临床药师参与肾移植后肺部感染患者的药物治疗实践

目的通过临床药师参与药物治疗实践,提高肾移植后肺部感染治疗的有效性、安全性与经济性。方法临床药师全程积极参与一例肾移植后肺部感染患者的治疗,在药物的选用、药物相互作用与不良反应的监护、患者出院宣教等方面提供药学服务。结果临床药师与医师紧密合作,患者治愈出院。结论临床药师积极参与肾移植后肺部感染患者的药物治疗,可提高药物治疗的有效性、安全性、经济性

Effects of Diosmetin from Carbonized Cirsium japonicum on Apoptosis in Human MCF-7 Breast Cancer Cells and its Mechanisms

研究大蓟炭中香叶木素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制。采用硅胶和Sephadex; LH-20柱层析从大蓟炭中分离鉴定了三个黄酮类化合物,经NMR和MS鉴定他们的结构分别为香叶木素(1)、刺槐素(2)和柳川鱼黄素(3)。采用MT; S方法检测不同浓度的香叶木素对MCF-7的细胞活力的影响;流式细胞术检测不同浓度的香叶木素处理对MCF-7细胞凋亡的作用;Western; blot法检测香叶木素处理对细胞PARP、P-JNK等细胞凋亡相关蛋白表达的影响。MTS及流式细胞术结果显示香叶木素能显著抑制MCF-7的增殖并; 且诱导细胞凋亡;香叶木素可上调P-JNK促进细胞凋亡。结果表明香叶木素在体外实验能通过激活JNK细胞凋亡通路抑制MCF-7的增殖及促进细胞凋亡。To study the effects of diosmetin from carbonized Cirsium japonicum on; apoptosis in human MCF-7 breast cancer cells and its mechanisms. Three; flavonoids were isolated and purified from carbonized C. japonicum by; silica gel and Sephadex LH-20 chromatography methods. Their structures; were elucidated by NMR and MS spectroscopic data and identified as; diosmetin(1),acacetin(2) and pectolinarigenin(3). MTS assay was; performed to detect the viability of MCF-7 cells treated by different; concentrations of diosmetin. The cell apoptosis rate was further; analyzed by flow cytometry(FCM). Western blot assay was applied to; measure the apoptosis related protein expression levels of PARP,P-JNK.; Diosmetin treatment on MCF-7 cells significantly inhibited cell; proliferation and induced cell apoptosis. Diosmetin significantly; downregulated P-JNK and upregulated cleaved-PARP protein expression.; Diosmetin inhibited MCF-7 cell proliferation and induced cell apoptosis; by activation of JNK pathway in vitro.江西中医药大学校级科研项目; 国家自然科学基金; 江西省自然科学基

人肝细胞内戊型肝炎病毒结合蛋白的酵母双杂交筛选

为进一步深入研究戊型肝炎病毒(HEV)感染机制以及致病机理,用酵母双杂交系统从人肝细胞cDNA文库中筛选与戊型肝炎病毒衣壳蛋白E2相互作用的蛋白,核酸序列分析及同源性检索表明,4个克隆与E2相互作用,其中一个克隆与P38IP高度同源,细胞免疫共沉淀实验结果显示:在哺乳动物细胞水平仍能够检测到E2与P38IP片段的特异的相互作用

大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2片段的聚合现象研究

在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的a .a .394～a .a .6 0 4片段 ,得到的重组蛋白NE2在SDS PAGE中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在 ,二聚体对病人血清的反应性明显强于单体 ;质谱分析表明NE2可形成从二聚体到至少六聚体的多种聚体 ;动态光散射测定表明平均分子半径约 4nm ,相当于四聚体 ,但分散度较大 ,提示为多种大小不一的聚合体的混合物。这些证据表明NE2蛋白可形成以同源二聚体为基本单位的多种聚合体形式 ,其中以二聚体间的结合最为紧密 ,并且以二聚体为基础可进一步装配出多种更高级结构 ,从而具有作为HEV疫苗及诊断试剂抗原的良好前景

颗粒化重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白及其抗原性与免疫原性

过去的研究发现大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2的aa3 94_60 6片段NE2可以形成同源多聚体 ,并具有良好的免疫保护性 ,但纯化后的免疫原性较弱。这里表达了 3个NE2蛋白的N端延伸突变体 ,发现对应于ORF2aa3 68_60 6的重组蛋白HEV 2 3 9在体外可以形成颗粒性抗原。HEV 2 3 9抗原颗粒与戊肝患者血清反应性良好 ,对中和性单克隆抗体 8C11的反应性与NE2抗原相当 ,而对另一中和性单克隆抗体 8H3的反应性较NE2抗原有显著提高 ,表明HEV 2 3 9抗原颗粒具有比NE2更好的抗原性。纯化后的HEV 2 3 9抗原颗粒直径约为 15～3 0nm。铝佐剂吸附的HEV 2 3 9免疫Balb c小鼠的半数有效剂量 (ED5 0 )在 0 0 8～ 0 2 5μg之间 ,而同样以铝佐剂吸附的NE2抗原 60 μg剂量免疫的抗体阳转率仅 2 5% ,表明HEV 2 3 9抗原颗粒具有更好的免疫原

