血红蛋白E综合征的临床实验与遗传的研究

血红蛋白E(简称HbE)综合征是一组常见的遗传性Hb病,自1954年Minnich等描述本病以来,世界各地陆续有所报道。本病主要分布于东南亚等地。有些地区发病率高达30％,国内也有不少报道。统计中山医学院第二附属医院儿科血液病实验室1964～1980年送检Hb电泳标本1,865份,发现HbE综合征32例,现将其中21例有关临床实验与遗传的资料作一分析讨论

广东中山县石歧镇血红蛋白病的调查

血红蛋白(简称Hb)病与6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺陷(以下简称G6PD缺陷)在我国均多发于两广、川地区。其中重型β海洋性贫血(Cooley’s贫血)、血红蛋白H病、Hb-E综合征及异常Hb、G6PD缺陷等已有不少报道。国内已报告广东地区Hb-H病,α海洋性贫血基因发生率。为了进一步了解广东地区Hb病发生率及Hb病与G6PD缺陷之间的遗传关系,并探索此二种遗传性疾病的遗传规律,作者等在广东中山县石歧镇对当地部份小儿、成人中进行了调查。现将结果报道如下

再生障碍性贫血儿童TCR Vβ亚家族T细胞克隆性增殖及其与HLA—DRB1＊15的关系

【目的】探讨再生障碍性贫血（再障）儿童TCR Vβ24个亚家族T细胞克隆性及其与HLA—DRB1＊15的关系。【方法】再障儿童17例（SAA14例，MAA3例），采用RT—PCR和基因扫描分析外周血或骨髓TCR Vβ24个亚家族基因的表达和克隆性，SSP—PCR检测HLA—DR。【结果】再障儿童外周血T细胞仅表达4—22个Vβ亚家族，而正常儿童外周血T细胞几乎表达所有Vβ亚家族。12例（包括初诊SAA4例，CR4例，复发1例和MAA3例）再障儿童存在不同程度T细胞克隆性增殖，但个体间差异较大，正常外周血和骨髓均为多克隆性T细胞。5例HLA—DRB1＊15（＋）患儿中4例（80％）有寡克隆T细胞，而12例HLA—DRB1＊15（-）患儿中仅3例（25％）见寡克隆T细胞，两组比较差异具有显著意义（P〈0．05）。伴寡克隆T细胞的6例S从儿童经免疫抑制治疗后达CR；不伴寡克隆T细胞的5例SAA儿童接受免疫抑制治疗，其中CRI例，PR2例、无效1例，死亡1例。【结论】大多数再障儿童存在T细胞克隆性增殖，寡克隆T细胞多见于SAA，尤其是HLA—DRB1＊15（＋）的SAA儿童。TCR VβT细胞克隆的检测对进一步了解再障免疫功能状态、预测免疫抑制治疗效果具有一定的参考价值

同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型的建立及其对造血干细胞植入的影响

【目的】建立同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型，研究该技术对造血干细胞（HSC）归巢、植入率、移植后免疫造血重建、移植物抗宿主病（GVHD）等方面的影响。【方法】用C57BL／6胎鼠及新生鼠外周血（FNPB）作供体，以单侧胫骨骨髓腔内注射（IBMI）和尾静脉注射（IV）两种途径移植经亚致死量60Coγ射线辐照预处理的BALB／c鼠。200只受鼠随机分为4组：骨髓腔内注射组（IBM组）；尾静脉注射组（IV组）；放疗对照组；正常对照组，每组50只。用组织冰冻切片和流式细胞术动态了解CFSE标记FNPB在受体内的分布变化，并观察移植后受鼠存活状况、植入水平、造血与免疫功能恢复及GVHD情况。【结果】①荧光际记FNPB体内动力学显示直至输注后72h，供体FNPB经IBMI后主要积聚于注射侧骨髓腔内，肺部滞留很少。而IV组及IBM组非注射侧骨髓中的FNPB细胞数显著少于IBM组注射侧，IV组非造血组织器官如肺部有明显供体细胞滞留。②同种异基因小鼠CBT模型中IBM组造血、免疫功能的恢复明显快于IV组，无GVHD，移植后90d存活率达到90％，注射侧胫骨植入水平（29.53±6.64）％，较IV组有显著改善。③IBM输注侧骨髓中供体HSCs植入水平及造血重建速度明显优于非注射侧骨髓。【结论】成功建立同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型，并证实IBMI途径对促进HSCs植入，造血免疫功能重建，提高UCBT效果方面优于IV途径，多部位IBMI可能更有利于HSC归巢骨髓

