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Dehydroepiandrosterone對大鼠腎上腺皮質細胞的作用機轉

By 張玲玲

Abstract

[[abstract]]關鍵詞:dehydroepiandrosterone,皮質固酮,腎上腺皮質細胞,ERK,MEK Dehydroepiandrosterone 可以降低高血糖、高血脂、減少肥胖,而且它是一種抗氧化劑, 可以減少糖尿病長期高血糖對組織的傷害。根據我們先前研究發現 dehydroepiandrosterone 可以直接作用腎上腺皮質zona fasciculata-reticularis 細胞,並且 dehydroepiandrosterone 可以抑制環單磷酸腺甘對去卵巢雌鼠腎上腺皮質zona fasciculata-reticularis 細胞刺激皮質固酮之分泌。根據文獻我們知道環單磷酸腺甘可以影響mitogen-activated protein kinase , 所以, 本研究擬以離體研究來探討 dehydroepiandrosterone 是否會透過環單磷酸腺甘影響大鼠腎上腺皮質zona fasciculata-reticularis (ZFR)細胞之mitogen-activated protein kinase,進而影響皮質固酮分泌的作用機轉。大鼠犧牲後,取出腎上腺皮質組織,以collagenase 處理,製備腎上腺皮質之ZFR 細胞。將定量之ZFR 細胞於37oC 培養一小時。離體實驗分為二部份,第一部份探討dehydroepiandrosteron 是否透過 環單磷酸腺甘影響腎上腺皮質ZFR 細胞PKA 活性,進而影響皮質固酮之分泌。第二部份探討dehydroepiandrosterone 是否透過環單磷酸腺甘影響 mitogen-activated protein kinase 相關酵素之活性,進而影響腎上腺皮質ZFR 細胞分泌皮質固酮。在第一部份先加入H89(PKA inhibitor)作用一小時,再加入 dehydroepiandrosterone 合併8-Br-cAMP(一種較易滲透之cAMP 同類物)培養半小時後,測定細胞分泌皮質固酮之濃度以及細胞內PKA 的活性。第二部份定量之ZFR 細胞經過前培養一小時後,將 ZFR 細胞在37oC 培養於內含dehydroepiandrosterone 合併 8-Br-cAMP 或12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate9(activate ERK)的培養液中,培養 15 分鐘、30 分鐘、1 小時或2 小時後。細胞經離心、清洗、擊碎,利用Western-blotting 技術分別分析有活性的ERK、MEK、Ras、Rap-1、Raf1 或B-Raf,以及全部的ERK、 MEK、Ras、或Rap-1 的蛋白質表現。這些結果將有助於瞭解dehydroepiandrosterone 對去大鼠ZFR 細胞影響mitogen-activated protein kinase 的作用機轉

Year: 2009
OAI identifier: oai:http://ir.lib.pccu.edu.tw/:987654321/751
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