나노구조체 기반 약물 표적 전달 및 광열치료

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 약학과, 2017. 2. 오유경.표적 약물 전달은 항암제의 치료효과를 증진시키는 유망한 전략 중의 하나로 여겨져 왔다. Protein tyrosine kinase 7 (PTK7)에 특이적으로 결합하는 것으로 알려진 DNA aptamer의 반복서열인 polyaptamer nanothread가 rolling circle amplification (RCA) 기술을 통하여 합성되었고, 환원 그래핀 나노시트 (rGO)에 polyaptamer nanothread를 수식하여 PTK7 과발현 세포주에 항암제 전달 효율을 증진시켰다. 또한 polyaptamer nanothread가 수식된 rGO (PNT/rGO)는 PTK7 과발현 암종이 이식된 쥐에 정맥주사를 통해 항암제인 doxorubicin을 효과적으로 전달하여 암의 성장을 억제하였다. RCA 기법을 통해 antisense oligonucleotide (ASO)에 상보적인 서열을 갖는 DNA nanoball을 제조하였다. Dz13과 OGX-427이 DNA nanoball에 탑재되었고, Mu peptide와 히알루론산(HA)으로 수식되어 CD44를 과발현하는 암세포에 전달하였다. Dz13과 OGX-427을 탑재한 DNA nanoball은 효과적으로 타겟 mRNA와 단백질의 발현을 억제하였고, 세포 수준과 암이식 쥐 모델에서 뛰어난 항암효과를 보였다. 광열치료는 강력하고, 상대적으로 비침습적인 암치료법으로 연구되고 있다. 본 연구에서는 탄닌산 (TA)과 철의 킬레이트 화합물에 의해 표면이 개질된 boron nitride nanosheets (BNNSs)를 안전하고 새로운 광열 치료 물질로 제시하였다. TA-Fe/BNNS는 근적외선 레이저 조사에 의해 온도가 올라가는 광감응성을 보였고, TA-Fe/BNNS의 광열효과는 암세포주의 세포사멸을 유도하였고, 암이 이식된 쥐 모델에 국소 투여 되었을 때 암조직을 완전히 제거하였다. 마지막으로, 금 나노클러스터가 봉입된 DNA nanoball (AuDNB)을 RCA 기술을 통하여 제조하였고, AuDNB는 근적외선 조사에 의한 광열 효과를 나타내었다. 또한 AuDNB를 암세포주에 처리하고, 근적외선을 조사함으로써 AuDNB의 광열 효과에 의한 암세포 사멸효과를 확인하였다.Targeted drug delivery has been considered as a promising strategy to improve therapeutic effects of anticancer agents including chemicals and biomolecules. First, DNA polyaptamer nanothreads against protein tyrosine kinase 7 (PTK7) receptor anchored onto redcued graphene oxide (rGO) nanosheets (PNTrGO) were prepared for targeted delivery. The polyaptamer was produced by rolling circle amplicifation (RCA) and introduced onto rGO nanosheets via high affinity between oligo-T sequence and rGO nanosheets. PNTrGO improved cellular uptake to PTK7 overexpressed cancer and enhanced tumor accumulation in tumor xenografted mice. Moreover, doxorubicin (Dox)-loaded PNTrGO enhanced the inhibition effect of tumor growth in PTK7-positive tumor bearing mice. Secondly, DNA nanoballs which are able to carry antisense oligonucleotide (ASO) and target to CD44 overexpressed cancer were developed. Two types of ASOs, Dz13 and OGX-427, were loaded to RCA product in complementary manner via hybridization. Furthermore, Mu peptide derived from adenovirus was condensed the ASO-loaded RCA product. Hyaluronic acid (HA) coating enhanced the cellular uptake of both Dz13 and OGX-427 to CD44-positive cancer cells, and reduced their target mRNA and proteins effectively. Photothermal therapy (PTT) has been investigated as potent and less invasive cancer treatment method. Boron nitride nanosheets (BNNSs) coated with tannic acid (TA) and iron film (TA-Fe/BNNSs) were prepared as novel and safe PTT agent. TA-Fe/BNNSs showed photothermal activity followed by NIR laser irradiation, and the photothermal effect of TA-Fe/BNNS was enough to eradicate tumor tissues after local administration to tumor-bearing mice. Lastly, gold nanocluster (AuNC)-loaded DNA nanoballs (AuDNBs) were designed as biocompatible PTT agent. AuNCs were synthesized with long single stranded DNA (ssDNA) produced by RCA and incorporated into the RCA product. The assembly of AuNCs located in DNA nanoballs generated heat after NIR laser irradiation, and the anticancer effect was achieved by AuDNB treatment followed by NIR laser irradiation in cancer cells.Chapter I. Overview 1 1. Introduction 2 2. Targeted drug delivery systems for cancer treatment 4 3. Photothermal therapy for cancer treatment 7 4. Scope of the studies 10 5. References 12 Chapter II. Polyaptamer DNA nanothread-anchored, reduced graphene oxide nanosheets for targeted delivery 25 1. Introduction 26 2. Materials and methods 29 3. Results 41 4. Discussion 58 5. References 63 Chapter III. Biomimetic DNA nanoballs for targeted oligonucleotide delivery 68 1. Introduction 69 2. Materials and methods 71 3. Results 80 4. Discussion 97 5. References 103 Chapter IV. Photoresponsive boron nitride nanosheets modified with polyphenol and iron complexes 108 1. Introduction 109 2. Materials and methods 111 3. Results 120 4. Discussion 143 5. References 149 Chapter V. Gold nanoclusters loaded DNA nanoballs for photothermal anticancer therapy 156 1. Introduction 157 2. Materials and methods 159 3. Results 164 4. Discussion 174 5. References 177 Conclusion 183 국문 초록 185Docto

