Migração celular na leucemia/linfoma linfoblástico T: papel do receptor 1 de esfingosina-1-fosfato

Abstract

A leucemia linfoblástica aguda de células T (LLA-T) e o linfoma linfoblástico de células T (LL-T) são proliferações malignas de precursores de células T em diferentes estágios de maturação. LLA-T e LL-T são considerados atualmente duas formas de uma mesma doença, a leucemia/linfoma linfoblástico de células T (LLL-T), por compartilharem características morfológicas, imunofenotípicas e genéticas. Como os blastos de LLL-T apresentam características similares às de timócitos normais, moléculas envolvidas na migração destas células podem também estar envolvidas na migração ou homing dos linfoblastos no curso da doença. Neste sentido, foi demonstrado recentemente que o receptor 1 de esfingosina-1-fosfato (S1P1) é essencial para a saída de timócitos do timo. No presente estudo, decidimos avaliar a expressão e o papel do S1P1 na migração de quatro linhagens celulares de LLA-T (HPB-ALL, MOLT-4, CEM e JURKAT) em resposta ao seu ligante fisiológico, a esfingosina-1-fosfato (S1P). Observamos que a linhagem HPB-ALL apresentou baixa expressão de RNAm de S1P1, enquanto MOLT-4 e JURKAT apresentaram uma expressão mediana e CEM apresentou altos níveis de expressão de RNAm para este receptor. Em ensaios funcionais de migração celular observamos que a capacidade migratória das linhagens frente a S1P foi diretamente relacionada ao nível de expressão gênica do receptor. A S1P induziu a migração das linhagens analisadas em diferentes concentrações até 100 nM, e inibiu a migração quando aplicada em altas concentrações (1000 nM). As respostas migratórias foram acompanhadas pela modulação do citoesqueleto de actina. Dependendo da concentração de S1P utilizada, observamos polimerização (menores concentrações) ou despolimerização (maiores concentrações) da actina. Além disso, o prétratamento das células com W146 (inibidor de S1P1) bloqueou a migração das linhagens frente à S1P em menores concentrações e induziu a migração frente à S1P em altas concentrações, sugerindo que a migração seja especificamente mediada por S1P1. Nossos resultados sugerem que as interações mediadas por S1P/S1P1 modulam a migração não apenas de precursores de células T normais, mas também de linfoblastos de LLL-T. Desta forma, a interação S1P/S1P1 pode ser considerada como alvo para possíveis estratégias terapêuticas frente a estas neoplasias.T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) and T-cell lymphoblastic lymphoma (TLBL) are malignant proliferations of T cell precursors at different stages of normal development. T-ALL and T-LBL are presently believed to represent two different forms of a single disease, the T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma (T-LLL), as they share morphological, immunophenotypic and genetic features. As T-LLL lymphoblasts present similar characteristics of normal T cell precursors, molecules involved on the migration of these cells might also be associated with migration and homing of T-ALL/LBL. In this context, the sphingosine-1-phosfate receptor 1 (S1P1), has been described as essential for mouse thymocyte migration and thymic egress. Herein, we evaluated the expression and role of S1P1 in four T-ALL cell lines (HPBALL, MOLT-4, CEM e JURKAT) in response to its physiological ligand, the sphingosine-1-phophate (S1P). We observed that HPB-ALL cells presented low expression levels of S1P1 mRNA, whereas MOLT-4 and JURKAT had medium levels and CEM showed high levels of S1P1 expression. In functional migration assays, we observed that the migratory response of the cells towards S1P was directly related with their expression levels of the receptor. S1P induced the migration of the cell lines analyzed in different concentrations up to 100 nM and inhibited cell migration at higher concentrations (1000 nM). Moreover, migratory responses were accompanied by the modulation of actin cytoskeleton. Depending on S1P concentrations, we observed actin polymerization (lower concentrations) or depolymerization (higher concentrations). Pre-treatment of the cells with W146 (a S1P1 inhibitor) blocked S1Pinduced migration at lower concentrations but induced migration towards S1P at high concentrations, suggesting that the migration is specifically mediated by S1P1. Our results suggest that interactions mediated by S1P/S1P1 can modulate cell migration of T-LLL blasts similarly to their normal T cell precursor counterparts. Accordingly, immune intervention upon this ligand/receptor interaction may be envisioned as a potential therapeutic strategy for these malignancies