沙眼衣原体荧光PCR 试剂盒的研制及临床考核

【目的】用荧光PCR(fluorescence PCR, F-PCR)方法研制沙眼衣原体(chlamydia Trachomatis, CT)DNA 检测试剂 盒, 通过临床验证考核其性能, 并与其它方法比较。【方法】设计合成了CT F-PCR 诊断试剂盒。检测了516 份临床分泌物标 本, 以McCoy 细胞培养法和Abbott 公司的LCx 试剂盒为对照。【结果】阳性率21.1 %, 灵敏性98.2 %, 特异性99.8%。【结 论】F-PCR 显著优于培养法, 与LCx 相当。F-PCR 试剂盒可以检测CT 的真实感染情况, 对于临床诊断和疗效考察有一定的 指导意义

低密度基因芯片技术检测人乳头瘤病毒基因型

[目的]利用低密度基因芯片方法对人乳头瘤病毒（HPV）进行分型检测,建立一种经济实用的临床HPV感染的基因型检测方法.[方法]利用低密度基因芯片方法对145例阴道镜门诊病人的宫颈拭子标本进行HPV-DNA检测并分型.[结果]被检人群中共检测出57例HPV阳性,88例HPV阴性,HPV的感染率为39.3%,阳性标本中检测出12种高危型别,2种低危型别.其中单型感染51例（89%）,混合感染6例（11%）,16,31,18,58型检出率较高.[结论]低密度基因芯片是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高的检测方法,在HPV和宫颈癌的筛查与诊断中有很大的应用价值

用液相芯片技术定量测定人血清CEA、AFP和HBsAg

【目的】采用液相芯片技术同时定量测定人血清中癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)和乙肝表面抗原(HBsAg),并对该方法进行评价。【方法】制备抗体交联微球及生物素标记抗体,用双抗体夹心法对临床血清标本进行测定。【结果】同时检测CEA、AFP和HBsAg时的线性范围分别为0.032～200ng/mL、0.022～55U/mL、0.26～1000ng/mL,最低检测限分别为8.90pg/mL、0.013U/mL、0.24ng/mL,批内变异系数(CV)<9%,批间CV<14%。检测CEA、AFP、HBsAg的灵敏度分别为96.4%、95.8%、92%,特异度分别为95.6%、94.2%、100%,准确度分别为96%、95%、96%。其检测结果与化学发光免疫分析法(CLIA)或时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)之间呈显著的等级相关关系。该方法仅需1!L标本,3h即可完成检测。【结论】液相芯片技术具有可联合检测多项指标、高通量、线性范围广、灵敏度高、重复性好、节省样品和时间等优点,具有临床应用潜力

中国海南黎族人群15 个STR 位点的遗传多态性

【目的】研究海南黎族族人群15个STR位点D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、VWA、CSF1PO、D8S1179、TPOX、FGA、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、D19S433、D2S1338的遗传多态性。【方法】通过人类短串联重复序列(short tandem repeat，STR)复合扩增、基因扫描、基因分型调查了110名黎族无关个体15个STR位点等位基因分布情况。【结果】15个STR位点均符合Hardy-Weinberg平衡，共检出149个STR等位基因，其频率分布在0.0045～0.5045之间，杂合度(heterozygosity，H)为0.6716～0.8754，个体识别力(discrimination power，DP)为0.8770～0.9673，非父排除率(probabilities of paternity exclusion，EPP)为0.4383～0.7396，多态信息含量(polymorphic information content，PIC)为0.6265～0.8574。【结论】选用的15个STR位点均能检出等位基因遗传多态性，并具有较丰富的信息含量，为进一步研究中华民族STR遗传结构提供了基础资料

鸡胚内神经营养活性物质的提取及其生物活性

【目的】从鸡胚内提取具有神经营养生物活性的组分。【方法】分别取胚龄为 E10、E16、E19 的鸡胚, 匀浆离心后, 上清超滤, 获得 5 个组分, 即相对分子质量 Mr 50×103。采用新生大鼠海马神经元与鸡胚背根节体外培养方法, 观察各组分的促神经元存活及突起生长的作用。用 MTT 法测定神经元的活性。【结果】胚龄 E16 与 E19 的鸡胚内相对分子质量 Mr >50×103 的组分有明显的促进海马神经元细胞存活、分化和突起生长及鸡胚背根节突起生长的作用。【结论】鸡胚内含有较强的促进神经元存活、分化与突起生长的神经营养活性物质

用荧光定量PCR 方法检测转染细胞中外源基因的拷贝数

【目的】探讨采用荧光定量PCR 技术检测脑源性神经营养因子(BDNF)基因转染细胞(PcDNA3.1(+)/BDNF/ CHO)中BDNF 的拷贝数。【方法】分别以同等质量的PcDNA3.1(+)/BDNF/CHO , PcDNA3.1(+)/CHO(空载体转染细胞) 及CHO 细胞的DNA 为模板, 在PE5700PCR 仪上进行荧光定量PCR 分析。每个样本共检测30 次, 结果采用q 检验分析。 【结果】PcDNA3.1(+)/ BDNF/CHO 细胞、PcDNA3.1(+)/ CHO 和CHO 细胞株中BDNF 的拷贝数分别为95 164 ±12 , 31 622 ±10, 31 622±11。q 检验结果显示前者与后两者之间有统计学意义, P 0 .05 。 PcDNA 3.1(+)/ BDNF/ CHO 细胞株中BDNF 的拷贝数是后二者的3 倍, 而后两者的拷贝数相同。【结论】BDNF 转染细胞株 中外源BDNF 基因是以2 个拷贝的比例整合到宿主细胞基因组中去的

PCR 循环测序法检测 Kras 和 HCV 5′ 非 编 码 区 基 因 变 异

目的: 建立一种简单、快速、可靠的 DNA 序列分析方法,并利用此方法分析 K-ras基因和HCV 5′非编码区基因的变 异情况。方法: PCR 循环测序法是将 PCR 扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理,建立了以 PCR 扩增 引物为测序引物, 利用 Taq DNA 聚合酶、荧光标记的 2′ , 3′ -双脱氧核苷三磷酸( ddNTP)直接进行 PCR 扩增产物序列分析的方 法。应用该方法对人肺癌组织中的 K-ras癌基因和丙型肝炎病毒 5′ 非编码区(HCV 5′ -NTR)进行了序列测定。结果: 肺癌组织中 的 K-ras 基因第 1 外显子第 35位碱基发生点突变( GGT ※GAT); 属于高度保守区的HCV 5′ -NTR 存在基因变异。结论: PCR 循 环测序法具有简单、快速、结果可靠等特点, 为基因突变的检测和病原体的核酸序列分析提供了一个快速实用的方法

人苯丙氨酸羟化酶基因克隆及其原核表达质粒的构建

[目的]克隆健康人苯丙氨酸羟化酶基因全长cDNA序列,构建并鉴定其原核表达质粒pTrcHisB/PAH。[方法]采用RT-PCR方法从人肝组织中扩增PAH基因全长cDNA,T/A克隆到pMD18-T载体中,双酶切后将cDA亚克隆入pTrcHisB载体,构建pTrcHisB/PAH质粒,经限制性内切酶鉴定并测序。[结果]人PAH基因cDNA正确克隆入pTrcHisB表达载体,与Genebank中PAH基因序列一致。[结论]成功构建pTrcHisB/PAH表达质粒,为进一步进行研究PAH蛋白表达和重组蛋白活性鉴定奠定基础