我国淡水鱼类柱形病病原菌柱状黄杆菌的遗传多样性

为认识我国淡水鱼类烂鳃病的病原以及柱形病在我国的发生情况,实验从发生烂鳃病的病鱼中分离细菌性病原,经过生理生化特性分析以及是否在含托普霉素的Shieh培养基中生长并形成黄色假根状菌落,是否产生降解明胶和硫酸软骨素的酶类等特性的鉴定,并结合16SrDNA序列分析,证实柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)是所分离的烂鳃病的病原。同时,研究也证实20世纪曾经命名为烂鳃(Gill-rot)病病原的鱼害黏球菌(Myxococcus piscicola Lu,Nie & Ko,1975)是

寄生鳜鱼肠道的强壮粗体虫的形态、病理及免疫原性的初步研究

目的强壮粗体虫的成虫寄生于鳜鱼的肠道,武汉市附近的湖泊调查表明其对鳜鱼的感染率接近100％,感染强度也很高。强壮粗体虫的大量寄生必将给鳜鱼养殖造成极大危害。鉴于此,本实验对强壮粗体虫的形态学特性、致病机理及免疫原性作初步的研究,以期对此种寄生虫后继研究提供基础。材料和方法实验鱼30尾,取自梁子湖。暂养2天以排空肠道,挑取蒸馏水麻醉后

强壮粗体虫寄生引起的鳜肠道病理

强壮粗体虫是鳜肠道最常见寄生蠕虫。通过光镜及电镜对自然感染强壮粗体虫的鳜肠道进行了组织病理观察。强壮粗体虫的寄生引起鳜肠上皮细胞脱落、肠固有膜层结缔组织增生及白细胞向病灶处浸润 ,并可观察到嗜酸性粒细胞附着在与肠上皮及固有膜接触的虫体的体壁及吻部。在虫体吻部与肠固有膜层接触处依次观察到纤维细胞、成纤维细胞、嗜酸性粒细胞等 ,其中嗜酸性粒细胞又可分为未成熟嗜酸性粒细胞、成熟的嗜酸性粒细胞及正在脱颗粒的嗜酸性粒细胞。另外在肠壁的固有膜层观察到包裹虫体的结缔组织纤维囊 ,囊壁由三层结构构成 ,同时在鳜肠壁相同

柱状黄杆菌胶原蛋白酶的克隆与表达

利用PCR方法从柱状黄杆菌（Flavobacterium columnare）G4株中克隆了1个胶原蛋白酶基因（GenBank登录号EF501979）。同源性比对发现该基因与柱状黄杆菌的另外1种胶原酶基因（GenBank登录号EAZ95511.1）最为相近,有84%的一致性和93%的相似性。该属的另外2种细菌,约氏黄杆菌（Flavobacterium johnsoniae）和嗜冷黄杆菌（F.psychrophilum）都有与该胶原酶基因相似的基因,其相似性分别为92%和83%。该基因经KpnI和SalI酶切后连接到表达载体pET-32a上,转入大肠杆菌BL21（DE3）plysS内进行表达,经SDS-PAGE电泳后显示重组融合蛋白在44kD处有明显表达带,与预期分子量大小一致,且主要以不溶的包涵体形式存在,变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白,将其免疫家兔,获得兔抗柱状黄杆菌胶原蛋白酶抗体,Western blotting表明该胶原酶在柱状黄杆菌的胞内和胞外都存在。这些结果为进一步研究这种胶原蛋白酶的功能及柱状黄杆菌的致病机理奠定了基础

柱状黄杆菌胶原蛋白酶的克隆与表达

利用PCR方法从柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)G4株中克隆了1个胶原蛋白酶基因(GenBank登录号EF501979)。同源性比对发现该基因与柱状黄杆菌的另外1种胶原酶基因(GenBank登录号EAZ95511.1)最为相近,有84%的一致性和93%的相似性。该属的另外2种细菌,约氏黄杆菌(Flavobacterium johnsoniae)和嗜冷黄杆菌(F.psychrophilum)都有与该胶原酶基因相似的基因,其相似性分别为92%和83%。该基因经KpnI和SalI

柱状黄杆菌胶原蛋白酶的克隆与表达

利用PCR方法从柱状黄杆菌（Flavobacterium columnare）G4株中克隆了1个胶原蛋白酶基因（GenBank登录号EF501979）。同源性比对发现该基因与柱状黄杆菌的另外1种胶原酶基因（GenBank登录号EAZ95511.1）最为相近,有84%的一致性和93%的相似性。该属的另外2种细菌,约氏黄杆菌（Flavobacterium johnsoniae）和嗜冷黄杆菌（F.psychrophilum）都有与该胶原酶基因相似的基因,其相似性分别为92%和83%。该基因经KpnI和SalI酶切后连接到表达载体pET-32a上,转入大肠杆菌BL21（DE3）plysS内进行表达,经SDS-PAGE电泳后显示重组融合蛋白在44kD处有明显表达带,与预期分子量大小一致,且主要以不溶的包涵体形式存在,变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白,将其免疫家兔,获得兔抗柱状黄杆菌胶原蛋白酶抗体,Western blotting表明该胶原酶在柱状黄杆菌的胞内和胞外都存在。这些结果为进一步研究这种胶原蛋白酶的功能及柱状黄杆菌的致病机理奠定了基础

柱状黄杆菌胞外多糖对草鱼的免疫促进作用

将柱状黄杆菌胞外多糖(EPS)溶液经腹腔注射免疫草鱼,以注射灭菌生理盐水作对照。免疫一周后,分别提取受免鱼与对照鱼肝脏、脾脏、体肾和头肾4种组织中的总RNA,并通过RT-PCR半定量的方法检测不同组织中C-反应蛋白(CRP)、白介素1(IL-1)、主要组织相容性复合体I(MHC I)、免疫球蛋白M(IgM)、干扰素(IFN)等5种免疫基因的表达情况。结果显示,CRP在受免鱼肝脏中的表达显著上升;MHC I在受免鱼脾脏、体肾中的表达显著下降;IgM在受免鱼4种组织中的表达皆显著上升;IL-1在受免鱼4种组