Caracterización de los genes que codifican el sistema de restricción-modificación salI: expresión y regulación

Abstract

El trabajo se ha centrado fundamentalmente en el análisis de la organización transcripcional de los genes salI, tanto en Streptomyces albus G, como en S. lividans donde habían sido clonados. Se determinó el sitio exacto en el que se inicia la trascripción del gen salIR y se caracterizó el promotor, al que denominamos PRL. Se comprobó que el ARNm sintetizado a partir de PRL es policistrónico, de modo que los genes salI constituyen un operón. Además se encontró un promotor que se denominó PM, que permite la expresión independiente del gen de modificación. Se determinó el sitio exacto de iniciación de la trascripción a partir de PM y se caracterizó el promotor. Para cuantificar la fuerza de estos promotores, se realizaron fusiones génicas, demostrándose que aunque ambos son promotores débiles, PRL, responsable de la síntesis del ARNm policistrónico, es más fuerte que PM. Paralelamente se determinó que las pautas de lectura, ORF3 y ORF4, así como posiblemente ORF5 no intervienen en la regulación del sistema. También se estudio la expresión del sistema en E. coli, demostrándose que el sitio de iniciación de la trascripción del gen de modificación, es el mismo que en Streptomyces. También se estudió la fuerza de los promotores en este microorganismo por fusiones génicas