Business Internationalization: Motivations, Challenges, Resilience, and the Strategic Impact of N-Tuple Helix Networks

This thesis aims to study the theme of Business internationalization, analyzing the motivations that encourage companies to expand into international markets, as well as the challenges faced that determine the successful or unsuccessful of companies in adapting to the complexities of the international markets and the decisive strategic impact of N-Tuple of Helices collaborative networks in simplifying and improving the internationalization process. In practical terms, by highlighting business internationalization, this research will allow company managers to understand the main motivating factors and challenges faced in this process and identify resilient strategies to overcome global barriers. Furthermore, the study provides insights on how to benefit from N-Tuple of Helices networks in strengthening partnerships, promoting innovation, obtaining competitive advantages, and contributing to strategic decision-making to improve competitiveness in international markets. In the theoretical context, this study seeks to contribute to the dynamics of business internationalization, exploring the implementation of multi-helix collaborative networks in business initiatives and public policies for the robustness of the internationalization of companies, particularly with regard to the integration of multiple actors, such as academia, companies, government and entities that promote support for internationalization, this research offers an innovative perspective on how these synergies in desire of a common objective, enhance and foster the growth and competitiveness of companies in the global market. This research will follow the empirical-formal research method, which will be characterised by the formulation of research questions based on the theoretical framework, testing these questions and critical reflection, confronting theory with the evidence of observed facts, and safeguarding the possibility of refutation. In the specific case of this research, the formulation of questions will be inspired by the existing theoretical framework on the internationalization of companies, which is a delimited set of observable phenomena. The first empirical essay in this thesis (Chapter 2) is entitled "Analysing stimuli and barriers, failure and resilience in Companies' Internationalization: a systematic and bibliometric review", where the framework and issues of the topic were framed, following a process of deductive reasoning, construction and based on a logic of a chain of reflection in descending order, which consisted of a general theoretical framework for private research cases. The results of the Systematic Literature Review (SLR) allow for the identification of emerging and as yet little explored themes on which the development of the following chapters is based. The second empirical essay in the thesis (Chapter 3), entitled "SMEs internationalization process: from success to insolvency, from brand rebirth to the re-internationalization", highlights the need to better understand the negative impact of these experiences on the internationalization of companies, SMEs with major investments deployed in their internationalization processes, through recourse to high levels of bank financing, in association with the COVID-19 pandemic period, were not able to successfully overcome the calvary of internationalization and culminating in their own bankruptcies, however, despite such failures, the attractiveness and reputation of the brand, supported by the strategic vision and perseverance of new entrepreneurs, enabled the rebirth of the brands and opening the door to their re-entering international markets. The third empirical essay in this thesis (Chapter 4) is entitled "Firms' internationalization: the sustainment process". In this study, we adopted the pragmatist paradigm through a mixed-method research approach that included two distinct studies. The first was a conceptual study focusing on the internationalization strategies of small and mediumsized enterprises (SMEs), which utilized a questionnaire for data collection. This was followed by a qualitative study that involved interviews to explore the factors that enhanced and propelled companies towards greater competitiveness in international markets. The fourth empirical essay in the thesis (Chapter 5) is entitled " What is the Role of Collaborative Networks in the Internationalization of Companies? An N-Tuple Helix Qualitative