胚胎干细胞体外诱导分化为 CD34+造血前体细胞

【目的】胚胎干细胞( embryonic stem cell, ES)体外诱导分化,制备CD34+造血前体细胞。【方法】胚胎干细胞在含甲基纤维素培 养液中分化形成胚胎体( embryoid body, EB) ,然后加入造血刺激因子诱导产生 CD34+造血前体细胞,间接免疫荧光及流式细胞仪检测分化结 果。【结果】胚胎干细胞分化第9～ 15 天均有 CD34+细胞,第13 天比例最高,可达 17. 36%。【结论】胚胎干细胞分化成胚胎体,在造血刺激因 子的存在下,可大量获得 CD34+造血前体细胞

小鼠端粒酶蛋白亚单位重组腺病毒载体的构建及鉴定

【目的】构建小鼠端粒酶蛋白亚单位（mouse telomerase reverse transcriptase，mTERT）基因重组腺病毒载体，为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础。【方法】从肝癌细胞中提取总RNA。采用RT-PER技术扩增mTERT的基因编码区序列，将序列定向克隆至真核表达载体pAC，将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共同转染293细胞，经同源重组产生重组腺病毒载体Ad-mTERT，纯化后的重组腺病毒载体Ad-mTERT在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化，测定病毒滴度。【结果】PCR及酶切证实：mTERTDNA正确克隆到穿梭质粒pAC中，带mTERTDNA的表达盒成功重组到腺病毒载体基因组E1A缺失区，并在293细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺病毒Ad-mTERT。【结论】成功构建了小鼠TERT基因重组腺病毒载体，为研究其用于肿瘤的基因治疗奠定基础

系统性红斑狼疮患者骨髓基质细胞因子表达及对免疫功能的影响

【目的】研究系统性红斑狼疮（SLE）患者骨髓基质细胞因子表达情况,及其对外周血淋巴细胞增殖反应的影响,探讨SLE的发病机制。【方法】采用ELISA方法观察SLE患者骨髓基质细胞培养液IL-6、MIP-1、IFN-γ、TGF-β等细胞因子的表达,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）,观察基质细胞培养上清液对外周血淋巴细胞增殖反应的影响。【结果】SLE患者骨髓基质细胞培养液IL-6、MIP-1、IFN-γ浓度明显增高,TGF-β则降低,3种细胞因子与SLEDAI评分相关;正常人及SLE患者骨髓基质细胞上清液均对刀豆蛋白A诱导的外周血淋巴细胞增殖有明显的抑制作用,而SLE患者的上清液抑制作用明显低于正常人;在分别加入抗MIP-1、抗IFN-γ单抗后,骨髓基质细胞上清液对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用明显增强,而加入抗TGF-β单抗后,抑制作用明显减弱。【结论】SLE患者骨髓基质细胞对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用较弱,与其部分细胞因子异常表达有关,骨髓基质细胞可能与SLE的发病、发展有一定关系