서울시 시민아파트 부지의 공원녹지화 요인과 효과에 관한 연구

학위논문 (석사)-- 서울대학교 환경대학원 : 환경조경학과, 2014. 2. 이유미.본 논문은 동일한 토지가 공동주택인 아파트에서 사회 기반 시설인 공원녹지로 용도가 바뀐 현상에 주목하였다. 연구의 목적은 이러한 토지 이용의 변화가 일어난 요인과 이로 인해 발생한 효과를 밝히는 데 있다. 연구의 대상은 1960년대 후반에서 1970년대 초반 서울시에 건설된 시민아파트다. 현재 서울시에 지어진 시민아파트 건물은 99% 이상이 철거되었다. 시민아파트 건립 당시 32개였던 지구 중 철거 후 절반에 해당하는 지구의 전체 혹은 일부가 공원녹지로 바뀌었다. 본 연구는 크게 3개의 장으로 구성된다. 우선, 시민아파트의 건설에서 부지정리까지의 과정을 살펴보고, 현재 전체 32개 지구의 이용 현황을 조사하였다. 1960년대 이후 급격한 도시화로 인한 주택공급량의 부족으로 서울 시내 구릉지와 천변 등의 방치된 공공용지를 중심으로 불법·불량주거지가 형성되었다. 시민아파트는 이러한 상황을 개선하기 위해 공공의 주도로 건설된 아파트다. 그러나, 1970년 서강지구 와우아파트의 붕괴사고로 시민아파트 건설 계획은 전면 폐기되었다. 곧이어 건물의 안전에 문제가 있음이 밝혀진 뒤 구조물 안전진단 결과에 따른 각각의 건물 별로 철거가 진행되었다. 이후 1997년에 이르러 당시까지 남아 있던 건물 전체에 대한 종합적인 정리계획을 세워 향후 이용방향을 제시하였다. 그 결과, 1997년의 종합 계획 이전에 이미 공원녹지로 바뀐 부지를 포함하여 총 15개 지구의 전체 혹은 일부가 공원녹지로 용도 전환되었다. 둘째, 공동주택인 시민아파트가 사회기반시설인 공원녹지로 변화된 요인을 살펴보았다. 아파트가 공원녹지로 바뀐 주요 요인은 부지의 토지특성, 서울시 도시계획 및 공원녹지 관련 정책의 변화, 주택관련 규제의 강화에 있다. 시민아파트 부지는 표고 40미터 이상의 구릉지에 위치한 소규모 공공용지가 주를 이룬다. 이들 부지는 새로운 공동주택 건설을 위해 시민아파트가 건설된 시기에는 없었던 신설된 법적 규제를 충족하기 어려운 조건이었다. 따라서 개별 부지에 대한 자발적 개발은 지연되었고, 그 사이 안전진단 결과에 따라 철거가 결정된 시민아파트 건물은 공공에 의해 수용되었다. 또한, 이러한 변화의 시간동안 시민아파트 부지에 대한 활용은 아파트 개발을 중심에 둔 시각에서 벗어나 사회적 요구와 필요에 대응할 수 있는 공공부지로 새롭게 인식되었다. 이것은 기존 주택지 내에 공원녹지, 주차장, 어린이집 등 각종 기반시설 조성의 필요성과 요구가 증가한 상황과 맞물린다. 결과적으로 부지의 대부분이 도시 내 산림녹지를 배후에 두고 있다는 특성을 살려 시민아파트 철거 후 다수의 부지에 대한 공원녹지화가 이루어졌다. 마지막으로, 이렇게 공원녹지로 용도가 변화하면서 얻을 수 있는 효과는 다음의 네 가지로 정리된다. 첫째, 노후건축물 철거로 인한 경관개선 효과다. 시민아파트 건물은 대지조성방식, 접지방식, 건축물의 형태 등이 구릉지 경관 관리 정책의 평가 지침 상 가장 지양해야 할 모습을 띄고 있었다. 이러한 건축물을 철거함으로써 경관 훼손 요인이 제거되었다. 이후 공원녹지로 이용되면서 부지 내 건축물은 엄격한 높이 규제가 적용된다. 이로 인해 구릉지의 건전한 경관 형성에 저해되는 거대 건축물의 건립이 원칙적으로 불가능해졌다. 둘째, 공원 확충을 통해 주택밀집지역의 주거환경을 개선하였다. 시민아파트 주변은 기반시설의 정비를 필요로 하는 주택밀집지역이 대부분이다. 기반 시설 중 공원은 공간 시설로 분류되어, 주거환경 개선을 위해 우선 정비되어야 하는 대상이다. 시민아파트 부지는 도시 내 산림의 최외곽 경계부에 위치하여 상대적으로 접근이 용이하였다. 또한 아파트를 건설할 때 이미 부지의 평탄화를 마쳤으며, 접근로를 확보한 상태였다. 이를 활용하여 조성비용을 절약하면서 공원 등의 기반 시설 조성이 필요했던 지역에 도보권 이하 소규모 공원을 조성할 수 있었다. 셋째, 도시지역 내 산림의 적절한 이용을 도모하였다. 공원녹지화 부지 대부분은 서울의 주요산과 그 지맥의 경계 부분에 위치한다. 이러한 영역은 도시 산림의 이용자에게 도시공원으로써 여가·휴식·운동 공간을 제공한다. 동시에 방문이 빈번한 시설을 경계공간에 배치함으로써 내밀한 숲의 안쪽 생태환경을 지키는 역할을 동시에 수행한다. 넷째, 변화하는 도시계획에 유동적으로 대응할 수 있는 공공용지를 확보할 수 있었다. 현재 공원녹지로 전환된 필지 중 일부는 법적으로 공원녹지 지정없이 일반주거지역만 설정되어 있는 상태다. 구청은 아파트 철거 후 발생한 공공용지를 빈 땅으로 방치할 수 없었기 때문에 일단 시설물의 설치가 적은 주차장이나 공원녹지로 이용하기 시작하였다. 이때, 공원녹지화는 일시적인 용도로, 이러한 토지는 개발 유보지로 향후 도시계획 및 정책의 변화에 따라 필요한 기반시설을 추가로 조성할 수 있는 가능성의 부지다. 그리고, 공원 부지에는 법적으로 지역사회에 필요한 대부분의 기반 시설의 설치가 가능하다. 따라서 공원녹지화는 미래의 도시계획 및 사회적 변화에 융통성 있게 대응할 수 있는 선택이다. 본 연구는 1960년대 후반에는 공동주택을 건립하게 이끌었던 토지의 특성이 사회가 변화하고 시간이 흘러 시민아파트가 철거되는 시기에서는 오히려 공원녹지화를 이끌었다는 관점을 가지고 진행되었다. 더불어, 토지특성 외에 변화하는 인식과 제도가 아파트 부지가 공원녹지로 바뀌는데 영향을 미쳤다고 보았다. 동일한 토지 위에 더 이상 공동주택을 건설하기 어렵게 하는 주택 건설 규제와 제도의 발전에 공원녹지의 필요성에 대한 인식과 요구가 더해져 시민아파트가 철거되어 발생한 부지의 공원녹지화를 이끌었다. 1970년대 초반까지 서울 뿐 아니라 부산, 대구를 비롯해서 전주, 춘천 등 전국에 같은 목적을 가진 공공주택이 건설되었다. 현재 이러한 아파트는 건설 후 40년 이상이 흘러 해당 도시 내 대표적인 노후 건축물이 되었다. 이들 중 일부는 이미 철거되었거나, 현재 철거 후 부지 활용에 대해 검토 단계일 것으로 예상된다. 하지만 서울을 제외한 지역에서는 현황조차 파악되지 않았다. 노후공공아파트 부지는 기존 시가지 내에 위치하여, 변화하는 도시계획의 실행을 위해 유효하게 활용할 수 있는 공공부지다. 이러한 가치를 충분히 발휘할 수 있게 정확한 실태 파악과 종합적인 이용계획을 수립함에 있어 본 연구가 시발점이 되고자 한다.제1장 서론 제1절 연구의 배경 및 목적 제2절 연구의 범위 및 방법 1. 연구의 범위 2. 연구의 방법 제3절 선행연구 및 연구의 차별성 1. 용어의 정의 2. 선행연구 3. 연구의 차별성 제2장 시민아파트 부지 발생과 이용 제1절 시민아파트의 건립 1. 시민아파트 건립 요인 2. 시민아파트 건립 3. 시민아파트 건립의 의미와 한계 제2절 시민아파트 철거 및 지구의 정리 1. 시민아파트의 철거 2. 시민아파트 지구의 정리 제3절 시민아파트 부지 이용 현황 제3장 시민아파트 부지의 공원녹지화 요인 제1절 시민아파트 부지의 토지특성 1. 지형적 특성 2. 법제적 특성 3. 지리적 특성 제2절 법제 및 정책 변화 : 1960년대 후반-2000년대 중반 1. 도시계획 및 공원녹지 정책 2. 주택관련 정책 제3절 소결 제4장 시민아파트 부지의 공원녹지화 효과 제1절 공원녹지 확충을 통한 주거환경 개선 제2절 구릉지 경관 복원 제3절 도심 산림녹지의 이용 증대 제4절 도시계획 실행을 위한 공공용지 확보 제5장 결론 부록Maste

