Análise dos polimorfismos da região 3’ não traduzida do gene hla-g e inserção aluyhg com a manifestação do lúpus eritematoso sistêmico na população do estado de Santa Catarina

Abstract

TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia.O lúpus eritematoso sistêmico é uma doença inflamatória crônica de caráter autoimune, multissistêmica, remitente e recidivante, sendo caracterizada por causar a produção e deposição de autoanticorpos, e a infiltração de células inflamatórias causa dano a alguns órgãos. A origem da doença é desconhecida, mas acredita-se que uma combinação da genética, fatores ambientais, hormônios e cromossomos sexuais estejam envolvidos. O HLA-G está relacionado com a inibição de células do sistema imune, como células T e NK, conferindo proteção contra respostas inflamatórias. Entre os polimorfismos ligados a sua expressão está a inserção ou deleção de 14pb localizado na 3’UTR. A família Alu é o elemento móvel mais comum em genomas de primatas, com mais de 1,1 milhões de cópias no Homo sapiens. A inserção AluyHG encontra-se entre os loci HLA-A e HLA-G, podendo ser um marcador da região. A partir disso, o objetivo desse estudo foi genotipar 153 pacientes e 153 controles (pareados por idade e sexo) e verificar a influência desses polimorfismos na manifestação da doença. Para isso, foi realizado um levantamento de dados epidemiológicos relacionados à manifestação da doença (hábito tabagista, histórico familial e idade de manifestação da doença) e estes foram testados. O DNA foi extraído de sangue total e a genotipagem feita por PCR e visualizada em eletroforese em gel vertical de poliacrilamida em concentração de 7% corado com nitrato de prata, no caso do polimorfismo do HLA-G, e em gel de agarose 1%, no caso do polimorfismo AluyHG (com 322pb). Foram realizados cálculos das frequências alélicas e genotípicas, análises de associações e inferência de haplótipos. Após as análises foram encontrados valores significativos de associação dos polimorfismos e a manifestação de LES para os genótipos 14pb*Del*Del (OR=0,589, p=0,046), 322pb*Del*Del (OR=1,653, p=0,039). Para os dados epidemiológicos, foram encontradas associação para fumantes (OR=2,637, p=0,009) e proteção para nunca fumantes (OR=0,545, p=0,047). Também houve valor significativo entre o grupo nunca fumantes e o genótipo 14pb*Del*Del (OR=0,475, p=0,043). Considerando os haplótipos inferidos, os valores significativos encontrados foram 14pb*In/322pb*In (OR=0,198, p=0,048), 14pb*Del/322pb*In (OR=0,509, p=0,018), 14pb*In/322pb*Del (OR=1,725, p=0,008), assim como para a composição haplotípica 14pb*Del*Del/322pb*Del*In (OR=0,309, p=0,003). Nas associações entre haplótipos e dados epidemiológicos, foram encontradas associações positiva entre nunca fumantes e o haplótipo 14pb*In/322pb*Del (OR=2,186, p=0,006), entre histórico familial e as composições haplotípicas 14pb*Del*Del/322pb*Del*Del (OR=6,465, p=0,002) indicando risco para a manifestação da doença, e associação negativa para 14pb*Del*In/322pb*Del*In (OR=0,221, p=0,010). A idade de manifestação da doença antes dos 16 anos apontou risco quando com o haplótipo 14pb*Del/322pb*In (OR=4,308, p=0,013) e proteção na manifestação entre 16 e 50 anos quando com o haplótipo 14pb*Del/322pb*In (OR=0,309, p=0,023). Em conclusão, os polimorfismos da 3’UTR do HLA-G são associados à doença bem como aos dados epidemiológicos analisados neste trabalho e a inserção AluyHG encontra-se em desequilíbrio de ligação com o polimorfismo do HLA-G aqui analisado, podendo ser um marcador da região cromossômica. Palavras chaveSystemic lupus erythematosus is a chronic inflammatory disease of character autoimmune, multisystem, remitting and relapsing, characterized by causing the production of autoantibodies and deposition, and infiltration of inflammatory cells cause damage to some organs. The origin of the disease is unknown but it is believed that a combination of genetics, environmental factors, hormones and sex chromosomes are involved. HLA-G is associated with inhibition of immune system cells, such as NK and T cells, conferring protection against inflammatory responses. Among polymorphisms linked to its expression is insertion or deletion of 14pb located in the 3'UTR. The Alu family is the most common mobile element in primate genomes, with more than 1.1 million copies in Homo sapiens. The insertion AluyHG located between the loci HLA-A and HLA-G, may be a marker region. From this, the objective of this study was to genotype 153 patients and 153 controls (matched for age and sex) and the influence of these polymorphisms in the demonstration and development of the disease. For this, a survey was conducted of epidemiological data related to the development of the disease (smoking habits, family history and age of onset of the disease) and these were tested. DNA was extracted from whole blood by PCR and genotyping made and viewed in vertical gel electrophoresis in polyacrylamide concentration of 7% stained with silver nitrate in the case of polymorphism of HLA-G, and 1% agarose gel in AluyHG case polymorphism (with 322pb). Calculations were made of the allele and genotype frequencies, analyzes of associations and haplotype inference. The analysis found associations of the polymorphisms and the risk of developing SLE or protection for genotypes *14pb*DelDel (OR = 0.589, p = 0.046), *322pb*DelDel (OR = 1.653, p = 0.039). For epidemiological data, we found an association for smokers (OR = 2.637, p = 0.009) and protection for never smokers (OR = 0.545, p = 0.047). There was also significant values among the never smokers group and genotype *14pb*DelDel (OR = 0.475, p = 0.043). Considering the inferred haplotypes, significant values were in 14pb*In/322pb*In (OR = 0.198, p = 0.048), 14pb*Del/322pb*In (OR = 0.509, p = 0.018), 14pb*In/322pb*Del (OR = 1.725, p = 0.008) and for composing haplotype 14pb*Del*Del/322pb*Del*In (OR = 0.309, p = 0.003). In the associations between haplotypes and epidemiological data, associations were found between risk of never smokers and haplotype *14pbIn/322pb*Del (OR = 2.186, p = 0.006), between family history and compositions haplotype 14pb*Del*Del/322pb*Del*Del (OR = 6.465, p = 0.002) indicating risk and protection for 14pb*Del*In/322pb*Del*In (OR = 0.221, p = 0.010). The age of disease onset before age 16 was associated with the risk haplotype *14pbDel/322pb*In (OR = 4.308, p = 0.013) and protection on manifestation between 16 and 50 years with haplotype *14pbDel/322pb*In (OR = 0.309, p = 0.023). In conclusion, the polymorphisms of HLA-G 3'UTR are associated with the disease as well as the epidemiological data analyzed in this study and insertion AluyHG is in linkage disequilibrium with the polymorphism of HLA-G analyzed here and may be a marker of chromosomal region