staphylococcus aureus has led to develop alternative antibiotics to treat these drug-resistant pathogens. As alternative antibiotics the lytic enzymes (lysins) produced by bacteriophages weaken the integrity of thick peptidoglycan layer in the cell wall and induce destruction of bacterial body. The bacteriophage lysins are composed of two modular domains that are catalytic domain and cell wall binding domain. To date various chimeric lysins with potent antibacterial efficacies have been generated by shuffling bacteriophage lysin modules from different origins. In the present study, two chimeric lysins were generated by exchanging peptidase or amidase module of ϕK lysin with that of genomic autolysin gene, SsaA homologe or atl, of S. aureus (gCHAP-LysK and gAmi-LysK). The antibacterial activity of chimeric lysins was screened by using Escherichia coli S30 extract-based in vitro transcription and translation (IVTC/TL) and colony reduction test. The result show that the CFU of the codop-LysK- and gAmi-LysK-treated PMB4 did not decrease, but the CFU of gCHAP-LysK show a steep decrease after 30 or 60 min of incubation. The gCHAP-LysK, which confirmed the antibacterial activity by screening, was expressed in E. coli and purified by Ni-NTA chromatography. Purified gCHAP-LysK also reduced turbidity to colony forming units and Staphylococcus aureus (PMB4, strains from bovine mastitis). Thus, the IVTC/TL method can be used for rapid identification of antibacterial activity of candidate chimeric lysins, and the novel chimeric lysin, gCHAP-LysK may be useful as a candidate antibiotics against bovine mastitis S. aureus.Abstract 1. Introduction 2. Materials and methods 2.1. Bacterial strains 2.2. Synthesize the codop-LysK gene 2.3. Construction of chimeric lysin 2.4. Sequencing and Sequence analysis 2.5. In vitro transcription and translation of codop-LysK, gCHAP-LysK and gAmi-LysK 2.6. Screening for antibacterial activity of codop-LysK, gCHAP-LysK and gAmi-LysK 2.7. Expression of gCHAP-LysK and gAmi-LysK in E.coli 2.8. Antimicrobial activity testing for proteins recombinant expressed in E. coli 2.9. SDS-PAGE and Western blot analysis 2.10. Statistical analysis 3. Results 3.1. Construction of chimeric lysin 3.2. Antibacterial activity of chimeric lysin produced by IVTC/TL 3.3. Optimized expression of gCHAP-LysK in E. coli 3.4. Characterization of purified gCHAP-LysK from soluble fraction of E. coli 4. Discussion 5. References 국문초록Maste

심정지 후 저체온치료 환자의 오한 발생과 영향 요인

본 연구는 심정지 후 자발순환이 회복되고 저체온치료를 시행한 환자의 오한 발생 여부를 확인 하고 오한 발생에 영향을 미치는 요인을 파악하기 위한 서술적 조사연구이다. 연구 대상자는 2015년 1월부터 2016년 12월까지 서울시 소재 일개 상급종합병원에 심정지로 내원하여 심폐소생술 후 자발순환이 회복되고 저체온치료를 시행한 18세 이상의 성인 환자 60명이었으며, 수집된 자료는 SPSS 22.0 프로그램을 이용하여 빈도와 백분율, 평균과 표준편차, t-test, chi-square test, Fisher’s exact test, 로지스틱 회귀분석을 이용하여 분석하였다. 본 연구의 결과는 다음과 같다. 1. 전체 대상자 중 오한이 발생한 환자군은 25명(41.7%), 오한이 발생하지 않은 환자군은 35명(58.3%)으로 나타났다. 2. 대상자의 일반적 특성 중 나이(χ2 =5.55, p=.018), 체질량지수(t=7.11, p=.029)가 두 군에서 통계적으로 유의한 차이가 있었다. 3. 혈액검사 관련 특성은 크레아티닌(t=2.02, p=.048), 칼륨(t=2.54, p=.014), C-반응성 단백(t=2.26, p=.027), 유산(t=2.37, p=.021) 수치가 두 군에서 통계적으로 유의한 차이가 있었다. 4. 심폐소생술 관련 특성은 심정지 후 자발순환 회복까지 소요된 시간(χ2 =2.76, p=.008)이 두 군에서 통계적으로 유의한 차이가 있었다. 5. 저체온치료 관련 특성은 저체온치료 시작 후 목표체온까지 도달하는 유도기 시간(χ2 =-2.39, p=.020)이 두 군에서 통계적으로 유의한 차이가 있었다. 6. 심정지 후 저체온치료 환자의 오한 발생에 영향을 미치는 요인은 65세 미만의 나이(OR=3.73, 95% CI 1.13-12.35, p=.031)로 나타났다. 본 연구 결과 심정지 후 저체온치료 환자의 오한 발생에 65세 미만의 나이가 주요하게 영향을 미치는 것을 알 수 있었다. 그러므로 이 결과에 따라 65세 미만의 저체온치료 환자 간호 시 더 자주 오한 발생 여부를 관찰하고 세심하고 적극적인 오한 예방 중재를 시행하여 질 높은 간호를 제공할 수 있을 것으로 기대된다.Maste