Nanopartículas de prata : análise dos efeitos anti-biofilme e anti-adesão sobre Candida albicans e Candida glabrata

Os objetivos deste trabalho foram: (1) avaliar o efeito sinergístico de nanopartículas de prata (NP) com Nistatina e Clorexidina contra biofilmes de Candida albicans e Candida glabrata; (2) verificar o efeito das NP na composição da matriz destes biofilmes e (3) investigar a capacidade de adesão a células epiteliais HeLa e a poliestireno de leveduras tratadas com NP. As drogas sozinhas ou em combinação com NP (5 nm) foram aplicadas sobre biofilmes maduros (48 h) e após 24 h de contato a atividade sinergística foi avaliada através da quantificação da biomassa total e por meio da contagem do número de colônias. Após o tratamento com NP, as matrizes dos biofilmes foram extraídas e analisadas em termos de proteínas, carboidratos e DNA. Ainda, leveduras viáveis foram recuperadas e adicionadas tanto às células HeLa quanto aos poços vazios de placas de poliestireno e, após 2 horas de contato, a adesão foi determinada usando violeta cristal. NP combinadas com Nistatina e Clorexidina exibiram atividade anti-biofilme sinergística dependente das espécies e concentrações de drogas usadas. Ainda, NP interferiram na composição da matriz extracelular dos biofilmes e a capacidade de adesão das leveduras viáveis foi significativamente reduzida após tratamento prévio com NP. Esses achados permitem concluir que NP podem contribuir na prevenção ou tratamento da estomatite protética associada à Candida. Entretanto, estudos adicionais são necessários para que estas NP sejam usadas com segurança

Avaliação da capacidade de adesão e produção de biofilme em enterococos clínicos e alimentares

Tese de mestrado. Biologia (Microbiologia Aplicada). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010Os enterococcus, são patogéneos habitantes naturais da microbiota intestinal do Homem e provocam inúmeras infecções sendo a sua virulencia agravada pela presença de determinantes genéticos, muitos dos quais permitem a interação com o hospedeiro bem como a colonização das superficies e consequente formação de biofilmes. Estas estruturas protegem os microrganismos de inumeros factores ambientais principalmente do efeito dos antibioticos, contribuindo assim para a sua persistência. O facto de se estabelecerem em inumeras superficies e instrumentos médicos faz com que sejam considerado um factor de virulência associado ao género. Neste estudo foram utilizados 16 estirpes de Enterococcus, de diferentes espécies e origens, sendo o objectivo comparar a capacidade de produção de biofilme entre isolados clínicos e alimentares, após crescimento em meios simulando condições de colonização- o meio “skim milk”- e meios simulando infecção como urina, soro e BHI. Comparou-se ainda a influência de factores como o pH (6.0; 7.0 e 7.4), a temperatura (30ºC e 37ºC) e a osmolaridade (0%NaCl, 2.5%NaCl, 5% NaCl e 6.5% NaCl) na produção de biofilme, e estudouse a contribuição de genes como o esp, gelE, agg e efaA, entre outros, bem como a sua expressão, nos diferentes meios de forma a evidenciar a importância dos mesmos para a capacidade de adesão e formação de biofilme das estirpes. Com este estudo concluímos que parece existir uma maior capacidade de adesão e formação de biofilme por parte dos isolados alimentares quando comparados com os clínicos, e que esta capacidade depende do meio em questão e não tanto da origem do isolado. Factores como a temperatura, a osmolaridade e o pH mostraram condicionar a formação de biofilme, que depende igualmente da adaptação do isolado ao novo meio, por alteração da expressão génica de factores como adesinas, e proteinas de superficie envolvidas no processo de adesão. A composição do meio mostrou afectar igualmente a expressão génica, sendo a urina e o meio BHI os que mais promovem o aumento de expressão dos genes em estudo. Mais estudos serão necessários de forma a avaliar com exactidão a contribuição destes determinantes para o iniciar do processo de formação de biofilme, não descurando o objectivo final que é a tentativa da sua erradicação, nomeadamente na industria clinica e alimentar.The enterococci, natural inhabitants of the human intestinal flora are the major cause of several infections and their virulence potential is due to many genetic determinants wich allow the interaction with the host tissues, as well as surface colonization and therefore, biofilm production. Biofilms protect the microorganisms from innumerous environmental factors like antibiotic action and so, these structures are notoriously and extremely hard to eradicate. Their ability to bind to various surfaces and medical devices is considered a major virulence factor directly related to this genus. In the present study 16 strains of Enterococcus were used in order to compare the ability of clinical and food isolates to bind and produce biofilms after growth in media simulating environmental colonization (skim milk) and infection sites: urine, BHI and serum. We also compared the influence of pH (6.0; 7.0 e 7.4), temperature (30ºC e 37ºC) and salt concentrations (0%NaCl, 2.5%NaCl, 5% NaCl e 6.5% NaCl) in the production of biofilms, as well as the importance of some determinants and enterococcal virulence gene expression of esp, gelE, fsrB and epa. With this report we can conclude that apparently the food strains have a larger potential to bind and produce biofilms when compared with clinical isolates, and this ability depends more of the growth media than of the strain origin. Environmental factors like pH, temperature and osmolarity affect the biofilm production, which also depends on the ability of the isolate to adapt to the new conditions and modulate is genetic expression of determinants like adesins and surface proteins involved in the adhesion process. The composition of the media also affect gene expression being urine and BHI the ones that promote an over expression of the majority of the genes leading to a significantly increase in mRNA levels. More studys will be necessary in order to evaluate the accurate contribution of these virulence determinants to the adhesion process and biofilme production, always attending to the final goal wich is biofilme eradication in both clinical and food industries