줄기세포와 그래핀의 융합을 통한 심근경색의 치료

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 화학생물공학부, 2015. 8. 김병수.Myocardial infarction (MI) is one of the major causes of death worldwide. However, the clinical therapies to treat MI is very limited, and the number of patients increases every year. Therefore, there is an urgent need to develop alternative therapeutic methods for cardiac repair after MI. Recently, stem cell and tissue engineering emerged as a potential strategy for MI treatment. In addition, graphene has also drawn much attention for their application in the field of biomedical engineering due to its unique electrical, chemical, optical, and physical properties. Therefore, in this dissertation presents the integration of stem cells and graphene for the treatment of MI. The major goals of this study is summarized as follows. 1) Development of a graphene platform to promote stem cell differentiation towards cardiac lineage, and the investigation of its mechanisms. 2) Improvement of stem cell therapy efficacy for MI treatment by utilizing reduced graphene oxide (RGO) to promote paracrine factor secretion and gap junction protein expression by stem cells. 3) Utilizing graphene oxide (GO) flakes to prevent stem cell anoikis when implanted to ischemia and reperfusion injury after MI. First, we showed that graphene can promote cardiomyogenic differentiation process of mesenchymal stem cells (MSCs). MSCs have drawn much attention as a source of MI therapy because MSCs are easy to isolate and expand, and are capable of differentiating into various cell types. However, the conventional methods to differentiate stem cells to cardiomyocytes require expensive growth factors or toxic chemical inducers. In this study, we demonstrated that the cardiomyogenic differentiation process of MSCs could be promoted simply by culturing MSCs on graphene without using additional inducers for the differentiation. This may be attributed to the enhanced expression of extracellular matrix (ECM) proteins related to cardiomyogenic differentiation. In addition, the signaling molecules required for cardiomyogenic differentiation are upregulated in MSCs cultured on graphene. Collectively, graphene was able to promote cardiomyogenic gene expressions in MSCs. Second, we showed that the incorporation of RGO flakes into MSC spheroids enhanced the expression of angiogenic growth factors and gap junction proteins in MSCs, and resulted in the attenuation of cardiac remodeling after MI. The secretion of paracrine factors and the formation of gap junctions by the implanted cells promote cardiac repair. The formation of spheroids by MSC clustering is known to promote growth factor secretion by promoting cell-cell interactions. However, cell-ECM interactions, which can further promote growth factor secretion, is very limited in MSC spheroids. Therefore, in this study, we incorporated RGO, which can adsorb ECM proteins, in MSC spheroids to promote cell-ECM interactions. As a result, the secretion of paracrine factors was further enhanced in MSC-RGO hybrid spheroids. The enhanced secretion of paracrine factors by the incorporation of RGO upregulated the gap junction protein expression in MSCs. The implantation of MSC-RGO spheroids promoted cardiac repair compared to the implantation of MSC spheroids. Finally, the adhesion of GO flakes to MSCs prior to implantation enhanced the therapeutic efficacy of MSCs in MI. The restoration of blood flow after MI results in a burst of reactive oxygen species (ROS). ROS hinders the adhesion of the implanted MSCs to the injured myocardium, resulting in cell anoikis (i.e. cell death due to the loss of adhesion). Therefore, we have protected MSCs from undergoing anoikis by adhering GO flakes to MSCs prior to their implantation to the injured myocardium. GO is capable of effectively adsorbing ECM proteins. ECM protein-adsorbed GO flakes protected MSCs from undergoing anoikis when MSCs-GO were exposed to ROS condition in vitro. In vivo, MSCs-GO showed enhanced engraftment in the reperfused myocardium after MI compared to MSCs alone. The enhanced engraftment of MSCs-GO resulted in enhanced paracrine factor secretion. Therefore, the adhesion of GO flakes to MSCs promoted cardiac tissue repair and cardiac function restoration.Abstract I Table of contents IV List of figures VIII List of tables XI Abbreviations XII Chapter 1. Research backgrounds and objectives 1 1.1. Myocardial infarction (MI) 2 1.2. MSCs for MI treatment 4 1.2.1. Differentiation of MSCs into cardiac lineage 7 1.2.2. Paracrine factor secretion of MSCs for cardiac repair 9 1.3. Nanobiomaterial-incorporated stem cell therapy for cardiac repair 11 1.3.1. Therapeutic molecule delivery system 13 1.3.2. Cell delivery vehicle 16 1.3.3. Nanotopographical cues of nanobiomaterials 19 1.3.4. Electrically conductive nanobiomaterials 22 1.3.5. Intrinsic chemistry of nanobiomaterials 25 1.4. Limitations of previous stem cell therapies for MI treatment 27 1.5. Graphene for tissue engineering applications 29 1.6. Research objectives of this dissertation 32 Chapter 2. Experimental procedures 33 2.1. Preparation of graphene and graphene derivatives 34 2.1.1. Graphene preparation 34 2.1.2. GO and RGO preparation 35 2.2. Characterization of graphene and graphene derivatives 36 2.3. Cell preparation 37 2.3.1. MSC culture on graphene-coated coverslips 37 2.3.2. MSC-RGO spheroid formation 38 2.3.3. GO adhesion to MSCs 39 2.4. In vitro assays 40 2.4.1. TEM analyses 40 2.4.2. Quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (qRT-PCR). 41 2.4.3. Analyses of cell viability. 43 2.4.4. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) 44 2.4.5. Western blot 45 2.4.6. Immunocytochemistry 46 2.4.7. Dye transfer 47 2.4.8. Analyses of GO adhesion on MSCs 48 2.4.9. Assays for cell adhesion and viability with or without GO under reactive oxygen species (ROS) condition 49 2.4.10. Detection of ROS 50 2.4.11. Adhesion of fibronectin (FN)- or vitronectin (VN)- adsorbed GO flakes to MSCs 51 2.4.12. Competition between free ECM proteins and ECM proteins adsorbed on GO for their interactions with MSCs 52 2.5. Experimental procedures in vivo 53 2.5.1. MI induction and MSC-RGO spheroid implantation 53 2.5.2. Induction of MI and MSC-GO implantation 54 2.5.3. Analyses of surviving MSCs 55 2.5.4. Histochemical and immunohistochemical staining. 56 2.5.5. Evaluation of cardiac function 58 2.6. Statistical analyses 59 Chapter 3. Graphene-regulated cardiomyogenic differentiation process of mesenchymal stem cells by enhancing the expression of extracellular matrix proteins and cell signialing molecules 60 3.1. Introduction 61 3.2. Results and discussion 63 3.2.1. Fabrication of graphene 63 3.2.2. Characterization of graphene 65 3.2.3. Biocompatibility of graphene 68 3.2.4. Cardiomyogenic lineage commitment of MSCs cultured on graphene 70 3.2.5. Enhanced ECM gene expression by graphene 73 3.2.6. Regulation of cell signaling pathway by graphene 76 Chapter 4. Graphene potentiates the myocardial repair efficacy of mesenchymal stem cells by stimulating the expression of angiogenic growth factors and gap junction protein 78 4.1. Introduction 79 4.2. Results and discussion 82 4.2.1. Characterization of RGO flakes 82 4.2.2. Formation of MSC-RGO hybrid spheroids 84 4.2.3. Enhanced cell-ECM interactions by RGO incorporation into MSC spheroids 89 4.2.4. Enhanced angiogenic growth factor expression in MSC-RGO spheroids 91 4.2.5. Enhanced Cx43 expression in MSC-RGO spheroids 95 4.2.6. Improved cardiac repair by MSC-RGO hybrid spheroid implantation 98 4.2.7. Improvement in cardiac function by MSC-RGO hybrid spheroid implantation 101 Chapter 5. Graphene oxide flakes as a cellular adhesive: prevention of reactive oxygen species-mediated death of implanted cells for cardiac repair 102 5.1. Introduction 103 5.2. Results and discussion 106 5.2.1. Characterization of GO flakes 106 5.2.2. GO adhesion on MSCs 108 5.2.3. Enhanced cell adhesion and survival under ROS condition in vitro 111 5.2.4. The mechanism of enhanced cell survival 114 5.2.5. Enhanced survival of MSCs implanted in a myocardial ischemia and reperfusion model 121 5.2.6. Improvement in myocardial repair by MSC-GO 124 Chapter 6. Conclusions 132 References 135 요약 (국문초록) 173Docto

