Análisis in vitro del péptido antiviral HRA2pl producido en tabaco, contra Ortopneumovirus y Rubulavirus humanos

Abstract

"Las infecciones respiratorias agudas (IRA’s) representan un importante problema de salud ya que ocupan el segundo lugar a nivel mundial de morbimortalidad en niños menores de 5 años. Los principales agentes causales son los virus, entre los cuales se encuentran el Ortopneumovirus (hOPV), Metapneumovirus (hMPV), Respirovirus (hREV) y Rubulavirus humanos (hRUV) e Influenza Virus (IV), entre otros. Para el 2012 el costo estimado de las IRA’s por paciente hospitalizado en México es de aproximadamente $9, 000 dólares. En este estudio se agroinfiltraron plantas de Nicotiana benthamiana de 6 semanas de edad con Agrobacterium tumefaciens, para expresar el péptido HRA2pl que diseñado a partir del péptido HRA que es parte de la proteína de fusión F de hMNV. El péptido fue identificado por Dot blot y Western blot, fue purificado posteriormente por columna de afinidad de níquel y se analizó su efecto antiviral en líneas celulares de mamífero (HEp-2 y Vero) contra los virus hOPV y hRUV. En el ensayo de inhibición viral en placa se observó que para hOPV B la menor dosis infectiva media del cultivo celular (TCID50) fue de 362.6 con la dosis del péptido de 2.6x10-3 µg/mL y para hRUV-2 la menor TCID50 fue de 936.7 con la dosis del péptido de 1.8x10-3 µg/mL. Es importante resaltar que a pesar de estar diseñado para inhibir la fusión virus-célula de hMPV, es funcional también contra otros virus, como hOPV B y hRUV-2 debido a que tienen mecanismos de entrada son similares, por lo cual este péptido puede ser utilizado como tratamiento profiláctico en guarderías y hospitales para prevenir infecciones por estos patógenos.""Acute respiratory infections (ARI’s) represent a major health problem since they can rank second worldwide in terms of morbidity and mortality in children under 5 years old. The main causative agents are viruses; among the most frequent are human Orthopneumpvirus (hOPV), Metapneumovirus (hMPV), Respirovirus (hREV), Rubulavirus (hRUV) and Influenza Virus (IV), among others. For the 2012, the estimated cost of AIR’s per patient in Mexico was of approximately$ 9,000 USD. In this study, 6-week-old Nicotiana benthamiana plants were agroinfiltrated with Agrobacterium tumefaciens, to express the HRA2pl, which was designed from HRA, a fragment of the fusion protein F of hMPV. The peptide was detected by Dot blot and Western blot and was purified by nickel affinity column to analyze its antiviral effect on human cellular lines (HEp-2 and Vero) against hOPV and hRUV viruses. In plaque viral inhibition assay, it was shown that for hOPV B, the lowest median tissue culture infective dose (TCID50) was of 362.6 with the peptide dose of 2.6 x10-3 µg/mL and for hRUV-2 the TCID50 was 936.7 with the peptide dose of 1.8x10-3 µg/mL. It is important to highlight that although the peptide was designed to inhibit the hMPV virus-cell fusion, it is also functional for other viruses, such as hOPV B and hRUV-2 due to their similar infection mechanisms. Therefore this peptide can be used as a prophylactic treatment in day care centers and hospitals to prevent infections by these pathogens."Concejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT