Üreaz içeren immobilize enzim komplekslerinin hazırlanması ve kullanım olanaklarının araştırılması

Bu tezin, veri tabanı üzerinden yayınlanma izni bulunmamaktadır. Yayınlanma izni olmayan tezlerin basılı kopyalarına Üniversite kütüphaneniz aracılığıyla (TÜBESS üzerinden) erişebilirsiniz.vn ABSTRACT PREPARATION AND APPLICATION POSSIBILITIES OF ENZYME COMPLEXES CONTAINING UREASE HAMARAT BAYSAL, Şenay PhD Thesis, Biochemistry Department Supervisor: Prof. Dr. Arif H. USLAN Ekim, 2000,187 page No intravenously enjectable preparate containing Urease as an alternative to hemodialysis, hemoperrusion and CAPD systems in patients having chronic renal failure has been encountered in literature. In this study, it has been aimed to convert blood urea to alanine by using Urease/AlaDH and PEG-Urease/PEG-AlaDH enzyme pairs within erythrocytes. The production of pyruvate and NADH by erythrocyte required in the second stage of the reaction will make the process a feasible and ceaseless one. The success of the system will enable the renal patients to curve themselves as the patients with diabetes mellitus. Urease/AlaDH were covalently immobilized on activated PEG and optimum conditions of PEG-Urease/PEG-AlaDH enzyme system obtained by preparative and kinetic studies. Urease was encapsulated erythrocyte by using slow dialysis methods and optimum conditions of encapsulation were obtained. Urease, AlaDH, PEG-Urease and PEG- AlaDH were encapsulated within erythrocyte and encapsulation yield, hemoglobine release and the change of erythrocyte shape were determined for each sample. Therefore, the fact of enzyme concentration on encapsulation were investigated. Urease/AlaDH and PEG- Urease/PEG-AlaDH enzyme pairs were encapsulated within erythrocyte at optimal conditional and the ability of alanine synthesis in this systems were determined. Keywords: Urease, AlaDH, erythrocyte, encapsulation, encapsulation in erythrocyte, artificial cell, uremia.ÖZET ÜREAZ İÇEREN ÎMMOBÎLÎZE ENZİM KOMPLEKSLERİNİN HAZIRLANMASI VE KULLANIM OLANAKLARININ ARAŞTIRILMASI HAMARAT BAYSAL, Şenay Doktora Tezi, Biyokimya Bölümü Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Arif H. USLAN Ekim, 2000,187 sayfa Kronik böbrek yetmezliği hastalarında hemoliz, hemoperfüzyon ve CAPD sistemlerine alternatif olarak doğrudan kana enjekte edilebilecek üreaz içeren bir enzim preparatına literatürde rastlanmamıştır. Bu çalışmada, canlı eritrositlerde Üreaz/AlaDH ve PEG-Üreaz/PEG-AlaDH enzim çiftleri ile kan üresinin alanine dönüştürülmesi planlanmıştır.Reaksiyonun ikinci kısmı için gerekli piruvat ve NADH' m eritrositlerin doğal metabolizmaları sonucu üretiliyor olması sisteme ekonomiklik ve süreklilik kazandıracaktır. Sistemin başarısı böbrek hastalarını şeker hastalan gibi kendi kendilerini tedavi eder hale getirecektir. Üreaz ve AlaDH enzimleri aktif PEG ile immobilize edilerek PEG- Üreaz/PEG-AlaDH enzim sisteminin çalışma koşulları optirnizasyonu preparatif ve kinetik çalışmaları ile sağlanmıştır. Eritrositlerde enkapsülasyonda yavaş diyaliz yöntemi kullanılmış ve Üreaz enziminin enkapsülasyonu ile sistemin optirnizasyonu sağlanmıştır. Belirlenilen optimum koşullarda Üreaz, AlaDH, PEG-Üreaz ve PEG-AlaDH enzim türevleri eritrositlerde enkapsüle edilerek enkapsülasyon verimi, hemoglobin salınımı ve eritrosit şekillerindeki değişim izlenerek her bir enzim derişinıinin enkapsülasyon üzerine etkileri belirlenmiştir. Belirli oranlarda Üreaz/AlaDH ve PEG-Üreaz/PEG-AlaDH enzim çiftleri eritrositlerde enkapsüle edilerek sistemlerin alanin sentez yetenekleri saptanmıştır