斜带石斑鱼MyD88基因的克隆与表达

本研究运用RACE-PCR技术获得斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)基因,并对该基因进行生物信息学和表达模式分析。研究结果表明1795bp的cDNA全长序列,包括ORF 870 bp、5'UTR 243 bp和3'UTR 682 bp,3'UTR存在1个多聚腺苷酸加尾信号(AATAAA)和两个mRNA不稳定基序(ATTTA)。SMART软件预测该蛋白N端和C端分别存在死亡结构域和TIR结构域(Toll/IL-1 receptor homology domain,TIR);与其它脊椎动物MyD88的序列同一性达57.1%～78.7%;用NJ法构建的系统进化树中,斜带石斑鱼MyD88和其它已报导的鱼类MyD88聚为一枝。qPCR检测结果显示MyD88基因mRNA主要表达于肝脏、脾脏、头肾和胸腺等组织。本研究为进一步探讨MyD88在斜带石斑鱼TLR信号传导中的作用奠定基础

斜带石斑鱼MyD88基因的原核表达及蛋白纯化

Toll样受体（Toll-like receptor, TLR）是一类重要的模式识别受体,其胞外结构域可识别特定的病原相关分子模式（Pathogen-associated molecular patterns, PAMPs）,胞内的TIR （Toll-like/IL-1 receptor）结构域则参与启动胞内信号转导,诱导细胞产生活性氧中间体（Reactive oxygen intermediate）、活性氮中间体（Reactive nitrogen intermedi-ate）和促炎症因子,在感染早期发挥重要作用1。在哺乳动物中,髓样分化因子88（Myeloid differentiation factor 88, MyD88）是TLR信号通路的关键接头分子,其C端TIR域与TLR的TIR相互结合后,通过募集IL-1受体相关激酶（Interleukin-1 receptor-associated kinase, IRAK）IRAK4、IRAK1和IRAK2,激活NF-κB和MAPK,进而诱导IL-1、TNF和IFN等细胞因子表达2-4