변화하는 업무 패러다임을 중심으로

학위논문(석사) -- 서울대학교대학원 : 환경대학원 환경계획학과, 2022. 8. 정현주.The desire for self-actualization due to an unstable employment environment and low job satisfaction is emerging as a social problem with various anxiety among the young generation. At the same time, having a ‘lifetime job’ rather than a ‘lifetime job’ is considered a new goal, and many people are inducing them to start a business. Despite many aspirations for entrepreneurship, the economic instability of young solo workers is deepening along with urban spatial limitations that cannot support them. Against this background, they voluntarily gather in a space where they can share work space and practice coworking. They pursue an independent future more than anyone else, but they are trying to settle down by forming weak ties. In this study, we try to focus on the social meaning of co-working and alternative workspaces that young solo workers are experiencing while working together despite the anxiety they are experiencing. Although the number of startups among young people has increased rapidly in line with the changes of the times, only the positive aspects have been mainly focused on through the media. The purpose of this study is to provide implications that can be used in various policies by capturing changes in the way young solo workers work together and the creation of alternative workspaces so that the startups of young solo workers can contribute to creating other jobs. Through this study, it was possible to know the various social meanings of the formation of coworking and loose solidarity among young solo workers. Young solo workers formed loose solidarity without boundaries and practiced co-working. The members were always changing their world itself according to the present. Because it does not have an identity, it can embrace any user, and since it does not assume the same purpose, it can be said to be a community that can truly communicate. In addition, the diverse cultures and networking experiences created by operators, beyond simple space sharing, strengthen the position of uneasy solo workers and greatly contribute to business prosperity. However, the economic instability of early young solo workers makes it difficult to even pay the moving-in fee, which makes it difficult to move to a lower work environment or to decide to re-employ. Therefore, government policies and support to support stable start-up activities are urgently needed. In addition, depending on the size of the company, cracks form in the horizontal community, and it has the character of a temporary work space that naturally becomes a place to leave. In a community that was formed horizontally, as solo workers were hired, cracks began to appear, and they felt the limitations of the current space and thought about moving the work space. Lastly, the co-working space market, which has been in the public domain for just over 5 years, is facing a crisis due to the non-face-to-face communication environment that has grown along with the corona era. It is expected that the digital work environment in which even the physical work space has become unnecessary will result in the disappearance of a new type of work community or community. Reflecting the above social meaning, an alternative work space for young solo workers should be located in an area with a high proportion of young people in order to ensure a stable work environment, and should be provided at a low cost. In addition, for young solo workers who will rapidly change the size and nature of the organization, the method of moving in and occupying the work space should be flexible. Next, it is necessary to provide a work space without hierarchies that breaks down the discrimination or distinction that space gives, and to plan an indoor space where small group groups are possible. Lastly, it is important to induce young solo workers to have social and mental support through culture and social programs within the alternative work space that fosters networking.불안한 고용환경과 낮은 업무만족도로 인한 자아실현의 욕구는 청년세대에게 다양한 불안을 안기며 사회적 문제로 대두되고 있다. 동시에 ‘평생직장’보다 ‘평생직업’을 가지는 것이 새로운 목표로 여겨지며 많은 이들을 창업으로 유도하고 있다. 창업을 향한 여러 열망에도 불구하고 청년 솔로워커의 경제적 불안정성은 그들을 뒷받침하지 못하는 도시공간적 한계와 더불어 심화하고 있다. 이러한 배경에서 그들은 자발적으로 업무공간을 공유할 수 있는 공간에 모여 코워킹을 실천하고 있다. 그들은 누구보다 독립적인 미래를 추구하지만, 느슨한 연대(weak ties)를 형성하며 정착을 시도하고 있었다. 본 연구에서는 청년 솔로워커들이 겪고 있는 불안 속에서도 그들이 함께 일하며 형성하는 코워킹의 사회적 의미와 대안적 업무공간에 주목하려 한다. 시대의 변화에 발맞춰 청년세대들의 창업이 급격하게 증가하였지만, 언론을 통해 주로 긍정적인 측면만 주목받아왔다. 이에 청년 솔로워커의 창업이 또 다른 일자리 창출에 이바지할 수 있도록 업무 패러다임의 변화와 대안적 업무공간의 조성 방식을 포착하여 다양한 정책에 활용될 수 있는 시사점을 제공하는 것이 이 연구의 목적이다. 본 연구를 통해 청년 솔로워커들의 코워킹 형성과 느슨한 연대의 다양한 사회적 의미를 알 수 있었다. 청년 솔로워커들은 경계 없는 느슨한 연대를 형성하며 코워킹을 실천하고 있었다. 구성원들은 늘 현재에 맞춰 자신들의 세계 자체를 변화시키고 있었다. 정체성을 갖고 있지 않기에 어떤 사용자도 포용할 수 있고 동일한 목적을 상정하지 않았기에 진정한 소통이 가능한 공동체라 할 수 있을 것이다. 또한, 단순한 공간 공유를 떠나 운영자들이 만드는 다양한 문화와 네트워킹 경험은 불안한 솔로워커의 입지를 단단하게 하며 사업 번창에 큰 도움이 된다. 하지만 초기 청년 솔로워커의 경제적 불안정성은 입주비용의 지불마저 어렵게 하고, 이는 더 낮은 업무 환경으로의 이동 혹은 재취업을 결정하게 한다. 이에 안정적인 창업 활동을 뒷받침하기 위한 정부의 정책과 지원이 절실한 상황이다. 또한, 기업의 규모에 따라 수평적 공동체에 균열이 생기며 자연스럽게 떠나야 할 곳이 되는 임시 업무공간으로서의 성격을 가진다. 수평적으로 형성되었던 공동체는 솔로워커에게 고용이 발생하며 균열이 생기기 시작하고 현재 공간에서의 한계를 느끼며 업무공간의 이동을 고민하게 된다. 마지막으로 보편화한 지 5년 남짓에 불과한 코워킹 스페이스 시장은 코로나 시대와 함께 성장한 비대면 소통환경으로 인해 위기에 직면했다. 물리적 업무공간마저 불필요해진 디지털 업무환경은 새로운 형태의 업무공동체 혹은 공동체의 소멸을 낳을 것으로 예상한다. 위의 사회적 의미를 반영하여 청년 솔로워커를 위한 대안적 업무공간은 안정적인 업무환경을 보장하기 위해 청년세대의 거주비율이 높은 지역에 위치해야 하며 저렴한 비용으로 제공되어야 한다. 또한, 조직의 규모와 성질이 빠르게 변화할 청년 솔로워커를 위해 업무공간의 입주방식과 공간점유 방식이 유연해야 한다. 다음으로 공간이 주는 차별 혹은 구별을 타파한 위계 없는 업무공간을 제공하고 소규모 그룹핑이 가능한 실내공간을 계획해야 한다. 마지막으로 네트워킹을 조성하는 대안업무공간 내의 문화와 소셜프로그램을 통해 청년 솔로워커들이 사회적·정신적 지지대를 갖추도록 유도하는 것이 중요하다.제1장 서론 01 제1절 연구의 배경 01 제2절 연구의 질문 및 목적 02 제2장 이론적 고찰 04 제1절 변화하는 직장개념과 청년 솔로워커의 등장 04 1. 평생직장 개념의 변화 04 2. 4차 산업혁명과 직업의 미래 07 3. 청년 솔로워커의 출현 11 제2절 업무공간의 변화 양상 12 1. 조직유형에 따른 업무공간의 변천 12 2. 업무형태에 따른 업무공간의 혁신 16 1) 디지털 기술사회와 포스트 코로나 시대의 도래 16 2) 긱경제 시대의 디지털 노마드를 담는 코워킹 스페이스 17 제3절 대안적 업무공간의 등장 18 1. 대안적 업무공간의 목적 18 2. 대안적 업무공간의 다양한 양상 19 제4절 선행연구 검토 21 1. 관련 선행연구 검토 21 2. 연구의 차별성 22 제3장 연구의 대상 및 방법 24 제1절 연구의 대상 24 제2절 연구의 방법 27 제4장 업무공간 불안계급의 공간전략 30 제1절 청년 솔로워킹의 시작 30 제2절 기존 업무공간에서의 청년 솔로워커의 불안정성 34 1. 재택근무 36 2. 코피스족 39 3. 근린상가 및 오피스텔 40 제3절 대안업무공간으로의 재귀속 실천 41 1. 느슨한 연대(weak ties)를 향한 갈망 41 2. 재귀속의 양상 43 1) 정부주도 1인창조기업비즈니스센터 44 2) 위워크(wework) 46 3) 트라이그라운드(tryground) 47 제5장 코워킹 공동체로서의 대안업무공간 경험 49 제1절 대안업무공간의 시작 49 1. 청년 거주비율이 높은 지역과 대안업무공간의 입지 49 2. 청년 솔로워커를 우선하는 입주자 확보의 원칙 51 제2절 대안업무공간에서의 즐거움 53 1. 개선된 업무공간과 비용절감의 혜택 53 2. 공간이 만드는 느슨한 연대(weak ties) 56 3. 직주근접으로 구현된 솔로워킹의 출발점 59 4. 암묵지의 교류를 통한 다양한 코워킹의 형태 62 제3절 대안업무공간의 한계 65 1. 회사의 규모에 따라 벗어나야 할 임시적 업무공간 65 2. 새로운 업무방식과 맞지 않는 공간과의 타협 67 3. 입주자간 친화도에 따른 폐쇄성 및 관계의 종료 69 4. 청년 솔로워커들의 불안정성이 만드는 운영의 난관 71 제6장 청년 솔로워커의 코워킹 형성을 위한 대안적 업무공간 고찰 75 가. 청년 거주비율이 높은 지역 입지를 통한 직주근접 실현 75 나. 유연한 임대 및 공간점유 방식 75 다. 공간의 위계는 없되 소규모 그룹핑이 가능한 공간구획 76 라. 입주자들의 네트워킹을 조성하는 소셜 프로그램 77 제7장 결론 79 참고문헌 8