Approach”. The N-Tuple of Helices is fundamental for increasing the internationalization of companies, allowing adaptation to global complexities and expanding presence in international markets through collaborative networks. The study methodology applied was multiple cases, comprising the current synergies of the Triple Helix and the respective combination between the spheres, thus promoting the viability of the success of government and international projects to increase the national competitiveness of companies in international markets. The present thesis uncovered new insights and a clearer understanding of the business internationalization by highlighting the interplay between internal motivations, external challenges, and organisational resilience in navigating global markets. This study demonstrated how strategic engagement with N-Tuple of Helices networks fosters innovation, facilitates knowledge exchange, and strengthens collaborative efforts among academia, industry and government. Furthermore, the research provides actionable recommendations for business leaders, emphasizing the importance of leveraging multi-stakeholder partnerships to overcome barriers, enhance adaptability, and secure competitive advantages in diverse international contexts. These contributions enrich existing literature and offer a practical framework for businesses aspiring to expand globally in a competitive and strategic way.A presente tese tem como objetivo estudar o tema da internacionalização empresarial, analisando as motivações que potenciam as empresas a expandirem-se para os mercados internacionais, os desafios enfrentados que determinam o (in)/sucesso das empresas na adaptação às complexidades dos mercados internacionais e o impacto estratégico das redes colaborativas N-Tuple Helices na simplificação e melhoria do processo de internacionalização. Num contexto de globalização marcado pela elevada complexidade e competitividade, a internacionalização surge assim como uma estratégia essencial para o crescimento, sustentabilidade e inovação das empresas (Mathews & Zander, 2007). Este tema adquire relevância à medida que as empresas enfrentam transformações nos mercados internacionais e necessitam de responder às exigências num ambiente econômico em constante mudança. A capacidade das empresas de acederem mercados internacionais é um fator determinante para o seu sucesso. A internacionalização potência que as empresas diversifiquem os riscos bem como a exploração de novas oportunidades nos mercados, impulsionando a troca de conhecimento e inovação, permitindo assim fortalecer a competitividade global (Eichholz et al., 2024). Este estudo procura compreender como as empresas podem superar as barreiras enfrentadas, alavancar os estímulos disponíveis, suprir as falhas e terem a capacidade de resiliência para prosperarem nos mercados internacionais. O alinhamento estratégico combina os recursos internos das empresas, como o capital humano, capacidades tecnológicas e redes de colaboração, com os fatores externos, dos quais evidenciamos as políticas governamentais, incentivos e as regulamentações internacionais, são fundamentais para o sucesso no processo de internacionalização, pelo que as empresas que conseguem combinar e integrar esses elementos posicionam-se como atores competitivos nos mercados globais, contribuindo para o desenvolvimento económico (Chung et al., 2022; Vrontis et al., 2022). Contudo, a internacionalização é um processo complexo que nem sempre decorre como planeado, pelo que em determinadas circunstâncias obriga as empresas a reduzir frequentemente a atividade podendo inclusivamente levar à des-internacionalização das empresas nos mercados internacionais (Kafouros et al., 2022). Porém, outras empresas optam pela re-internacionalização pois consideram como sendo uma experiência de aprendizagem, sendo determinante corrigirem as falhas e serem resilientes, utilizando os conhecimentos previamente adquiridos para melhorarem a sua estratégia internacional e tornando-se assim mais competitivas nos mercados internacionais (Surdu, Greve, & Benito, 2021). A combinação de estratégias bem estruturadas aliado à utilização de redes colaborativas têm vindo a emergir na literatura como dinâmicas, envolvendo interações entre Academia-Indústria-Governo (A-I-G), pois desenvolvem interações colaborativas determinantes para superar as barreiras na exploração dos mercados internacionais, numa perspetiva da N-Tuples of Helices. Esta abordagem interdisciplinar incentiva também à inovação, ao desenvolvimento