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    세표 표면 개질을 통한 효과적인 줄기세포 치료제 개발

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    학위논문 (박사) -- 서울대학교 대학원 : 공과대학 화학생물공학부, 2020. 8. 황석연.Stem cell therapy has been emerged as a promising approach to treat various degenerative diseases and impaired organs. Transplantation and direct injection of stem cell have provided a viable solution for congenital defects treatment. However, decline in survival rate and therapeutic effect of administered cells due to physical stress and allogeneic host immune rejection substantially limits the broad applications of cell-based therapy. Consequently, a suitable strategy with general accessibility and versatility is required to determine the fate of stem cell prior to transplantation and improve therapeutic outcomes. According to this demand, cell surface modification with natural or synthetic biomaterials is extensively studied as a stem cell therapy technique. Cell functions can be modulated by modifying various bioactive functional groups introduced onto the cell surface through covalent conjugation, hydrophobic interaction and electrostatic interaction. Engraftment of exogenous materials on the cell surface guarantees more stable attachment to cells when they are transplanted into the complex biological environment. In addition, covering the cell surface with polymer chains to cover cell surface antigen provides camouflage effect against T cells, resulting in inhibition of adaptive immune response. Thus, cell surface modification strategies in this thesis will be useful to understand the critical cues for ideal stem cell therapy in the aspects of tissue engineering and translational medicine. First, I present a facile and universal cell surface modification method that involves mild reduction of disulfide bonds in cell membrane protein to thiol groups. The surface reduced cells are successfully coated with biomacromolecules by maleimide-thiol chemical conjugation for an assortment of applications, including cell visualization, rapid cell assembly, layer-by-layering of cell layer, interaction with surrounding matrix, and localized cell-based drug delivery. No adverse effect on cellular morphology, viability, proliferation, and metabolism is observed. Furthermore, the activities of injected cells in mice can be enhanced via conjugation of polyethylene glycol and immunosuppressant-loaded nanoparticles on the cell surface to overcome acute immune rejection. Second, I analyzed the biological effect of mesenchymal stem cells (MSC) in cell surface protein reducing microenvironment. Reduction of surface protein receptors resulted in significant increase of focal adhesion without any adverse effect in cell viability. Eventually, elevation of focal adhesion enhanced early stage of osteogenic differentiation of MSC. Moreover, down regulation of TGF-β signaling pathway was detected as its fundamental cell membrane protein, endoglin, got reduced. Taken together, cell surface protein reducing microenvironment