雷帕霉素对血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

【目的】观察雷帕霉素（rapamycin）对体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞（SMC）增殖的作用。【方法】组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞，取对数生长期细胞（第6-10代）用作实验，MTr法检测不同浓度雷帕霉素对平滑肌细胞增殖的效果，并用RT-PCR法检测其对平滑肌细胞增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）mRNA表达情况的影响。【结果】①MTT法检测显示雷帕霉素呈剂量依赖性抑制体外培养的大鼠平滑肌细胞增殖，各组吸光值似）分别为：对照组0．902±0．106；0．1ng／mL组0．873±0．079；1ng／mL组0．797±0．046；10ng／mL组0．692±0．061；100ng／mL组0．624±0．075。方差分析差异有显著性。F=28．85，P〈0．001；两两比较1ng／mL以上浓度组与对照组间差异均有显著性，不同浓度间差异显著。0．1ng/mL组与对照组相比差异无显著性。②RT-PCR显示雷帕霉素以浓度依赖模式抑制大鼠平滑肌细胞PCNA-mRNA合成。各组校正后光密度值分别为：对照组219．35±7．20；0．1ng／mL组212．39±6．56；1ng/mL组113．15±10．09；10ng／mL组97．17±12．25；100ng／mL组84．38±8．66。方差分析F=195．49，P〈0．001。两两比较与MTT检测相同。【结论】雷帕霉素呈剂量依赖性显著抑制大鼠平滑肌细胞的增殖，1ng／mL时即可明显起效。雷帕霉素有望成为治疗内支架术后再狭窄的理想药物之一

抗原致敏IL-12基因修饰的树突状细胞诱导抗肾癌免疫的体外研究

【目的】探讨肾癌细胞抗原致敏白介素-12（IL-12）基因修饰的树突状细胞（DC）体外诱导、激活细胞毒性T淋巴细胞（CTL）免疫杀伤肾癌细胞的效能及相关免疫机制。【方法】采用重组逆转录病毒介导IL-12基因修饰人外周血单个核细胞（PBMC）来源的DC；超声细胞破碎法提取肾癌细胞粗提抗原（Ag）致敏经IL-12转染的DC；ELISA法检测各组DCs和各组CTLs上清中IL-12、IFN-γ因子的分泌水平；流式细胞仪（FACS）分析各组DCs表面CD83、CD86、HLA-DR的表达；MTT法检测DC刺激同源T淋巴细胞增殖的能力及CTL免疫杀伤肾癌细胞的效能；统计学分析比较各组间的差异。【结果】经IL-12基因修饰和抗原致敏后的DC高表达CD83和CD86分子分别为（65．9％±3．1％，92．8％±3．4％），分泌高水平IL-12（279．6±1．7）pg／mL及IFN-γ（892±31）pg／mL，刺激同源T淋巴细胞增殖明显，诱导激活的CTL上清中IFN-γ水平（1146±31）pg/mL显著高于对照组；CTL对肾癌细胞有强大的杀伤作用，显著高于各对照组。【结论】经IL-12基因修饰和抗原致敏后的DC能有效地诱导CTL特异性抗肿瘤免疫应答。其机制可能与IL-12基因修饰和抗原致敏活化了DC抗原提呈第二信号，促进了DC高分泌IL-12因子，激活了T淋巴细胞致使CTL分泌IFN-γ的能力增强密切相关