반려동물과 사람 유래 메티실린 내성 포도상구균: 항생제 내성과 유전적 특성 비교

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 수의학과(수의미생물학전공), 2013. 2. 김재홍.Community-associated methicillin-resistant staphylococci (CA-MRS) are considered an important problem in many countries. CA-MRS can disseminate not only within human communities, but also between companion animals and their owners as they share environments and living conditions. In this study, 592 staphylococci were isolated from February to April 2012 by taking swab samples from companion animals, owners, the general public who did not have contact with companion animals, and the veterinary hospital staff in Seoul, Korea. Prevalence of the isolates, their antimicrobial resistance patterns, and genetic relationships were subsequently investigated. The most prevalent species isolated from companion animals was Staphylococcus intermedius (55.5%). In addition, all 3 human groups—animal owners, the general public, and veterinary hospital staff—carried the common predominant species Staphylococcus epidermidis (51.7%, 43.3%, and 56.1%, respectively). All 4 groups showed the highest resistance rate against the antimicrobial agent ampicillin, and all were susceptible to amikacin. Isolates from companion animal showed higher resistance rates against chloramphenicol, enrofloxacin, and sulfamethoxazole than that shown by the human isolates (P < 0.05). Antimicrobial resistance patterns among the general public group were similar to that of the owner group. These results suggest that antimicrobial resistance patterns in humans may not be influenced by physical contact of humans with companion animals. In addition, the resistance patterns shown by the general public group were different from those shown by the veterinary hospital group. Among 15 antimicrobial agents, 8 (ampicillin, cefoxitin, ciprofloxacin, enrofloxacin, erythromycin, oxacillin, sulfamethoxazole, and tetracycline) were more resistible in the veterinary hospital staff groupindividuals in this group are more likely to be exposed to bacteria and antimicrobial agents (P < 0.05). Moreover, several isolates with a genetic similarity of 99%, as measured using Random amplification of polymorphic DNA-polymerase chain reaction (RAPD-PCR) were detected from companion animals and their owner in the same household, suggesting the possibility of contact transmission of bacteria between the 2 groups. However, results of comparisons of ccr gene sequences associated with methicillin resistance in staphylococci suggested that horizontal transfer of ccr genes between companion animals and owners did not occur. In conclusion, transmission of staphylococci may occur in households between companion animals and ownershowever, the possibility of horizontal transfer of methicillin resistance-associated genes between 2 groups can be ruled out in the present study.ABSTRACT i CONTENTS iv LIST OF FIGURES v LIST OF TABLES vi INTRODUCTION 1 MATERIALS AND METHODS 4 1. Bacterial isolates 4 2. Antimicrobial resistance test 5 3. Random amplification of polymorphic DNA- polymerase chain reaction (RAPD-PCR) analysis 6 4. PCR for mecA and ccr gene 7 5. Statistical analysis 7 RESULTS 8 1. Bacterial isolates 8 2. Antimicrobial resistance patterns 9 3. RAPD-PCR analysis 10 4. Detection of mecA gene and ccr gene complex sequence typing 11 DISCUSSION 14 REFERENCES 25 국문초록 29Maste

Development of educational material for parents of children with CHD

중환자(아동)간호 전공/석사[한글] 본 연구는 선천성 심질환아 부모에게 구체적이고 실증적인 정보를 제공하기 위한 교육 자료를 개발한 방법론적 연구이다.본 연구는 문헌 고찰, 선천성 심질환아 부모와 간호사를 대상으로 면담과 질문지를 통하여 교육이 필요한 영역을 확인하고 그에 따라 교육 내용을 개발하였다. 확인된 교육 내용은 "심장의 구조와 기능, 선천성 심질환과 관련된 내용, 심장 수술 전에 해야 하는 일에 대한 내용, 심장 수술 후 집중치료실에서의 생활에 대한 내용, 병실에서 해야 할 일에 대한 내용, 퇴원 후 일상생활로 복귀를 위한 방법"의 6가지 주제로 구성되었다.만성 질환아의 간호 중 가장 중요한 것은 부모 교육이라 했다. 선천성 심질환아 부모도 다양한 교육 요구가 있으며, 부모들의 교육 요구를 해결하기 위한 구체적이고 종합적인 교육이 이루어져야 할 것이다.본 연구에서 개발된 부모 교육을 각 병원에서 상황에 맞도록 수정하여 사용한다면 선천성 심질환아의 질병관리 및 건강관리가 보다 체계적으로 이루어질 것이다. [영문]The purpose of this methodological study is to develop educational materials for the parents of children with congenital heart disease (CHD). The areas in need of teaching were identified by review of literature, interviews with 5 mothers of children with CHD, and surveys with 5 nurses with over 3 years of experiences working at the children''s cardiac care unit. The 6 areas were identified: the structure and function of the heart; the basic information on CHD; pre-operative care; post-operative care at the intensive care unit; general care on the unit; and home care after discharge. The draft of the teaching material was reviewed by 1 pediatric cardiac surgen, 2 faculty members at the college of nursing, 1 nurse at the intensive care unit, and 2 nurses at the general pediatric cardiac unit for reliability. Also, a mother of child with CHD who has a high school diploma read the teaching material for the sentence and content difficulty. The revised final teaching material in this thesis can be used in many hospitals treating the children with CHD. However, some procedures and equipments maybe different from the ones described in this material, so, a minor revision maybe necessary. It is also suggested that the nurses working with the parents and children with CHD need to develop teaching programs utilizing various teaching methods.ope

Echinomycin 을 처리한 대장암 세포주에서 세포고사 유도 시 Bcl-2와 NF-κB 를 경유하는 신호전달 규명

Dept. of Biomedical Laboratory Science/박사[한글]본 연구는 DNA bis-intercalator의 세포고사기전을 규명하기 위한 연구의 일환으로 두 가지 핵심 연구 주제로 구성되었다. 첫 번째 주제로 대표 화합물인 echinomycin을 HT-29 대장암세포주에 처리하여 세포사를 유발하고 관련 신호전달과정 중 특히 Bcl-2 신호전달 경로를 규명하였으며, 두 번째 주제로 세포질에서 핵내의 세포고사 과정을 전달 증폭하는 NF-κB 신호전달 경로 및 그 의존성을 탐색하였다. 동시에 NF-κB 활성 변화에 따른 주 표적 케모카인인 IL-8 생성의 변화를 확인하였다. 첫 번째 실험에서 Bax 불활성 유전자를 세포 내로 이입 시 echinomycin에 의해 유도 되는 HT-29대장암세포주의 세포사에 변화가 없었다. 이 현상과 대조적으로 Bcl-2 과발현 유도 시caspase-3 활성이 억제되었고 세포사도 현저히 감소하였다. 이는 가설인 caspase-3를 경유하는 Bcl-2의 활성신호가 HT-29 세포사와 직접 관련된 신호전달기전임을 규명하였다. 두 번째 실험에서 NF-κB 신호전달 경로 및 그 의존성을 확인하기 위해 동위원소와 항체를 이용한 gel shift 분석실험에서 NF-κB 활성의 증가와 NF-κB의 이질복합체인 p50과 p65가 핵내로 이동함을 입증하였다. 이러한 NF-κB 활성의 변화는 세포질내의 IκB 활성 변화 및 인산화된 IκB 활성과 관련됨을 관찰하였다. Echinomycin에 의해 유도된 세포고사와 관련된 NF-κB활성 변화는 IL-8생성을 유발하였으며, 각각caspase-3 활성 및 NF-κB 활성과 관계가 있었다. 그러나, caspase-3 및 NF-κB 활성 억제 실험에서 이 두 경로는 연관 또는 상호의존적이 아님을 밝혔다. 이 두 가지 실험을 종합하면echinomycin 처리 시 HT-29에 유도되는 세포고사는 미토콘드리아와 관련된 Bcl-2 신호전달에 의해서 유도되며, 다양한 세포고사 신호들은 핵내 전사인사인 NF-κB 의존성 경로로 전달되며 이 과정에서 케모카인인 IL-8생성의 변화는 세포고사의 지표인자로 추정된다. 본 연구의 의의는 미지의 DNA bis-intercalator의 세포사멸기전의 가장 핵심주제에 접근하는 기반을 제공하며 이와 관련된 신호전달기전 이해 및 치료제 개발의 이론적 근거를 마련하였다. [영문]The present study was aimed to identify specific signal pathway via Bcl2 and NF-κB in echinomycin-mediated apoptosis of HT-29 colon cancer cells. In first experiment to verify Bcl-2 pathway, inactive form Bax-DNA failed to prevent echinomycin-induced apoptosis in HT-29 cells. In contrast, combined analyses of DNA fragmentation and flow cytometric analysis clearly verified that echinomycin-induced apoptosis was drastically attenuated by Bcl-2 overexpression, whereas a control vector rarely affected echinomycin-induced apoptosis. Given these, these first part of data verify that Bcl-2 regulates echinomycin-induced apoptosis in HT-29 cells. Next, in this study was investigated whether echinomycin-induced apoptosis would be NF-κB-dependent and if so, echinomycin would activate or inhibit NF-κB as well as resultant chemokine, IL-8 expression. As sequential findings of NF-κB-dependency in echinomycin-induced apoptosis, EMSA employing NF-κB specific probe and transfection with luciferase reporter plasmids containing, NF-κB binding elements showed that echinomycin-induced DNA-protein complex formation was inhibited and echinomycin induced the binding activity of NF-κB promoter. In line, EMSA in the presence of antibodies specific for p50 and p65 subunits indicated that echinomycin induces the translocation of p50-p65 heterodimeric subunits of NF-κB. Using Western blots, levels of IκB were detected at initial echinomycin treatment, and thereafter decreased, faintly seen after a 6 h treatment. In contrast, p-IκB levels were clearly detected throughout 6 to 24 h of echinomycin treatment, albeit initially fainted. Finally, in experiment to clarify the role of NF-κB on IL-8 expression in echinomycin-mediated apoptosis of HT-29 cells. ELISA plus RT-PCR clearly showed that IL-8 production is inducible and manipulative by echinomycin treatment. Using a specific inhibitor approach, it was clear that IL-8 production at echinomycin treatment in HT-29 cells occurs via both caspase-3 and NF-κB dependent signal pathway. To confirm whether two different pathways (NF-κB and caspase) would be coupled, only both NF-κB inhibitor (PDTC) and caspase-3 specific inhibitor (Z-DEVD-FMK) significantly attenuated echinomycin-initiated apoptosis of HT-29 cells, whereas pretreatment of HT-29 cells with NF-κB inhibitor (PDTC) rarely affected echinomycin-induced procaspase-3 activation. Collectively, second part of data indicate that echinomycin-induced apoptosis in HT-29 cells occurs via NF-κB activation independent of caspase-3 activation, finally modulating the resultant-linked key chemokine IL-8 expression. Synthesizing both data, these coupled data indicate that echinomycin-mediated apoptosis in HT-29 colon cancer cells occurs via Bcl-2 and NF-κB dependent pathway. Accordingly, the present study laid a ground for understanding the intracellular signal transduction mechanism by echinomycin in combination with apoptosis mechanism in HT-29 colon cancer cells and applying the mechanism.ope

붉은곰팡이의 RNA간섭 유전자 FgDICER-2 및 FgAGO-1의 발현을 억제하는 Fusarium graminearum virus 1의 유전자 동정

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 농업생명과학대학 농생명공학부, 2019. 2. 김국형.Fusarium graminearum virus 1 (FgV1)은 붉은 곰팡이를 감염하는 곰팡이바이러스로, 감염 시 붉은 곰팡이의 균사 생장 속도 감소 및 색소 증가, 포자형성 감소, 병원성 감소 등 표현형에 변화를 나타낸다. 선행실험에서 바이러스 감염에 대항하여 갖는 붉은 곰팡이의 RNA 간섭과 관련한 유전자인 FgDICER-2와 FgAGO-1 유전자의 전사량을 FgV1을 감염시킨 뒤 확인해 본 결과 붉은 곰팡이에서 분리한 다른 속에 속하는 곰팡이 바이러스인 FgV2와 FgV3를 감염시켰을 경우보다 전사량이 낮은 점과, hairpin RNA 구조로 RNA 간섭을 유도한 형질전환 붉은 곰팡이에 FgV1을 감염시킬 경우 증가 된 FgDICER-2와 FgAGO-1 유전자의 전사량이 감소하는 것을 확인한 바 있다. 따라서 선행 실험을 통해 FgV1은 붉은 곰팡이의 RNA간섭을 방어하는 기능을 하는 suppressor를 암호화하고 있다고 추측하였고 본 연구에서는 FgV1 감염이 붉은 곰팡이의 RNA간섭을 어떻게 방해하고, FgV1을 암호화하는 4개의 open reading frames(ORFs) 중 어떤 ORF가 suppressor로 기능하는지 밝히고자 한다. FgV1이 기주 곰팡이의 FgDICER-2와 FgAGO-1 유전자의 전사량을 어떻게 억제하는지를 알아보고자 FgAGO-1- or FgDICER-2-promoter/GFP-reporter expression assay를 실시하였다. 그 결과 FgV1을 감염시켰을 경우 FgAGO-1 또는 FgDICER-2 유전자의 프로모터가 발현하지 않아 바이러스를 감염시키지 않은 균주의 GFP 전사량과 비교했을 때 GFP의 전사량에는 변화가 없거나 감소하였지만 FgV2를 감염시켰을 경우 해당 유전자들의 프로모터가 발현하여 GFP의 전사량이 증가하였다. 이 결과를 통해 FgV1의 suppressor는 FgDICER-2와 FgAGO-1 유전자들의 promoter에 영향을 주어 전사 발현을 방해한다는 것을 확인하였다. 이후 FgV1의 suppressor를 구명하기 위해 FgV1을 인코딩하는 4개 ORF를 각각 발현하거나 hairpin RNA구조를 함께 발현하는 형질전환 붉은 곰팡이를 제작한 뒤 qRT-PCR을 통해 hairpin RNA 구조에 의해 유도된 FgDICER-2와 FgAGO-1 유전자의 전사량을 비교하였다. 그 결과 증가 되었던 FgDICER-2와 FgAGO-1 유전자의 전사량이 FgV1의 ORF2를 발현하는 형질전환 곰팡이에서 억제되는 것을 확인하였다. 따라서 본 연구를 통해 FgV1을 인코딩하는 ORF2가 suppressor로서 기능을 하며, ORF2는 붉은 곰팡이의 RNA간섭과 관련한 FgDICER-2와 FgAGO-1 유전자의 프로모터에 영향을 주어 전사를 방해하는 기작으로 RNA간섭에 의한 방어 기작을 억제하는 것을 확인하였다. Suppressor의 종류 및 기작이 많이 알려진 식물바이러스에 비해 곰팡이바이러스에서는 지금까지 2~3가지 종류의 suppressor가 알려져 있다. 본 연구 결과는 아직까지 구명되지 않은 붉은 곰팡이를 감염하는 바이러스인 FgV1의 suppressor를 구명하는데 중요한 기초자료가 될 것으로 사려된다.Fusarium graminearum virus 1 (FgV1) is associated with hypovirulence traits such as reduced mycelial growth, increase pigmentation, and reduced pathogenicity in Fusarium graminearum. The transcript level of FgDICER-2 and FgAGO-1 which are RNAi components in F. graminearum accumulate lower following FgV1 infection than following infection by FgV2 or FgV3. Moreover, those RNA levels induced by GFP-hairpin RNA construct in virus-free was significantly suppressed by FgV1 but not by FgV2 or FgV3 infections. These results suggest that FgV1 encodes viral suppressor(s) of RNA silencing (VSR) against antiviral defense response of the host. To identify how FgV1 suppresses expressions of FgDICER-2 and FgAGO-1 genes, FgAGO-1- or FgDICER-2-promoter/GFP-reporter expression assay was conducted. As a result, transcript level of GFP driven by FgAGO-1 or FgDICER-2 promoter was down-regulated by FgV1-infected mutant strain while showing up-regulated expressions by FgV2-infected mutant strain. This result suggests that FgV1-encoded suppressor(s) can directly block the induction of FgAGO-1 or FgDICER-2. To determine suppressor(s) encoded by FgV1, we generated the fungal mutants expressing each ORFs of FgV1 with or without a hairpin RNA construct. Induction of FgDICER-2 and FgAGO-1 transcript levels caused by a hairpin RNA construct was suppressed in ORF2 expressing mutant compare to those of the other mutants. FgV1 ORF-specific suppressor activity, however, was not observed in plant system by an agro-infiltration assay in Nicotiana benthamiana. Taken together, this research results indicate that the ORF2 of FgV1 has RNA silencing suppression ability by interfering induction of FgDICER-2 and FgAGO-1 with promoter-dependent manner to counteract RNAi defense response in F. graminearum.I. INTRODUCTION 1 II. MATERIALS AND METHODS 5 1. Fungal strains and culture conditions 5 2. Clones and agroinfiltration silencing suppression assay 5 3. Promoter/reporter expression assay 7 4. Construction of FgV1-encoded ORFs expressing clones 7 5. Generation of fungal mutants 8 6. DNA extraction and Southern blot hybridization 9 7. Total RNA preparation and cDNA synthesis for RT-PCR 9 8. Real-time RT-PCR analysis 10 9. Semiquantitative RT-PCR analysis 10 III. RESULTS 15 1. Differential levels of GFP expression of RNAi induced mutants 15 2. FgDICER-2 and FgAGO-1 expression in response to FgV1 is promoter-dependent 17 3. Absence of FgV1 ORF-specific suppressor activity in planta 20 4. RNA silencing suppression ability of ORF2 at the transcription level 23 5. Induction of FgDICER-2 and FgAGO-1 genes following FgV2 infection is suppressed by FgV1 ORF2 30 IV. DISCUSSION 32 V. LITERATURE CITED 36 VI. ABSTRACT IN KOREAN 40Maste