synergistically induced stem cell adhesion and internal cell signaling to up-regulate early osteogenic differentiation. Finally, I constructed a multilayer hydrogel nanofilm formation strategy which protects cells from high shear stress and reduce immune response by interfering cell-cell interaction. A tough and elastic hydrogel nanofilm was fabricated by modifying two opposite charged polysaccharides to have monophenol functional groups that crosslink each other to form nano-thin hydrogel on the cell surface via tyrosinase mediated reactions. Hydrogel nanofilm encapsulation conducted on β-cell spheroids was applied in the field of islet transplantation. Thin, uniform, and compact film layers on β-cell spheroids achieved cytoprotective effect against physical stress and immune protective effect in vitro. Injection into type 1 diabetes mouse model showed blood glucose level regulation significantly effective compare to non-coated groups. Overall, we expect our novel enzymatic crosslinking-based hydrogel nanofilm coating method will provide a new platform for clinical applications of β-cell-based therapy.줄기 세포 치료제는 다양한 퇴행성 질환 및 손상된 기관을 치료하기위한 유망한 접근법으로 주목을 받고 있다. 줄기 세포의 이식 및 직접 주사는 선천성 결함 치료를 위한 실용적인 해결책을 또한 제공하고 있다. 그러나, 주사 시 또는 투여 후 외부 스트레스와 동종 숙주 면역 거부 반응에 따른 투여된 세포의 생존율 및 치료 효과의 감소는 세포 치료제의 광범위한 활용을 제한되고 있다. 결과적으로, 이식 전에 줄기 세포 치료제의 효능을 결정하고 치료 결과를 향상시키기 위해서는 일반적인 접근성 및 다목적 성을 갖는 다양한 전략이 필요하다. 이러한 요구에 따라, 천연 또는 합성 생체 재료를 이용한 세포 표면 개질 방법은 줄기 세포 치료 기술로서 광범위하게 연구되고 있다. 세포 기능은 공유결합, 소수성 상호 작용 및 정전 기적 상호 작용을 통해 세포 표면에 도입된 다양한 활성 작용기를 활용함으로써 조절될 수 있다. 세포 표면에 외인성 물질을 결합시키면 세포가 보다 복잡한 생물학적 환경에 이식될 때 일반세포 보다 안정적으로 생체 내에서 활성화될 수 있다. 추가적으로, 생체 고분자를 활용해서 세포 표면을 개질 할 경우, 세포 표면의 항원을 고분자로 덮게 됨으로써 면역 세포가 이식된 세포를 제대로 인식하지 못해 적응면역계를 억제하는 결과를 가져올 수 있다. 따라서, 이 논문에서 소개될 세포 표면 개질 전략은 조직 공학 및 병역 의학 측면에서 이상적인 줄기 세포 치료제 개발을 위한 중요한 초석이 될 수 있다. 논문의 제1장에서는 세포막 단백질의 이황화 결합을 환원시켜 티올기로 전환하여 이를 활용하는 손쉽고 보편적인 세포 표면 개질 방법을 제시한다. 표면이 개질 된 세포는 말레이미드-티올 화학 접합에 의해 효과적으로 생체고분자들을 세포 표면에 코팅 할 수 있다. 이렇게 코팅된 세포들은 세포 시각화, 신속한 세포 조립, 세포 층 형성, 주변 물질들과 상호 작용 및 국소화 된 세포 기반 약물 전달에 활용된다. 세포 형태, 생존력, 증식 및 대사에 대한 부작용은 관찰되지 않았다. 더 나아가, 폴리에틸렌 글라이콜 생체고분자와 면역억제제가 주입된 나노 입자들로 코팅된 세포들을 마우스에 주입하였을 시에 급성 면역 반응을 견뎌내어 향상된 세포 활동을 관찰할 수 있다. 논문의 제2장에서는 세포 표면 단백질을 환원시키는 미세환경이 중간엽 줄기세포에 미치는 생물학적 효과를 분석하였다. 세포 표면 단백질 수용체들의 환원은 결과적으로 세포 생존력에는 악영향을 미치지 않으면서 초점 접착력의 현저한 증가를 보였다. 결국, 이러한 초점 부착의 상승은 중간엽 줄기세포의 골 형성 분화의 초기 단계를 향상시켰다. 더하여, 세포 표면의 TGF-β 신호 전달 경로의 근본적인 수용체 중 하나인 엔도글린이 환원됨으로써 신호 전달 경로의 하향 조절이 검출되었다. 이 두 효과의 상호 작용을 통해, 줄기 세포의 초점 부착은 상승시키는 반면, 세포 내 신호 전달을 감소하게 유도함으로 초기 골 형성 분화를 상향 조절했다. 마지막으로 논문의 제3장에서는 높은 전단 응력으로부터 세포를 보호하고 세포-세포 상호 작용을 방해하여 면역 반응을 줄일 수 있는 다층 하이드로 겔 나노 필름 형성 방법을 고안했다. 페놀 작용기를 갖도록 2 개의 반대 대전 된 다당류를 개질하고 이를 타이로신 효소를 사용하여 가교 시킴으로 강인하고 탄력 있는 하이드로 겔 나노 필름을 제작하였다. 이 하이드로 겔 나노 필름으로 코팅된 β-세포 스페로이드는 이자 섬 이식에 활용되었다. 코팅된 β-세포 스페로이드 표편의 얇지만 균일하고 치밀한 필름층은 물리적 스트레스와 생체내 면역에 대한 세포 보호 효과를 가졌다. 이렇게 코팅된 스페로이드들을 제1형 당뇨 쥐 모델에 주입하였을 때에 효과적으로 혈당을 조절하는 것을 확인할 수 있다. 종합적으로 세포 표면의 단백질의 이황화결합을 개질 함으로서 다양한 세포 표면에 다양한 생체 물질들을 결합시킬 수 있다는 것을 토대로 이 개질 방법이 줄기세포에 어떠한 영향을 끼치는지를 알아보았다. 