Gene transfer for the establishment of new bacilli for the secretory production of heterologous glycoside hydrolases

Abstract

Möglichkeiten für die Entwicklung neuer Produktionsorganismen zur Herstellung heterologer Enzyme wurden ausgelotet. Ein neu entwickeltes Expressionsplasmid konnte per triparentaler Konjugation leicht in 12 Bakterienarten übertragen werden und wurde für die Herstellung von vier heterologen Glycosidhydrolasen in Paenibacillus polymyxa eingesetzt. Es wurden Signalpeptid-Bibliotheken durchmustert sowie der Promotor und das Kulturmedium optimiert. So konnte eine Gesamtsteigerung der Cel8A-Aktivität im Kulturüberstand von 30 U/l auf 5.475 ± 411 U/l (ca. 0,35 g/l) erzielt werden.Possibilities were evaluated for the development of new production organisms for the production of heterologous enzymes. A newly developed expression plasmid could easily be transferred to 12 different bacterial species and was used for the production of four heterologous glycoside hydrolases in Paenibacillus polymyxa. Signal peptide libraries were screened and the promoter and the culture medium were optimized. Using these approaches, an increase of the Cel8A activity in the supernatant of P. polymyxa from initially 30 U/l to 5,475 ± 411 U/l (about 0.35 g/l) was achieved