económico e à internacionalização das empresas, desempenhando também um papel vital na gestão dos projetos colaborativos (Shkarupeta & Babkin, 2024). Embora o tema da internacionalização das empresas seja amplamente estudado, permanece como um campo de conhecimento fragmentado, com lacunas significativas, tais, como: • A falta de uma compreensão integrada sobre as barreiras e estímulos no processo de internacionalização, especialmente em contextos de crise como a Covid-19. • Insuficiente exploração dos conceitos da Des-internacionalização e da Reinternacionalização, ainda pouco debatido na literatura. • Necessidade de uma análise aprofundada acerca das interações colaborativas entre A-I-G, no modelo N-Tuple of Helices, que são fundamentais para aumentar a internacionalização das empresas e a melhoria da competitividade nos mercados internacionais, permitindo assim uma melhor adaptação às complexidades globais. A literatura evidencia e identifica as barreiras e os estímulos como fatores centrais para o (in)/sucesso da internacionalização das empresas. Isto é particularmente evidente quando consideramos os desafios enfrentados pelas empresas no contexto covid-19, que reforçaram a necessidade de uma compreensão mais integrada sobre como as empresas podem mitigar riscos, adaptar-se às mudanças e aproveitar oportunidades emergentes. Analisamos através de estudo de caso múltiplos, a des-internacionalização e a reinternacionalização das empresas, a exploração destas temáticas permitiu desenvolver um quadro teórico que sistematiza os conceitos e contribuí para o avanço científico no campo da internacionalização. Em termos gerais, a presente tese propõe-se ainda investigar as dinâmicas das redes colaborativas, como o modelo N-Tuple of Helices, do qual destacamos além das interações entre os diferentes atores, a propulsão para o sucesso na internacionalização. O objetivo geral desta investigação é analisar a internacionalização empresarial, estudando as motivações que potenciam as empresas a expandirem-se para os mercados internacionais, bem como os desafios enfrentados aliado à capacidade de resiliência, que determina o (in)/sucesso das empresas na adaptação às complexidades dos mercados internacionais e o impacto estratégico das redes colaborativas N-Tuple Helices na simplificação e melhoria do processo de internacionalização. A partir do objetivo geral são definidos ainda cinco objetivos específicos: ✓ Sistematizar a literatura existente sobre o tema da internacionalização das empresas sobre estímulos, barreiras, falhas e resiliência; ✓ Identificar os principais aceleradores e obstáculos que levam as empresas a (re)/entrar nos mercados internacionais; ✓ Analisar o papel do governo especificamente no período pós-Covid-19, no apoio prestado às empresas nos mercados internacionais; ✓ Analisar as interações colaborativas, numa perspetiva N-Tuple of Helices, que permite captar a complexidade das redes e apoiar a entrada das empresas nos mercados internacionais; ✓ Formular e testar um modelo de suporte para o papel da dinâmica das redes colaborativas no incentivo à internacionalização das empresas onde destacamos o modelo N-Tuple of Helices combinado com os insights dos modelos Triple Helix (TH), Quadruple Helix (QH) e Quintuple Helix (qH). No seguimento dos objetivos definidos, no Capítulo 2 é realizada uma revisão sistemática da literatura (RSL) que aborda a temática da internacionalização das empresas, procurando dar resposta à questão de investigação: Qual o atual estado da arte sobre os estímulos e barreiras, os fracassos e a resiliência na internacionalização das empresas? Responder a esta questão de investigação vai fornecer-nos contributos tanto a nível académico como empresarial para o campo dos negócios internacionais, permitindo a configuração de um mapa de conhecimento, possibilitando o desenho de caminhos para a internacionalização, obtendo assim a chave para o (in)/sucesso das empresas nos mercados internacionais. Conforme proposto por Denyer & Tranfield (2009) e aplicado por Casado-Belmonte et al. (2020) à internacionalização, a RSL utilizada neste estudo consiste em cinco fases. A primeira envolve a questão de investigação e explana todo o processo de recolha e análise de dados. A segunda fase consiste na recolha dos artigos na base de dados Web of Science. Na fase 3 efetua-se a seleção da amostra tendo por base diversos critérios de inclusão e exclusão. Na fase 4 procede-se a uma exposição dos resultados obtidos e respetiva discussão assim como as conclusões, identificando as lacunas existentes e propondo uma agenda de investigação futura. Posteriormente, efetuamos um mapeamento bibliométrico que permitiu construir um mapa científico da literatura (Cobo et al., 2011) e fornecer os detalhes para a criação e análise dos grupos temáticos. Os resultados da RSL permitem a identificação de diferentes áreas de investigação existentes no domínio da internacionalização das empresas, em cinco clusters: i) estratégia; ii) desinternacionalização e re-internacionalização; iii) barreiras; iv) estímulos; e v) sobrevivência. Estes temas são explorados no desenvolvimento dos capítulos seguintes. Assim, no Capítulo 3 foca-se na necessidade de compreender melhor os fatores de sucesso e insucesso associados ao calvário da internacionalização das PME em período de pandemia Covid-19 e identificar os principais aceleradores e obstáculos que levam as empresas a (re)/entrar nos mercados internacionais. Com recurso a entrevistas semiestruturadas foram recolhidos dados de seis PME com antigos e atuais CEO, identificamos quatro tópicos relevantes, o sucesso, a insolvência, o renascimento e a reinternacionalização. A internacionalização pode criar um alto grau de incerteza e desestabilizar rotinas das PME, exigindo-se respostas inovadoras e específicas ao contexto. Este ensaio oferece diretrizes sobre como contornar o calvário da internacionalização. Especificamente, nosso estudo demonstra a importância da tomada de decisões nas PME para singrarem nos mercados internacionais. No capítulo 4 investigamos como as barreiras, o planeamento e as motivações influenciam o processo de internacionalização de empresas, através de uma abordagem de método misto de dois estudos. No estudo 1 aplicamos técnicas multivariadas para identificar as premissas para a internacionalização das empresas que culminou num modelo teórico e testado através de uma amostra de 402 empresas. No estudo 2 adotamos uma análise qualitativa baseada em estudos de caso múltiplos mediante a realização de várias entrevistas permitindo a identificação de estratégias que possibilitaram às empresas superar os desafios da Covid-19 e fortalecer a sua posição internacional. Os resultados evidenciam que i) a falta de apoios governamentais, barreiras culturais e taxas alfandegárias exigem planeamento e afetam a motivação à internacionalização; ii) o planeamento ajuda a mitigar as barreiras e reforça a motivação para a internacionalização; iii) a motivação é essencial para o sucesso nos mercados internacionais, especialmente quando sustentada pelo apoio governamental; iv) a estratégia de internacionalização e o planeamento influenciam significativamente o sucesso das empresas nos mercados internacionais; v) o apoio governamental, incluindo subsídios, incentivos fiscais e programas de financiamento, foram fundamentais para aliviar as pressões financeiras e promover a resiliência empresarial; vi) a adoção rápida de tecnologias digitais foi crucial para manter as operações e a expansão para os mercados globais vii) a capacidade de adaptação das empresas, através de uma liderança eficaz e gestão ágil, permitiram dar uma resposta rápida e eficaz às mudanças no ambiente de negócios global; e viii) as parcerias estratégicas facilitam o acesso a novos recursos e aos mercados internacionais, mitigando riscos operacionais. No Capítulo 5, tendo por base vinte entrevistas semi-estruturadas aos stakeholders que integram as dinâmicas das múltiplas hélices, foi explorada a relevância das interações colaborativas, a partir de uma perspetiva N-Tuple of Helices que permite capturar a complexidade das redes e apoiar a entrada das empresas nos mercados internacionais. Os resultados indicam que a abordagem N-Tuple of Helices é fundamental para o incremento da internacionalização das empresas, permitindo adaptação às complexidades globais e alargando a presença nos mercados internacionais através das redes colaborativas, resultam num impacto positivo para a competitividade das empresas nos mercados globais. Com base nestas evidencias, o estudo descreve um modelo integrativo de redes colaborativas para a internacionalização das empresas e referencia que os projetos estimulados pelo governo e financiados pela União Europeia podem disponibilizar às empresas incentivos para a entrada nos mercados internacionais, dinamizando redes colaborativas, e apoia as empresas a suplantar as barreiras à internacionalização. A articulação dos diferentes ensaios desenvolvidos visa contribuir de forma concreta e relevante para o aprofundar do conhecimento existente