胎肝造血期胎肝间充质干细胞的分离、培养及生物学特性

【目的】分离、培养人胎肝造血期胎肝间充质干细胞(MSC) , 研究其生长特性及表面标记的表达。 【方法】取孕16～20 周人胚胎肝脏, 分离培养胎肝MSC, 传代培养成系并检测其增殖能力, 应用流式细胞术、免 疫荧光方法检测其造血相关表面标记和细胞蛋白表达。【结果】人胎肝MSC 呈成纤维样形态, 指数生长期倍增 时间约为16h, 细胞增殖26.5 倍。传代15 次仍有94.18%的细胞处于G0/G1 期。流式细胞仪检测结果显示人胎 肝MSC 表达CD29、CD44、CD105、CD106 和CD166, 不表达CD31、CD34、CD45, 不表达与GVHD 相关的HLADR 、CD80、CD86、CD40、CD40L。免疫荧光检测结果显示胎肝MSC 表达造血微环境细胞外基质蛋白 Fibronectin、α-SMA 及上皮细胞标记蛋白AFP 和E-cadherin。【结论】人胎肝MSC 具有胚胎造血组织和发育中的 肝脏特异的相关分子表达, 免疫原性弱, 可以作为研究造血、胎肝发育机制的模式细胞

小剂量K562 细胞NOD/SCID 小鼠动物模型的建立

【目的】探索建立小剂量( 1×106) 人急性红白血病K562 细胞株的NOD/SCID 小鼠动物模型及通过 流式细胞仪对NOD/SCID 小鼠的肿瘤负荷情况进行评价的可行性。【方法】实验组NOD/SCID 小鼠分别经尾静 脉接种K562 细胞1×106、5×106, 比较不同剂量接种实验组小鼠的生存时间、组织病理改变及通过流式细胞术 对NOD/SCID 小鼠体内的肿瘤标记进行检测。【结果】1×106 及5×106 K562 细胞接种的NOD/SCID 小鼠的生存 时间分别为( 30.3±4.3) d 和(22.2±3.7)d; 其外周血、骨髓及肝、肺组织匀浆中均可发现不同比例的肿瘤细胞; 通 过流式细胞术检测5×106 K562 细胞接种组NOD/SCID 小鼠外周血、肝匀浆中人CD13 表达水平显著高于1× 106 接种组, 而肺匀浆的CD13 表达水平两组无显著性差异。【结论】小剂量( 1×106) K562 细胞NOD/SCID 小 鼠动物模型的建立是完全可行的,这有助于降低实验成本

肾病综合征鼠骨代谢变化特点及芪归合剂对其的作用

【目的】 探讨肾病综合征（NS）鼠骨代谢的变化特点及芪归合剂对其的作用。【方法】 制备大鼠阿霉素NS模型，设模型组、激素治疗组、芪归治疗组、激素芪归治疗组及正常对照组，每组8只，用药时间为3周。测量各组尿蛋白、血生化指标和右股骨长度；用HologicQDR-2000＋DEXA行股骨全段骨密度（BMD）测定；以放射免疫法测定血清骨钙素（OC）、Ⅰ型前胶原氨基端伸展肽（PINP）、Ⅰ型胶原羧基端关联肽原（ICTP）水平。【结果】 模型组股骨长度（3．35±0．09）cm，低于正常组（3．53±0．11）cm（P〈0．05）；芪归治疗组（3．46±0．09）cm，高于模型组（P〈0．05）；激素芪归组（3．28±0．07）cm，高于激素治疗组（3．16±0．11）cm（P〈0．01）；激素治疗组低于模型组（P〈0．05）。模型组股骨全段BMD（0．1357±0．0137）g/cm^2，低于正常组（0．1599±0．0101）g／cm^2（P〈0．01）；激素治疗组（0．1208±0．0123）g／cm^2，低于模型组（P〈0．05）。模型组血OC（16．31±3．87）μg，L和PINP（2．02±0．51）μg/L水平，低于正常组，分别（31．49±4．16）μg/L、（3．58±0．46）μg/L（P〈0．01）；芪归治疗组血OC（25．90±8．26）μg/L和PINP（3．42±1．07）μg/L水平，高于模型组（分别P〈0．05和P〈0．01）；激素芪归组血OC（12．01±1．97）μg/L和PINP（2．47±0．88）μg/L水平，高于激素治疗组，分别（6．12±3．26）μg/L、（1．63±0．74）μg/L（P〈0．05）；激素治疗组低于模型组（P〈0．05）。激素治疗组的ICTP（10．15±3．77）μg/L高于模型组（8．71±3．29）μg/L（P〈0．05）。【结论】NS鼠存在骨代谢的异常，激素治疗使骨代谢异常进一步加剧，而芪归合剂治疗对其有改善作用

