Charakterisierung der Proteinstöchiometrie mittels Fluoreszenzanisotropie und GFP-Fusionsproteinen

Abstract

The characterization of the stoichiometry of oligomerizing proteins is still a non-trivial challenge. In this study, the stoichiometry of coiled-coil peptides was determined via green fluorescent protein (GFP) fusion proteins and fluorescence anisotropy. This thesis thus provides the framework for the reliable differentiation between monomer, dimer, trimer, and higher oligomer. When studying photobleached GFP fusion proteins, we further found that the irradiation of GFP with blue high-intensity light leads to the fragmentation of GFP at residue 65 and therefore to the degradation of the protein.Die Bestimmung der Stöchiometrie von Oligomer-bildenden Proteinen stellt immer noch eine Herausforderung dar. In dieser Studie wurde die Stöchiometrie von superhelikalen Peptiden mittels grün fluoreszierenden Protein (GFP)-Fusionsproteinen und Fluoreszenzanisotropie bestimmt. Damit präsentiert diese Arbeit den Rahmen zur zuverlässigen Unterscheidung von Monomer, Dimer, Trimer und höherem Oligomer. Bei der Untersuchung von gebleichten GFP-Fusionsproteinen wurde ferner festgestellt, dass die Bestrahlung von GFP mit blauem Licht hoher Intensität zur Fragmentierung von GFP an Position 65 und damit zum Abbau des Proteins führt