sobre a temática da internacionalização das empresas. Para tal consideramos fulcral no capítulo 2 estabelecermos o alicerce teórico da investigação, através de uma RSL, que destaca lacunas críticas na literatura, como a necessidade de compreender melhor os estímulos e barreiras que as empresas enfrentam, especialmente em contextos de crise. As descobertas apresentadas servem como ponto de partida para a aplicação prática e empírica nos capítulos subsequentes. Assim, no capítulo 3 aprofundámos a base teórica ao investigar empiricamente como as PME enfrentam os desafios de internacionalização em cenários adversos, tais como, a pandemia da Covid-19. Este ensaio foca os conceitos de barreiras e estímulos da internacionalização das empresas, que permite analisar o impacto dessas variáveis no (in)/sucesso das empresas. A ligação é evidente, pois a teoria apresentada anteriormente é validada é complementada pela análise prática e específica de situações disruptivas, destacando-se o papel da resiliência organizacional e a capacidade de adaptação das empresas nos mercados internacionais. O capítulo 4 dá continuidade à investigação, pois permite ampliar a análise ao explorar a interação dinâmica entre as barreiras, o planeamento estratégico e as motivações no processo de internacionalização. Enquanto o capítulo anterior concentra-se nos eventos disruptivos e na superação de crises, este capítulo 4 expande essa abordagem ao incorporar métodos mistos que permite compreender como esses fatores interagem para moldar os resultados das empresas nos mercados internacionais. A investigação qualitativa realizada no capítulo 3 foi essencial para fundamentar e enriquecer a abordagem quantitativa e qualitativa mais ampla que foi desenvolvida no capítulo 4. Por fim, o capítulo 5 complementa e expande as contribuições dos ensaios anteriores, focando-se nas dinâmicas colaborativas, em particular no modelo N-Tuple of Helices, que impulsionam a internacionalização. A transição para este ensaio ocorre dos fatores internos das empresas para analisarmos o papel estratégico das redes colaborativas. A articulação dos quatro capítulos desenvolvidos visa contribuir de forma concreta e relevante para o aprofundar do conhecimento existente sobre a temática da internacionalização das empresas. Assim, a progressão ao longo dos ensaios demonstra uma abordagem integrada e abrangente, que vai desde a fundamentação teórica, passando pela aplicação empírica e pela análise estratégica, para tal consideramos fulcral que se conheçam as dinâmicas existentes nos modelos N-Tupple of Helices, desde as interações entre A-I-G, à utilização das redes colaborativas potenciadoras de internacionalização, tentando assim superar as barreiras dos mercados internacionais, torna-se por isso, imperioso potenciar os estímulos que são dinamizados por todas as sinergias que procuram obter sucesso nos mercados internacionais

Identificação de causas genéticas do hipogonadismo hipogonadotrófico congénito utilizando a sequenciação de nova geração

O desenvolvimento pubertário é um processo fisiológico complexo que resulta da interação entre o sistema neuroendócrino, fatores genéticos e ambientais. Inicia-se com a reativação do eixo Hipotálamo-Hipófise-Gónadas, levando à produção de gonadotrofinas, hormonas sexuais e consequente desenvolvimento dos carateres sexuais secundários. O Hipogonadismo Hipogonadotrófico Congénito (HHC) é uma doença endócrina rara que, na adolescência, se manifesta clinicamente com ausência completa ou parcial do desenvolvimento dos caracteres sexuais secundários. Na idade adulta, os sintomas incluem ausência de virilização e disfunção erétil no sexo masculino, amenorreia primária no sexo feminino, ausência de líbido e infertilidade em ambos os sexos. O HHC caracteriza-se pela ausência ou diminuição da produção, secreção ou ação da hormona libertadora de gonadotrofinas. Em 50 a 60% dos casos associa-se a anosmia/hiposmia (Síndrome de Kallmann) ou a outras anomalias congénitas. O diagnóstico do HHC baseia-se na anamnese, observação de sinais clínicos, levantamento de sintomas e exames laboratoriais e imagiológicos. Contudo, desde o início do século XXI, o conhecimento sobre as causas genéticas do HHC tem avançado na mesma medida que o desenvolvimento das tecnologias de sequenciação genética. A disponibilidade das tecnologias de sequenciação de nova geração (NGS) proporcionou grandes avanços no diagnóstico molecular destes doentes. Este estudo teve como objetivo investigar as causas genéticas do HHC em doentes portugueses, utilizando