鱼类电脉冲基因转移方法的建立

以电脉冲方法成功地将外源基因导入泥鳅和鲫鱼的受精卵，并获得了整合外源基因的转基因鱼。在最适宜条件下，该方法的基因转移率达62.5%，受体鱼每细胞携带的外源基因可超过100拷贝。用自制的电脉冲系统，研究了鱼类受精卵对电脉冲的耐受能力，对于幅度为250伏特的电脉冲，泥鳅受精卵在放电时间小于6.6毫秒的范围内可以正常发育，鲫鱼受精卵在放电时间小于2.4毫秒时胚胎发育不受影响。泥鳅受精卵转移pMhGH重组DNA后在不同发育时期制备胚胎DNA，进行斑点杂交，发现外源基因异入受精卵后在原肠胚前进行扩增，随后开始缓慢降解。用不同脉冲条件对泥鳅和鲫鱼受精卵进行基因转移，检测1月龄的泥鳅和3月龄的鲫鱼，结果表明外源基因转移率及其拷贝数与电脉冲宽度和幅度，电荷量等均呈正相关关系。用环状或线性的外源基因对鲫鱼受精卵进行转移，二者的转移率没有显著差异，随着接受处理的受精卵受精后时间的延后，外源基因导入率呈下降趋势。对转基因鲫鱼的鳍条组织DNA进行限制性酶切消化及Southern吸印转移杂交，证明导入的线型基因已整合到受体鱼的染色体组中，其中部分外源基因受到修饰，导入的不状基因可能整合于染色体组中，也可能以游离的大分子多聚体形式存在

外源基因在鲫鱼胚胎发育过程中的表达

<正> 近五年来,通过显微注射技术,已将各种克隆基因片段导入了不同种的鱼类受精卵中,目的是探讨培育能稳定遗传外源基因的鱼类新品系的可行性,为鱼类定向育种开辟新途径。已发表的研究报告证明,外源基因导入鱼类受精卵后均可与受体基因组整合,部分实验显示外源基因可以表达,且其表达产物具有生物活性。目前有关检测外源基因表达的实验大多采用放射免疫方法或观察其整体生物学效应。唯有朱作言等利用分子杂交技术在受体胚胎发育的肌肉

鲤鱼和草鱼基因文库的构建及其生长激素基因和肌动蛋白基因的筛选

<正>用显微注射方法,把由小鼠重金属鳌合蛋白(M'r)基因启动子驱动的人生长激素(hGH)基因导人鲤鱼等的受精卵内,由此发育而成的一部分鱼的基因组内携带有MThGH基因,这些鱼称之为"转基因鱼&quot

异育银鲫及其人工杂合种外源遗传物质的检测分析

采用 DNA 杂交的方法,对异育银鲫及其人工杂合种进行了外源 DNA 的检测分析,发现两个雌核发育系的异育银鲫及其人工杂合种的 DNA 与红鲤 DNA 片段间的分子杂交均有阳性斑点出现,这表明,在异育银鲫及其人工杂合种产生过程中,父本(红鲤)的 DNA 片段的确可以随机地掺入到母本细胞的 DNA 中,从而产生了异精效应,使其子代生长加快,并出现父本性状

泥鳅受精卵的电脉冲基因转移

<正> 鱼类具有怀卵量大、受精卵易得,容易进行体外操作、人工孵化及培育等优点,使得它成为转基因动物研究的极好材料。1985年朱作言等首次发表了转基因鱼研究的初步结果,随后又建立了较为完整的转基因鱼模型,并获得了可遗传的转基因鱼及其子一代。这一研究现已扩展到了十多个国家和地区的几十个实验室。已有的研究成果表明,鱼类基因转移与传统育种技术相结合,将有可能带来育种史上的革命,并建立定向、快速的鱼类育种新技术。已发表的转基因鱼研究,都是采用显微注射的方法直接将外源基因导入鱼类受精

泥鳅受精卵的电脉冲基因转移

<正> 鱼类具有怀卵量大、受精卵易得,容易进行体外操作、人工孵化及培育等优点,使得它成为转基因动物研究的极好材料。1985年朱作言等首次发表了转基因鱼研究的初步结果,随后又建立了较为完整的转基因鱼模型,并获得了可遗传的转基因鱼及其子一代。这一研究现已扩展到了十多个国家和地区的几十个实验室。已有的研究成果表明,鱼类基因转移与传统育种技术相结合,将有可能带来育种史上的革命,并建立定向、快速的鱼类育种新技术。已发表的转基因鱼研究,都是采用显微注射的方法直接将外源基因导入鱼类受精

人生长激素和转移的人生长激素基因对去垂体鱼的生长代偿效应

通过显微注射技术,将小鼠重金属螯合蛋白(MT-1)基因启动顺序与人生长激素基因顺序的重组体pMThGH注入鲤鱼(Cyprinus carpio)的受精卵内,由此发育的转基因鱼及其后代F1和F2均显示出快速生长效应。去垂体后,转基因鲤鱼F2持续生长,而非转基因鲤鱼和鲫鱼(Carassius auratus)的生长停止。给去垂体的鲫鱼腹腔注射生物合成的人生长激素(hGH),可恢复其生长。实验结果表明,转基因鱼体内表达和体外生物合成的hGH均能代偿鲤鱼和鲫鱼的内源生长激素并刺激去垂体鱼的生长