Biofilms, nontuberculous mycobacteria and infection

As micobactérias não tuberculosas (MNTs) são agentes infeciosos emergentes responsáveis por infeções diversas, nomeadamente infeções associadas aos cuidados de saúde. Neste trabalho foi avaliada a capacidade de formação de biofilmes por duas MNTs (M. smegmatis e M. chelonae). Os biofilmes foram caracterizados utilizando microscopia eletrónica e a eficácia de diversos desinfetantes foi avaliada contra MNTs recuperadas de biofilmes. Os resultados obtidos demonstram que as MNTs são capazes de formar biofilmes em materiais presentes em ambiente hospitalar e de resistir à ação de diversos desinfetantes.Non-tuberculous mycobacteria (NTMs) are emerging infectious agents responsible for various infections, namely, health-care-associated infections. In this work, biofilms assembly by two NTMs (M. smegmatis and M. chelonae) was assessed. Biofilms were characterized using electron microscopy and the ef ficacy of several disinfectants was determined against NTMs recovered from biofilms. The results obtained demonstrate that NTMs are able to assemble biofilms on materials present in a hospital environment and to resist the action of various disinfectants.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Avaliação da capacidade de adesão de células de biofilmes de Candida após tratamento com nanopartículas de prata

O objetivo deste estudo foi investigar a capacidade de adesão a células epiteliais humanas e a superfície de poliestireno de leveduras viáveis recuperadas de biofilmes de Candida albicans e Candida glabrata tratados com nanopartículas de prata (NP). Métodos: Biofilmes de Candida (48 hrs) foram formados em placas de microtitulação de 6 poços e tratados por 24 horas com NP (5 nm) nas concentrações de 13,5 e 54 mg/L. Suspensões de células de Candida (107 células viáveis/mL em RPMI 1640) provenientes dos biofilmes tratados com NP foram adicionadas a monocamadas de células HeLa e a poços vazios de placas de microtitulação de 24 poços (para estudar adesão a poliestireno). Após 2 horas de contato, a adesão das leveduras foi determinada usando a coloração com violeta cristal. Resultados: A capacidade de adesão de leveduras viáveis a células HeLa e a superfícies de poliestireno foi significativamente reduzida, e esta redução foi maior quando os biofilmes foram pré-tratados com NP na concentração de 54 mg/L. Ainda, a quantidade de leveduras aderidas das duas cepas diferiu de acordo com o substrato (células epiteliais e superfície de poliestireno). Conclusão: NP podem induzir modificações em leveduras viáveis, as quais podem diminuir a disseminação de infecções por Candida, principalmente em pacientes imunocomprometidos

Monitorização em contínuo da qualidade microbiológica da água e biofilmes associados utilizando um sistema de células de fluxo

