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巢式PCR检测滤纸血片CMV DNA方法的建立及评价

By 孟璐璐, 王琳琳, 窦亚玲, 刘菊芬, 靳蕾 and 任爱国

Abstract

目的 建立巢式PCR检测滤纸血片标本巨细胞病毒核酸(CMV DNA) 的实验方法,并对其灵敏度、最低检测限、稳定性等进行评价.方法 采集医院确诊CMV阳性的血液样品,分别制备成全血和滤纸血片标本.选取5份滤纸血片标本,分别打取3个或6个直径3 mm的圆片用于DNA提取,并对所得DNA溶液的浓度和纯度进行测定.采用巢式PCR对12份滤纸血片和全血标本进行检测,获得该方法的灵敏度和最低检测限数据.将滤纸血片标本储存于-20 ℃ 3个月后重新进行检测,以判断巢式PCR方法的稳定性.结果 将DNA提取时所用圆片数由3个增加到6个后,DNA溶液浓度提高2~8倍,巢式PCR的灵敏度升高;与全血检测结果相比,巢式PCR检测滤纸血片标本CMV DNA方法的灵敏度为100%,最低检测限为75 copy/mL.滤纸血片标本在-20 ℃放置3个月,实验的灵敏度未下降.结论 使用巢式PCR检测滤纸血片标本CMV DNA能够获得准确、可靠、稳定的结果.与3个圆片相比,使用6个圆片进行滤纸血片标本DNA的提取,可使DNA溶液浓度大大增加,因而有助于提高检测的灵敏度.北京大学医学部新教师启动基金中国科技核心期刊(ISTIC)0161990-19923

Topics: 巨细胞病毒 聚合酶链反应 DNA,病毒
Publisher: 国际检验医学杂志
Year: 2012
DOI identifier: 10.3969/j.issn.1673-4130.2012.16.034
OAI identifier: oai:localhost:20.500.11897/233520
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