Holdbarhet på prøvemateriale til Subklassifisering av Lymfocytter med Flowcytometri

Abstract

Sammendrag Enhet for Cytometri ved St. Olavs hospital ønsket å undersøke holdbarheten til prøvematerialet brukt til subklassifisering av lymfocytter ved bruk av flowcytometri. Den anbefalte holdbarhetsgrensen var satt til 24 timer av leverandøren BD Biosciences. Dette var ønskelig å utvide til 48 timer ettersom at prøver som transporteres over lengre distanser, ofte overskrider denne grensen. Det ble benyttet prøvemateriale fra 30 ulike blodgivere, hvor alle prøvene ble analysert ved mottak, etter 24 timer og etter 48 timer, for å vurdere endringen av antall lymfocytter. Prøvene ble analysert med flowcytometri der hver av de ulike lymfocyttene fikk spesifikke fluorokromer bundet til seg med antigen-antistoff-binding. Resultatene ble så videre behandlet i Microsoft Excel for å undersøke eventuelle endringer i antall celler ved de ulike tidspunktene. Det ble gjort statistiske beregninger for å avdekke eventuelle interne avvik, tilfeldige og systematiske feil. Det ble ikke funnet noe statistisk signifikant forskjell mellom verdiene for CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ og CD16+, CD56+ celler ved gjennomført variansanalyse mellom verdier fra mottak, 24 og 48 timer. T-test og regresjonsanalyse for CD16+, CD56+ viste at det forelå en proporsjonal systematisk feil mellom verdier fra mottak og 48 timer. Alle resultater, med unntak av CD16+, CD56+ omregnet til prosent av mottaksverdi viste at 90% av konfidensintervallet for gjennomsnittet lå innenfor tillatt bias og majoriteten av enkeltverdier innenfor tillatt totalfeil. Til tross for funn av proporsjonal systematisk feil og et 90% konfidensintervall for gjennomsnittet av CD16+, CD56+ celler utenfor nedre akseptgrense, er ikke dette alene grunnlag nok til at holdbarhetsgrensen ikke kan utvides utover 24 timer. Begrunnelsen for dette er at differansen mellom resultatene for hver av CD-markørene ikke utgjorde nok til at det ville hatt en klinisk relevans for denne analysen. Likevel, bør Enhet for Cytometri i samarbeid med leger ansatt ved AIT vurdere å inkludere flere prøver og eventuelt pasientprøver før holdbarhetsgrensen kan utvides til 48 timer.Abstract The Cytometry Unit at St. Olavs hospital wanted to evaluate the stability of blood samples used for subclassification of lymphocytes by flow cytometry. The recommended stability limit was set to 24 hours by the manufacturer, BD Biosciences. However, an extension to 48 hours was considered desirable, as samples transported over longer distances often exceed the 24-hour limit. Samples from 30 different blood donors were included in the study. Each sample was analyzed at the time of arrival, after 24 hours, and after 48 hours to evaluate changes in lymphocyte counts. Flow cytometry was used, where specific fluorochromes were bound to the various lymphocyte subsets through antigen-antibody binding. The data were processed using Microsoft Excel to detect any potential changes in cell counts at the different measurement intervals. Multiple statistical analyses were performed to identify internal variation, as well as random and systematic errors. No statistically significant differences were observed for CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ and CD16+, CD56+ values in the analysis of variance comparing measurements at arrival, 24 hours, and 48 hours. However, t-tests and regression analyses for CD16+, CD56+ indicated a proportional systematic error between measurements taken at arrival and after 48 hours. With the exception of CD16+, CD56+ (expressed as a percentage of the arrival value), 90% of the confidence intervals for the mean values were within the allowable bias limits, and the majority of individual values were within the total allowable error. Despite the detection of a proportional systematic error and the confidence interval for CD16+, CD56+ falling below the lower acceptance threshold, these findings alone do not provide sufficient grounds to oppose increasing the sample stability limit to 48 hours. This conclusion is based on the fact that the differences in CD marker values were not considered to be of clinical significance. Nonetheless, the Cytometry Unit, in collaboration with physicians at the Department of Immunology and Transfusion Medicine (AIT), should consider including a larger number of samples an potentially including patient samples, before formally extending the stability limit to 48 hours