그러나, 이황화결합을 환원시키는 방법은 몇 가지 단점들이 있었고, 이를 보완하기 위해 개발된 효소 가교 기반 하이드로 겔 나노 필름 코팅 방법 은 제1형 당뇨병 치료에 우수한 성능을 보였으므로 앞으로의 임상 응용 프로그램에 새로운 플랫폼을 제공할 것으로 기대하며 세포 표면 개질을 통한 효과적인 줄기세포 치료제의 가능성을 확인할 수 있다.CHAPTER ONE: INTRODUCTION 1 1.1 Overview 1 1.2 Organization of the thesis 2 CHAPTER TWO: THE SCIENTIFIC BACKGROUND 4 2.1 Stem cell therapy in tissue engineering and regenerative medicine 4 2.1.1 Introduction 4 2.1.2 Factors influencing the efficacy of stem cell therapy 7 2.2 Cell surface modification 8 2.2.1 Introduction 8 2.2.2 Types of cell surface modification in cells 12 2.2.3 Current cell surface modification systems and their limitations 18 2.2.4 Application of cell surface modification in vivo 24 CHAPTER THREE: CELL SURFACE MODIFICATION VIA REDOX REACTION OF DISULFIDE BONDS 28 3.1 Introduction 28 3.2 Materials and methods 31 3.2.1 Cell culture and preparation 31 3.2.2 Tris(2-carboxyethyl)phosphine (TCEP) treatment 31 3.2.3 Maleimide Alexa Fluor 488 (MFluor) Coating 32 3.2.4 Cell differentiation and assay 33 3.2.5 Alkaline phosphatase (ALP) and Alizarin Red S (ARS) staining 34 3.2.6 Immunofluorescence analysis 34 3.2.7 Synthesis of maleimide chondroitin sulfate (MCS) and FITC-conjugated MCS (FMCS) 35 3.2.8 Surface modification with MCS 35 3.2.9 Formation of cell clusters 36 3.2.10 Layer-by-layer (LBL) cell stacking 36 3.2.11 Quartz crystal microbalance (QCM) 37 3.2.12 Maleimide PEG (MPEG) coating 37 3.2.13 Secondary coating 38 3.2.14 Real-time PCR 38 3.2.15 Preperation of fluorescent mesoporous silica nanoparticles 39 3.2.16 Attachment of the MSN to mammalian cells 39 3.2.17 Electron microscopic imaging of coated cells 40 3.2.18 Animals and Cells 41 3.2.19 Intravital imaging 41 3.2.20 In vivo imaging system 42 3.2.21 Implanting cells with drug delivery vehicle and protective polymer 42 3.3 Results and Discussion 44 3.3.1 Exposure of thiol group on cellular surface 44 3.3.2 Biomacromolecules attachment on the cell surface 51 3.4 Summary 61 CHAPTER FOUR: BIOLOGICAL EFFECT OF REDUCED MICROENVIRONMENT TO STEM CELL 62 4.1 Introduction 62 4.2 Materials and methods 65 4.2.1 Cell culture 65 4.2.2 Cytotoxicity of TCEP reductant treatment on T-MSCs 65 4.2.3 Immunofluorescence analysis 66 4.2.4 Scratch assay for migration of reduced Cells 66 4.2.5 Western blot analysis 67 4.2.6 Osteogenic differentiation and chemical staining of T-MSCs 67 4.2.7 Real-time PCR analysis 68 4.2.8 Calcium assay 69 4.2.9 Scaffold fabrication and cell attachment 69 4.2.10 In vivo cranial-defect model 70 4.2.11 μ-CT 70 4.2.12 Histological assessment and immunostaining analysis 70 4.2.13 Statistical Analysis 71 4.3 Results and Discussion 72 4.3.1 Biological Effect of MSC in Cell Surface Reducing Microenvironment 72 4.3.2 Focal Adhesion Enhancement in Cell Surface Reducing Microenvironment 77 4.3.3 Enhanced Osteogenic Commitment of MSCs in Reducing Microenvironment 81 4.3.4 Identification of Internal Cell Signaling Pathway for Inducing Early Osteogenic Commitment 85 4.3.5 Application in Mouse Cranial-Defect