A VIMÁGUA, Empresa de Água e Saneamento de Guimarães e Vizela E.I.M., criada em 19 de Fevereiro de 2002, tem por missão o abastecimento de água para consumo humano. Como tal, a manutenção da qualidade da água potável desde a estação de tratamento de água até aos consumidores é uma das nossas preocupações. Contudo, os sistemas de distribuição de água potável estão continuamente expostos a um fluxo de matéria orgânica biodegradável e de microrganismos. Estes últimos podem formar estruturas nas paredes das condutas – biofilmes – que lhes permite uma maior resistência à desinfecção. Com o propósito de monitorizar a formação de biofilmes e a sua interacção na qualidade da água instalou-se um sistema de amostragem in situ – reactor de células de fluxo - para a monitorização da formação de biofilmes em sistemas de água potável, e testar métodos de detecção de microrganismos patogénicos. Ao longo do tempo foi monitorizado o número de bactérias cultiváveis e totais, assim como parâmetros físico-químicos da água que abastecia o reactor. Em paralelo, foram desenvolvidas sondas de PNA para a detecção rápida de vários microrganismos (Escherichia coli; Helicobacter pylori) e testadas em laboratório, estando já a ser aplicadas no sistema de células de fluxo.Os autores gostariam de agradecer o apoio financeiro concedido pela FCT (Bolsa de doutoramento SFRH/BD/4705/2001) e pelo projecto europeu SAFER (Contrato n°EVK1-CT-200200108).info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Estudo das comunidades microbianas associadas a grutas litorais de erosão de Santa Maria, Açores

XIV Expedição Científica do Departamento de Biologia - Santa Maria 2009.O presente trabalho surge no âmbito da XIV Expedição Científica a Santa Maria/2009, do Departamento de Biologia da Universidade dos Açores. Durante esta expedição foram amostrados habitats cavernícolas de duas grutas litorais da Ilha de Santa Maria: Furna Velha (ou das Pombas) e Gruta de Santana (ou dos Anjos). As amostragens consistiram, maioritariamente, em amostras de biofilmes nos locais em que estes foram detectados a olho nu. Amostras complementares de água, sedimentos e material encrostante foram recolhidas em algumas áreas. O estudo realizado insere-se no objectivo geral de caracterização da biodiversidade microbiana troglóbia do arquipélago, em particular, neste trabalho, das comunidades microbianas associadas às grutas resultantes da erosão marinha da ilha mais antiga dos Açores

Barrier properties of films of pea starch associated with xanthan gum and glycerol

O objetivo do trabalho foi avaliar as propriedades de barreira e a solubilidade de biofilmes obtidos a partir de amido de ervilha de alto teor de amilose em associação à goma xantana e glicerol. Soluções filmogênicas (SF) com diferentes teores de amido de ervilha (3, 4 e 5%), goma xantana (0, 0,05 e 0,1%) e glicerol (proporção glicerol-amido de 1:5 P/P) foram estudadas. As SF foram obtidas por ebulição (5 minutos), seguida de autoclavagem por 1 hora a 120 ºC e os filmes foram preparados por casting. O aumento da concentração de amido e de glicerol na composição causou aumento da espessura e da solubilidade dos filmes em água. O plastificante gerou ainda elevação dos coeficientes de permeabilidade ao vapor d'água e ao oxigênio. O aumento da concentração da goma xantana não interferiu nas propriedades estudadas. Os biofilmes obtidos a partir de amido de ervilha verde, associado ou não à goma xantana e glicerol, se comparados com filmes de amido de ervilha amarelas e outras fontes de amido, apresentaram boa barreira ao oxigênio e ao vapor d'água e baixa solubilidade em água.The aim of this work was to evaluate the barrier properties and solubility of biofilms made from wrinkled pea starch with high amylose content in association with xanthan gum and glycerol. Filmogenic solution (FS) with different levels of pea starch (3, 4 and 5%), xanthan gum (0, 0.05 and 0.1%) and glycerol (glycerol-starch 1:5 W/W) were tested. FS was obtained by boiling (5 minutes), autoclaving for 1 hour at 120 ºC and the films were prepared by casting. The increased concentration of starch and glycerol in the composition caused increases in thickness of the films and in their solubility in water. The plasticizer also generated higher coefficients of water vapor and oxygen permeabilities to water vapor and to oxygen. The increasing concentration of xanthan gum did not interfere in the properties studied. Biofilms produced with wrinkled pea starch, with or without xanthan gum and glycerol, showed better barrier to oxygen and water vapor and low solubility in water, in comparison with films of yellow pea starch and other starch sources.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP