Papel da 5-Lipoxigenase no controle da carga parasitária e no estresse oxidaltivo de eritrócitos durante a fase aguda da infecção experimental com Trypanosoma cruzi

Abstract

Recentemente foi mostrado que o óxido nítrico (NO) produzido durante a infecção com Trypanosoma cruzi participa do estresse oxidativo em eritrócitos, mas não é necessário para o desenvolvimento da anemia na fase aguda da infecção em camundongos. Neste trabalho foi investigado o efeito da inibição da produção de leucotrienos (LTs) através do bloqueio farmacológico ou genético da enzima 5-lipoxigenase (5-LO). Foram utilizados camundongos C56BL/6, C57BL/6 iNOS KO, 129 WT sv e 129 5-LO-/- infectados ou não com T. cruzi (Cepa Y). Foram avaliados os seguintes parâmetros: anemia, carga parasitária e estresse oxidativo em eritrócitos durante a fase inicial da infecção com T cruzi. O estresse oxidativo em eritrócitos obtidos de camundongos infectados, tratados ou não com NDGA e camundongos 5-LO-/- foi investigado através da determinação do perfil de oxidação da hemoglobina, consumo de oxigênio, tempo de indução (Tind) e quimiluminescência iniciada com tert-butil hidroperóxido (t-BHP). Nossos dados sugerem que os LTs não participam do desenvolvimento da anemia durante a fase aguda da infecção com o T. cruzi. Nós mostramos que o tratamento dos camundongos infectados com NDGA atenuou o estresse oxidativo em eritrócitos que se desenvolve na fase aguda da infecção. Os camundongos nocautes para 5-LO também apresentaram menor estresse oxidativo em relação aos controles. O tratamento com NDGA e a falta do gene para 5-LO aumentou significativamente a carga parasitária no sangue e no tecido cardíaco (12º dia após infecção) em comparação com os camundongos infectados não tratados ou com o gene para 5-LO íntegro. A produção de NO por macrófagos ativados foi diminuída tanto em camundongos tratados com NDGA quanto naqueles onde a 5-LO está ausente. Nossos dados indicam pela primeira vez que os LTs exercem papel essencial no controle da carga parasitária no sangue e no coração, no desenvolvimento do estresse oxidativo sistêmico, bem como na regulação da produção de NO por macrófagos ativados durante a fase aguda da infecção experimental com T.cruzi.Recently, it was demonstrated that nitric oxide (NO) produced during Trypanosoma cruzi infection participates of erythrocyte oxidative stress, but is not necessary for the development of anemia in the acute phase of infection in mice. In this work it was investigated the effect of inhibition of leukotrienes (LTs) by pharmacological or genetic blocking of the 5-lipoxygenase (5-LO) enzyme. We used C56BL/6, C57BL/6 iNOS KO, 129sv (WT) and 129 5-LO-/- T. cruzi-infected-treated or not with nordihydroguaiaretic acid (NDGA). We assessed assays to analyze anemia, the control of parasite burden, erythrocyte oxidative stress during an acute phase of T. cruzi infection. The oxidative stress in erythrocyte from mice infected-NDGA-treated or not and 5-LO-/-, was investigate by measuring oxyhaemoglobin, haemoglobin derivatives, oxygen uptake, induction time (Tind) and chemiluminescence (CL), initiated with tert-butyl hydroperoxide (t-BHT). Our data suggest that LTs does not participate in the development of the anemia during the acute phase of T. cruzi infection. We showed that the NDGA treated-infected mice lessened erythrocyte oxidative stress that grows in the sharp phase of the infection. We found that the increase of erythrocyte oxidative stress during an acute phase of T. cruzi infection. 5-LO-/- mice also presented smaller oxidative stress than control mice. The treatment with NDGA and lacking of 5-LO gene significantly increased blood and cardiac parasitism (day 12 after infection). NO production by activated macrophages was reduced so much in NDGA-treated mice as those where the 5-LO gene is absent. Our data indicate for the first time that LTs are essential in the control of load parasitic in the blood, cardiac tissue, systemic oxidative stress as well as in the regulation of the NO production by activated macrophages during the acute phase of the experimental T. cruzi infection