Model with MSC in Cell Surface Reducing Microenvironment 92 4.4 Summary 97 CHAPTER FIVE: HYDROGEL NANOFILM ENCAPSULATION CROSSLINKED BY ENZYMATIC REACTION 98 5.1 Introduction 98 5.2 Materials and methods 102 5.2.1 Cell culture 102 5.2.2 Synthesis of GC-T, HA-T, GC-T-RITC and HA-T-FA 102 5.2.3 Expression and purification of recombinant tyrosinase from Streptomyces avermitlis (SA-Ty) 103 5.2.4 Measurement of the enzymatic activity of SA-Ty 104 5.2.5 Attenuated total reflection-fourier transform infrared spectroscopy (ATR-FTIR) 104 5.2.6 Hydrogel formation and swelling ratio 104 5.2.7 Diffusion test of L6 hydrogel nanofilm 105 5.2.8 Cell coating with polysaccharides and SA-Ty 105 5.2.9 Quartz crystal microbalance 106 5.2.10 LbL encapsulation of single cells 106 5.2.11 Characterization of the encapsulated cell surfaces 107 5.2.12 LbL encapsulation of pancreatic β-cell spheroids 108 5.2.13 Functional analysis of β-cell spheroids 108 5.2.14 Real-time PCR 109 5.2.15 Physical stress test 110 5.2.16 Prevention of Cell-Cell interaction between L6 encapsuled cell/spheroid and NK cell 110 5.2.17 Flow cytometry for NK-92 cytotoxicity 111 5.2.18 Isolation of primary splenocytes 111 5.2.19 Induction of type-1 diabetes mellitus in mice 112 5.2.20 β-cell transplantation into diabetic mice 112 5.2.21 Intraperitoneal glucose tolerance test 113 5.2.22 Histological evaluation of kidney capsule sections 113 5.2.23 Statistical analysis 114 5.3 Results and Discussion 115 5.3.1 Characterization of GC-T, HA-T and SA-Ty. 115 5.3.2 Optimization of hydrogel nanofilm formation. 123 5.3.3 LbL single cell encapsulation with hydrogel nanofilm. 127 5.3.4 Hydrogel nanofilm encapsulation of MIN6 β-cell spheroids. 129 5.3.5 Hydrogel nanofilm as a physical barrier against external environment. 134 5.3.6 In vivo evaluation of glycemic control in diabetic mice. 142 5.4 Summary 147 CHAPTER SIX: CONCLUDING REMARKS 148 6.1 Summary 148 6.2 References 151 6.3 Bibliography 168 국문 초록 170 감사의 글 173Docto

    열전 소재 및 소자의 열전달 특성 측정법

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    학위논문(석사) -- 서울대학교대학원 : 공과대학 재료공학부, 2024. 2. 장혜진.To enhance the research on thermoelectric materials and improve the performance of thermoelectric devices, accurate evaluation of thermal transport characteristics is essential. Conventional methods for assessing thermal transport properties have limitations in evaluating nano-scale materials or may suffer from measurement inaccuracies due to contact thermal resistance. In contrast, utilizing the thermoreflectance of metals and semiconductors allows for non-contact optical methods to directly measure the surface temperature of the material, with the added benefit of achieving micro-level spatial resolution. In this thesis, the time-domain thermoreflectance method based on thermoreflectance principles was employed to measure the thermal conductivity of thermoelectric thin films. Additionally, thermoreflectance microscopy was utilized to measure the temperature distribution during the operation of the thermoelectric leg. This introduces a novel approach that holds significance not only for the evaluation of thermal transport characteristics in thermoelectric materials and devices but also for a wide range of functional materials and components in the future.열전 소재의 연구와 열전 소자의 성능 향상을 위해서는 높은 정확도의 열전달 특성 평가가 요구된다. 기존 열전달 특성 평가 방법은 나노 스케일의 소재 평가가 불가능하거나, 접촉 열저항으로 인한 측정 오류로 평가의 정확도에 한계가 있다. 반면 금속 및 반도체 소재의 열반사 특성을 이용하면 비접촉식의 광학적 방법으로 해당 소재의 표면 온도를 직접 측정할 수 있고, 또한 마이크로 수준의 공간 분해능도 확보할 수 있다. 본 학위논문에서는 열반사 원리를 기반으로 하는 시간영역 열반사법을 이용하여 열전 박막 소재의 열전도도를 측정하였다. 또한 열반사 현미경을 이용하여 열전 레그의 동작 중 온도 분포를 측정하였다. 이를 통해 향후 열전 소재 및 소자뿐만 아니라 다양한 기능성 소재 및 소자들의 열 전달 특성을 평가할 수 있는 새로운 기법을 제시하는 데 의의가 있다.Chapter 1. Introduction 1 1.1. Motivation and Outline 1 1.2. Reference 5 Chapter 2. Experimental Methods 6 2.1 Time-domain Thermoreflectance 6 2.2. Crank-Nicolson Method 8 2.3. Thermoreflectance Microscopy 9 2.4. Reference 14 Chapter 3. Thermal Conductivity of Sulfur-doped Copper Iodide Thin Films 19 3.1. Experimental Purpose 19 3.2. Sample Preparation 20 3.3. Thermal Conductivity with Carrier Concentration 23 3.4. Thermal Conductivity with Thickness 26 3.5. Reference 29 Chapter 4. Temperature Modeling of a p-type Bi2Te3 Alloy Thermoelectric Leg 37 4.1. Modeling the Thermoelectric Leg with Crank-Nicolson Method 37 4.2. Optimization of Temperature Measurement Condition to Find Interfacial Electrical Resistance and Interfacial Thermal Conductance 42 4.3. Reference 48 Chapter 5. Temperature Evolution of a p-type Bi2Te3 Alloy Based Thermoelectric Leg 55 5.1. Experimental Setup 55 5.2. Temperature Evolution Inside the Thermoelectric Leg 59 5.3. Reference 63 Chapter 6. Conclusion 69 Abstract in Korean 70석

    Tissue response to the endoskeletal type stent-graft for saccular abdominal aortic aneurysm in a canine model

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    학위논문(박사)--서울대학교 대학원 :의학과 방사선과학전공,2005.Docto

    The Effects of Administrative Accountability on the Outcomes of Electric Vehicle Projects: Focusing on Neighborhood Electric Vehicle

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    학위논문 (석사)-- 서울대학교 행정대학원 : 행정학과(행정학전공), 2012. 8. 구민교.정부는 지난 20년 동안 G7 차세대자동차 사업, 미래형자동차 사업, 그린카 사업을 통해 친환경자동차에 대한 지원을 하였다. 이와 같은 지원에도 불구하고 전기자동차 분야는 하이브리드자동차, 수소연료전지자동차 분야에 비해 성과가 저조하였고, 본 연구는 그 이유에 대해 분석하고자 하였다. 각 자동차별 성과는 특허 건수와 보급량을 변수로 사용하여 측정하였고, 저속 전기자동차를 중심으로 전기자동차와 관련된 사례들을 보조적으로 조사하였다. 이 과정에서 정부와 사업자단체 등의 관계자와 면접조사도 실시하였다. 그리고 이론적 검토를 바탕으로 행정의 책임성을 유형화하고, 행정의 책임성의 유형 중 전문가적 책임성, 정치적 책임성, 법적 책임성을 설명변수로 하여 저속 전기자동차를 비롯한 전기자동차 사업의 성과에 대해 분석하였다. 전문가적 책임성이 강조되던 G7 차세대자동차 사업에서는 전기자동차 분야의 특허출원 건수의 증가율이 하이브리드자동차와 수소연료전지자동차의 증가율에 비해 낮은 것으로 나타났다. 이 시기에는 전문가적 책임성을 너무 강조하여 민간의 전문성에 지나치게 의존하는 경향을 보였고, 전기자동차 분야에서 정부와 민간의 목표가 달라 이와 같은 결과가 나왔다. 정치적 책임성이 강조되던 미래형자동차 사업에서 전기자동차 관련 특허출원 건수는 감소하는 추세를 보여주었다. G7 차세대자동차 사업이 종료된 2002년부터 미래형자동차 사업이 시작된 2004년까지는 전기자동차 관련 특허출원 건수가 증가하였다. 그러나 미래형자동차 사업이 시작되자 감소하는 모습을 보여주어 미래형자동차 사업이 전기자동차 관련 기술 개발에 부정적인 영향을 주었다고 할 수 있다. 또한 양산형 전기자동차의 개발은 하이브리드자동차와 수소연료전지자동차에 비해 저조했고, 보급도 거의 이루어지지 않았다. 이와 같은 결과는 미래형자동차 사업에서 정치적 책임성이 지나치게 강조되어 생산자 본위의 시장이 형성되었고, 전기자동차가 사업의 대상에서 제외되면서 발생한 책임성의 공백이 이 분야의 실질적인 반응성을 약화시켰다. 법적 책임성이 강조되던 그린카 사업에서는 하이브리드자동차와 수소연료전지자동차의 핵심기술 개발이 어느 정도 성숙단계에 접어들어 전기자동차의 기술 개발에 상대적으로 집중하였다. 그렇지만 하이브리드자동차와 수소연료전지자동차에 비해 전기자동차 분야에서는 여전히 한국의 독자적인 기술이 없었고, 기술경쟁력도 저조하다고 평가되었다. 그리고 판매 및 보급도 하이브리드자동차가 원활하게 이루어지는 반면, 전기자동차는 사업의 목표 달성에도 굉장히 어려움을 겪고 있었다. 특히 그린카 사업에서는 저속 전기자동차 업체들의 문제가 부각되었다. 이들은 성능 개발에 노력하기보다는 무리한 사업 확장을 시도하였고, 결국 친환경자동차 시장에서 퇴출되는 결과를 가져왔다. 이와 같은 결과는 법적 책임성이 지나치게 강조되면서 법에 규정되지 않은 위험을 피하려는 소극적인 행정이 원인이었다. 본 연구는 기존의 연구들이 친환경자동차 전반의 성과를 분석한 것과는 달리 하이브리드자동차, 수소연료전지자동차, 전기자동차를 각각 나누어 성과를 비교 분석하였고, 기존의 연구에서 사용하지 않은 행정의 책임성을 설명변수로 이와 같은 성과의 차이를 분석하고자 하였다는데 의의가 있다.The Korean government has supported the eco-friendly car business for 20 years by implementing three projects, and they are G7 Next Generation Car Project, Future Car Project and Green Car Project. However, the outcomes of the electric vehicle business has been low when compared with those of hybrid electric vehicle or fuel cell electric vehicle sectors. The purpose of this study is to analyze why there were differences in the outcomes among eco-friendly car businesses. This study investigated the patent status of hybrid electric vehicle , fuel cell electric vehicle and electric vehicle sectors as well as the mass production of them in order to measure the outcome of each vehicle. Moreover, this paper analyzed the outcome of the electric vehicle sector including neighborhood electric vehicle for the analysis, professional accountability, political accountability and legal accountability were set as the explanatory variables based on theoretical reviews of administrative accountability types. During the period G7 Next Generation Car Project, emphasizing on professional accountability was conducted, the patent increase rate in the electric vehicle sector was lower than those of hybrid and fuel cell electric vehicle sectors. In this period, the Korean government was overly dependent on the private professionalism as the professional accountability was excessively emphasized. In addition, there were the difference of goals to the electric vehicle between the government and the private industry. Those were the reasons why the different outcomes among eco-friendly car sectors had occurred in this project. During the period Future Car Project, emphasizing on political accountability was conducted, the number of patents related with electric vehicle tended to decrease. There is a possibility that the Future Car Project had a negative influence on the technical development of the electric vehicle, when analyzing the fact that the number of patents related with electric vehicle began to decrease as the Future Car Project initiated which were on the increase from 2002 to 2004, which is the period in between the end of the G7 Next Generation Car Project(2002) and the beginning of the Future Car Project(2004). Also, the progress in development of the electric vehicle for mass production was slower than that of hybrid