British Euroscepticism Manifested in Cameron's Bungling Referendum

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 사회과학대학 정치외교학부(외교학전공), 2018. 8. 이옥연 .After the result of Brexit vote in 2016, there has been an increase of literature trying to explain the factors that led to it. Out of many variables, British Euroscepticism has gained scholarly attention as the main cause that attributed to Britains troubling relationship with the European Union since its membership. Out of varying facets of Euroscepticism such as economic, political, and cultural that contributed to Britains opposition to supranational entity, it has most usefully been conceived as a systemic feature of British Politics. This indicates that political Euroscepticism has persisted in the parliamentary arena where the ministers had persistently displayed their discontent towards the EU in voting. As a result, the increasing political Euroscepticism threatened the intra-party cohesion from 2010 to 2015 as the Members of Parliament (MPs) rebelled more frequently against the government to have invited David Cameron to utilize party management tactics more aggressively. Thus, this thesis attempts to answer what led David Cameron to promise and hold the national referendum on EU and more specifically, what led him to move from the six tools of intra-party management to the final one of holding a referendum. In other words, Brexit referendum promise was a political gamble of then Prime Minister, David Cameron. Nonetheless, political Euroscepticism was not a new phenomenon that emerged only from Camerons term, but rather it was boiling inside the British political realm for decades. The Conservative Party under David Camerons leadership is observed from 2005 to 2010 because while a call for a national referendum occurred repeatedly throughout Britains marriage with the EU, it was ultimately a self-inflicted result of Cameron. He had misjudged and erred in deciding to go ahead with referendum in 2016 instead of 2017 because he was confident that he had successfully renegotiated the terms. Therefore, to understand the nature of high level political Euroscepticism found in the British parliament displayed through dissent during Camerons premiership, a further scrutiny of British Euroscepticism before Cameron is outlined. The structure of the thesis is organized into five chapters. After a brief introductory chapter, theoretical framework and research design on Euroscepticism, leadership behavior, and intra-party model are delineated. By looking at the economic, cultural, and political Euroscepticism, possible explanations of how each facet may have intensified into causing Brexit can be identified. Yet, Chapter 3 demonstrates that it was decisively the British Political Euroscepticism of the Conservative Party that had ultimately impacted Brexit Furthermore, the UK nature of political system and other leaders strategies on EU such as those of Thatcher and Major are compared to Camerons leadership tactics. Then, Chapter 4 introduces ways to measure dissent and the significance they have on affecting the intra-party nature and tactics Cameron utilized. Finally, it explains how Camerons tactics varied with increasing Euroscepticism that made the need for putting the EU issue on a national referendum more urgent. This studys finding is that intra-party cohesion influences leadership behavior even if it means taking radical measures such as moving the decision to the electorate level, which elites usually attempt to avoid. This is likely to be the outcome of political Euroscepticism within the Conservative Party that threatened the viability of the party. As David Cameron sought to solve the intra-party dissension by promising a national referendum, it soon proved not to be enough. To make matters worse, Cameron was juggling his EU partners, allies, and citizens in addition to his Eurosceptics. As he attempted to appease all sides, he further antagonized them all leaving him with no credibility as the leader. Consequently, his renegotiated EU membership terms did not appear convincing enough to make the UK exit the union.I. Introduction.. 1 II. Theoretical Framework and Research Design... 3 1. Roots of Euroscepticism 3 2. Intensification of Euroscepticism through Brexit.. 11 3. Leadership Behavior in Intra-Party Model.. 15 4. Research Implementation, 24 III. British Euroscepticism Before Cameron.. 28 1. The Political Nature of the UK System.. 30 2. Why the Conservative Party. 33 3. Evolution of Eurosceptics.. 38 4. Leaders Differing Strategies on EU 42 IV. Camerons Poisoned Chalice 49 1. Measures of Dissent. 49 2. Cameron as the Leader of the Opposition.. 51 3. Cameron as the Leader of the Coalition 57 4. Promising Referendum... 67 5. Road to One Fateful Day 74 V. Conclusion 84 Bibliography 87 국문초록 96Maste

국내분리 Yersinia enterocolitica의 특성 및 분류학적 방법 비교 연구

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :수의학과 수의미생물학전공(수의전염병학),2000.Maste