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胚期基因甲基化之研究

By 翁崧銘

Abstract

[[abstract]]DNA甲基化是不改變DNA序列,但仍能影響基因表現的修飾。在真核生物中DNA甲基化,是一種表型遺傳標記,對於基因表現的調控十分重要。小鼠Rnf35基因,僅短暫表現於著床前的胚胎期;大鼠Rtdpoz-T1或T2基因,表現於部分大鼠癌細胞、早期胚胎和睪丸中。目前已知Rnf35基因會被CDP蛋白所抑制,但Rtdpoz的調控機制目前仍不清楚。因此本實驗的目的是希望分析Rnf35基因和Rtdpoz基因的表現靜寂是否與基因甲基化有關。於本論文中使用重亞硫酸鈉反應修飾胞嘧啶,未甲基化的胞嘧啶,經重亞硫酸鈉反應後會轉變為胸腺嘧啶;甲基化的胞嘧啶,經重亞硫酸鈉反應後不會改變。基因體DNA經重亞硫酸鈉處理,以專一性引子對進行聚合酶連鎖反應後,由DNA序列分析基因中胞嘧啶轉換為胸腺嘧啶的情形。分析的結果顯示,小鼠肝細胞Rnf35基因離起動子較遠區域(M1)的甲基化比率為87.5 %,小鼠肝和睪丸細胞離起動較近區域(M2)的甲基化比率為100 %,因此Rnf35基因於成鼠體內不表現的原因可能是起動子區域受到CpG過度甲基化的影響。大鼠Rtdpoz-T1基因所分析的起動子區域則是無甲基化情形,因此T1基因不表現的原因可能與起動子甲基化無關,其調控區可能為更上游或由蛋白因子所調控

Topics: 甲基化, Rnf35, Rtdpoz, 基因寂靜, 癌症
Year: 2009
OAI identifier: oai:http://ir.lib.pccu.edu.tw/:987654321/1814
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