electric vehicle or fuel cell electric vehicle. Excessively emphasized political accountability in the Future Car Project created a producer-centered market. Moreover, the exclusion of the electric vehicle from project target made a loophole of accountability and weakened practical responsiveness of the electric vehicle project. During the period Green Car Project, emphasizing on legal accountability was conducted, government has focusing on technical development of electric vehicle sector as the key technologies of hybrid electric vehicle and fuel cell electric vehicle entered mature steps. However, the Korean electric vehicle manufacturers did not have their own technologies whereas the other eco-friendly car manufacturers had. Moreover, technology competitiveness of electric vehicle sector was evaluated to be low. Also, electric vehicle sector had a hard time to achieve the original goal of sales and supply while hybrid electric vehicle went smoothly. Especially, the problems of neighborhood electric vehicle manufacturers were magnified. They tried to extend their businesses over their capacities and they were forced to retreat from the market eventually. This result was because of defensive administration, avoiding to take the risk of implementing tasks which were not defined by law or regulation. This study has significance on analyzing hybrid electric vehicle, fuel cell electric vehicle and electric vehicle comparatively while other research studies analyzed the outcomes of eco-friendly car sectors as a whole, and analyzing the reasons of the different outcome of each vehicle by using different administrative accountability types as explanatory variables.제 1 장 서론 제 1 절 연구의 목적 제 2 절 연구의 대상과 범위 제 3 절 연구의 방법 제 2 장 친환경자동차의 개념 및 개요 제 1 절 개념 및 유형별 특징 1. 친환경자동차의 개념 2. 친환경자동차의 종류 및 유형별 특징 1) 하이브리드차(Hybrid Electric Vehicle: HEV) 2) 수소연료전지자동차(Fuel Cell Electric Vehicle: FCEV) 3) 전기자동차(Electric Vehicle: EV) 제 2 절 한국의 친환경자동차산업의 개요 1. 하이브리드자동차 2. 수소연료전지자동차 3. 전기자동차 제 3 장 선행연구와 이론적 논의 및 연구설계 제 1 절 친환경자동차에 대한 선행연구 1. 기술개발 및 보급동향 2. 정부의 정책에 대한 연구 3. 법·제도 측면의 연구 4. 소결 제 2 절 행정의 책임성에 대한 논의 1. 책임성의 의의 2. 책임성의 유형 1) 책임성의 주체: 누가 책임을 져야 하는가? 2) 책임의 객체: 누구에게 책임을 지는가? 3) 책임의 대상: 무엇에 대해 책임을 지는가? 4) 책임의 방식: 책임을 어떻게 지는가? 5) 책임성의 유형화 및 이론별 책임성 논의 제 3 절 연구 설계 1. 연구문제 및 가설 2. 연구의 분석틀 및 구성 제 4 장 G7 차세대자동차 사업(1992-2002)과 미래형자동차 사업(2004-2008) 제 1 절 전기자동차 분야의 성과 분석 1. 기술수준 및 개발 연혁 1) 기술수준 비교 분석 2) 개발 연혁 및 성능 비교 분석 2. 판매 및 보급 추진결과 비교 분석 제 2 절 성과에 대한 요인 분석 1. 전문가적 책임성 분석: G7 차세대자동차 사업 2. 정치적 책임성 분석: 미래형자동차 사업 제 5 장 그린카 사업(2008-현재) 제 1 절 전기자동차 분야의 성과 분석 1. 기술수준 및 개발 연혁 1) 기술수준 비교 분석 2) 개발 연혁 및 성능 비교 분석 2. 판매 및 보급 추진결과 비교 분석 제 2 절 성과에 대한 요인 분석: 법적 책임성 중심 제 6 장 결론 제 1 절 분석 결과의 요약 제 2 절 연구의 의의 및 시사점과 한계 [참고문헌] AbstractMaste

    내장동맥입구에 걸쳐 설치한 대동맥 스텐트의 장기적 조직반응에 대한 실험적 연구

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    학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :의학과,2001.Maste

    Artificial Intelligence Approach for Detecting Pathological Voice

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