基于原位自由基共聚技术的复合水凝胶制备及表征

以聚乙二醇与马来酸酐的双酯化产物(MAh-PEG-MAh)、丙烯酰胺(AM)为单体,N,N’-亚甲基双丙烯酰胺(BIS)或对二乙烯基苯(DVB)为交联剂,通过原位自由基共聚法合成了一种复合水凝胶。利用FT-IR、1H-NMR、SEM、TEM表征了凝胶结构和形态;利用XRD研究了凝胶的结晶性;研究了单体用量、分子链段长度、交联剂等因素对凝胶力学性能的影响。研究表明,柔性链段MAh-PEG-MAh以一定尺寸的聚集微区分散于PAM连续相,增强水凝胶的结晶性,且分散相与连续相之间有良好的作用力,当MAh-PEG1K-MAh与AM的物质的量比为1∶8,复合水凝胶的压缩强度达到18.2 MPa左右,力学性能最佳

戊型肝炎病毒衣壳蛋白同源二聚体的相互作用结构域

为了探讨戊型肝炎病毒衣壳蛋白同源二聚体形成的关键区域和相互作用结构域 ,以及二聚体形成与主要天然中和表位的形成之间的关系 ,通过末端缺失、定点突变技术研究戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的aa394_aa6 0 6片段NE2的聚合现象 ,发现其C端的aa5 97_aa6 0 2 (AVAVLA)疏水区是该片段同源聚合的核心区域 ,提高该区域氨基酸的亲水性将妨碍聚合现象的发生 ;半胱氨酸化学交联实验表明NE2形成同源二聚体时 ,aa5 97在空间位置上相接近 ,处于可生成化学键的距离 ,提示所处区域为疏水聚合的作用结构域 ;通过Blast程序估算核心区域的天然突变率 ,发现其疏水性高度保守 ;N端缺失实验表明 ,至少 6 5个氨基酸既不影响同源聚合也不直接参与主要的天然中和表位的形成 ,但可协助中和表位构象的形成 ,而这种协助作用可被ORF2的末端肽段所代替。aa5 97_aa6 0 2 (AVAVLA)疏水区为戊肝病毒衣壳组装的第一步骤的核心区域 ,并与重要的天然中和表位的形成直接相关 ,从而为戊肝病毒疫苗的研究提供更详细的信息

抗H5亚型禽流感病毒单链抗体在毕赤酵母中的分泌型表达和生物活性分析

在本实验室研制出的多株针对H5N1亚型禽流感血凝素单抗中,13D4单抗对所有H5亚型病毒均有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强和识别广的特点,且在小鼠实验中显示了对各种代表株禽流感的感染和发病均具有良好的治疗效果。在此研究基础上,本实验通过基因工程构建含有13D4单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达和纯化。经过竞争法和血凝抑制检测其活性,表明获得的单链抗体具有与原始鼠源抗体相近的反应活性和相同的识别表位。H5N1广谱中和单抗13D4的单链抗体的成功构建,为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础

传染性非典型肺炎病毒核蛋白的表达与活性检测

用PCR方法,人工合成传染性非典型肺炎病毒(SARS-CoV)核蛋白(N)全编码基因,并构建原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达。结果重组N蛋白表达产量占菌体总蛋白的40％以上,主要以可溶形式存在。用SARS患者急性期血清进行蛋白印迹检测,表明可溶形式和包含体形式均有明显活性。包含体形式的重组蛋白经纯化后纯度可达90％以上,活性与纯化前相当,可作为SARS抗体诊断试剂盒的抗原原料

HIV-1 gp160截短蛋白在酿酒酵母中的表达

利用PCR技术从pNL-43上扩增出截短的编码gp160蛋白的基因片断,克隆到酿酒酵母表达载体YEpFLAG-1上构建表达质粒YEp-gp160Δ12,电转化到酿酒酵母中,用缺色氨酸的SC培养基筛选出阳性克隆,重组子经YP培养基诱导后进行全菌蛋白的SDS-PAGE和Western Blotting分析,筛选出高表达菌株.纯化后的重组gp160Δ12(rgp160Δ12)蛋白经ELISA鉴定显示具有良好的生物活性