SUMS99方案治疗儿童急性淋巴细胞白血病的长期疗效

【目的】回顾和探讨56例儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）分型治疗的疗效和预后因素。【方法】回顾分析1999～2002年收治的56例儿童ALL,按中山医科大学99（SUMS99）方案的分型标准,标危型ALL（standard risk-ALL,SR-ALL）33例,中危型（middle risk-ALL,IR-ALL）12例,高危型ALL（high risk-ALL,HR-ALL）11例;所有患者按SUMS99方案进行治疗。【结果】56例患者4周内完全缓解（complete remission,CR）率SR-ALL组和IR-ALL为100%,而HR-ALL组为72.73%（8/11）,6周才CR者3例。SR-ALL组早期缓解时间为（17.1±6.4）d,IR-ALL组早期缓解时间为（24.5±5.6）d,HR-ALL组早期缓解时间为（29.9±6.3）d。本组共死亡13例,死亡率为23.0%,其中死于骨髓复发者9例,死于感染者4例。本组目前无病存活共43例,其中SR-ALL组为90.9%（30/33）,IR-ALL组为83.3%（10/12）,HR-AL组为27.3%（3/11）.SR- ALL组平均生存时间为75．2个月，IR—ALL组平均生存时间为56．8个月，HR-ALL组平均生存时间为25．3个月。2例HR一ALL患者进行组织相容性抗原全相合外周血干细胞移植，目前均无病存活。【结论】分型治疗儿童急性淋巴细胞白血病是达到高生存率和改善生存质量的重要手段，但本方案仍然未能解决HR-ALL的疗效，选择合适供者进行异基因造血干细胞移植可能是今后改善HR-ALL预后的方向

Xaf1与TNFα协同诱导细胞凋亡机制的初步探索

[目的]利用Xaf1诱导细胞株,检测Xaf1与一些细胞凋亡激动剂协同诱导肿瘤细胞凋亡的能力,初步探索Xaf1诱导凋亡的机制.[方法]Xaf1与细胞凋亡激动剂协同诱导的细胞凋亡由流式细胞检测DNA含量来表示,免疫荧光显微镜检测法与细胞核浆分离法检测Xaf1诱导细胞中Xaf1与XIAP的亚细胞分布,免疫沉淀法检测Xaf1与XIAP的关联性.[结果]流式细胞术DNA含量检测发现Xaf1与TNFα显著协同诱导细胞凋亡,凋亡峰值为49%,而Xaf1与阿霉素无协同作用,凋亡峰值为27%,免疫荧光显微镜检测及细胞核浆分离法结果显示Xaf1位于细胞核内,而XIAP却位于细胞质.[结论]Xaf1与TNFα显著协同诱导细胞凋亡,其协同机制可能不是解除XIAP对胱冬肽酶活性的抑制

建立doxycycline 诱导表达Xaf1 的肿瘤细胞株

【目的】为探索XIAP 相关因子1( Xaf1) 调节肿瘤细胞凋亡的机制, 利用基因开关调节系统( Teton) , 拟建立由doxycycline 调控表达的Xaf1 诱导细胞株。【方法】将pTREHA-Xaf1 和pWZL-Hyg 质粒用基因 转染技术转入稳定表达rtTA 的Saos-2 细胞中。经过hygromycin 的抗性筛选, 挑出并扩增表达Xaf1 的细胞株。 在8 例实验组中加入doxycycline, 和不加doxycycline 的8 例对照组比较, 重复3 次实验用免疫印迹法和免疫 荧光显微镜检测doxycycline 对Xaf1 表达的调控。Xaf1 诱导的细胞凋亡由流式细胞检测DNA 含量来表示。【结 果】在30 个抗hygromycin 的细胞株中, 免疫印迹法筛选出5 个明显由doxycycline 调控诱导表达Xaf1 的细胞 株, 免疫荧光显微镜检测显示doxycycline 诱导Xaf1 表达于细胞核内。流式细胞检测Xaf1 于8h 开始诱导Saos 细胞凋亡, 凋亡率最高约20%, 而且不影响细胞周期。【结论】Xaf1-Saos 诱导细胞株是研究Xaf1 调节肿瘤细 胞凋亡机制的良好细胞模型; Xaf1 是一种核蛋白, 能独立诱导肿瘤细胞凋亡