a NGS, ferramentas in silico e técnicas de biologia molecular. Foram estudados 81 doentes com HHC e 263 controlos portugueses. O ADN genómico foi extraído dos leucócitos do sangue periférico e submetido à sequenciação do exoma completo. A partir das bases de dados OMIM® e Pubmed, identificaram-se 169 genes relacionados com o fenótipo de HHC, que foram incluídos num painel virtual. As variantes encontradas nesses genes foram filtradas com base na frequência populacional e localização no genoma, sendo classificadas conforme os critérios do American college of medical genetics and genomics e da Association for molecular pathology (ACMG-AMP) em cinco níveis, de benignas a patogénicas. Para avaliar o impacto de variantes com potencial para alterar o splicing, utilizou-se o método de minigene. A análise das variantes germinativas permitiu identificar a causa genética do HHC em 24 dos 81 doentes estudados (29,6%). As variantes causais estavam distribuídas por 10 dos 169 genes presentes no painel genético virtual analisado. Os genes GNRHR, FGFR1, ANOS1 e CHD7 foram os mais frequentemente afetados. Notavelmente, a ampliação do painel genético não resultou num aumentou considerável da taxa de diagnóstico. No entanto, é importante destacar que este estudo expandiu o espectro mutacional da doença, identificando várias variantes até então nunca descritas. A maioria das variantes encontradas foi classificada como de significado indeterminado (VUS), mas a taxa de VUS não diferiu significativamente entre doentes e controlos, com exceção do gene EGF, onde foram encontradas VUS exclusivamente nos doentes. Concluímos que a maioria dessas variantes raras não estão diretamente relacionadas com o fenótipo estudado, refletindo provavelmente o fundo genético da população portuguesa. Em relação à oligogenia, observou-se uma frequência de 6,2% entre os doentes (5/81), um valor estatisticamente mais elevado quando comparado com os controlos. O estudo funcional de uma variante identificada no gene CHD7 (NM_017780.4: c.4354G>T, p.Val1452Leu), resultou no aumento da taxa de diagnóstico para 30,9%, demonstrando a importância dos estudos funcionais na reclassificação de VUS. Este trabalho enfatizou a complexidade genética do HHC, reforçando a importância de uma compreensão aprofundada da doença, seja para estabelecer o diagnóstico e/ou o prognóstico, para ajudar no aconselhamento genético e tratamento, seja para o esclarecimento dos processos biológicos, que potencialmente poderão contribuir para o desenvolvimento de terapias dirigidas no futuro.Pubertal development is a complex physiological process resulting from the interaction between the neuroendocrine system, genetic factors, and environmental influences. It begins with the reactivation of the Hypothalamic-Pituitary-Gonadal axis, leading to the production of gonadotropins, sex hormones, and the consequent development of secondary sexual characteristics. Congenital Hypogonadotropic Hypogonadism (CHH) is a rare endocrine disorder that manifests during adolescence with a complete or partial absence of secondary sexual characteristic development. In adulthood, symptoms include lack of virilization and erectile dysfunction in males, primary amenorrhea in females, decreased libido, and infertility in both sexes. CHH is characterized by the absence or reduction in the production, secretion, or action of gonadotropin-releasing hormone. In 50 to 60% of cases, it is associated with anosmia/hyposmia (Kallmann Syndrome) or other congenital anomalies. The diagnosis of CHH is based on medical history, clinical signs, symptom assessment, and laboratory and imaging tests. However, since the early 21st century, the knowledge about the genetic causes of CHH has advanced alongside with the development of the genetic sequencing technologies. The availability of nextgeneration sequencing (NGS) has significantly improved the molecular diagnosis of these patients. This study aimed to investigate the genetic causes of CHH in Portuguese patients using NGS, in silico tools, and molecular biology techniques. A total of 81 patients with CHH and 263 Portuguese controls were studied. Genomic DNA was extracted from peripheral blood leukocytes and subjected to whole-exome sequencing. From the OMIM® and PubMed databases, 169 genes related to the CHH phenotype were identified and included in a virtual gene panel. Variants in these genes were filtered based on population frequency and genomic location and classified according to the American College of Medical Genetics and Genomics (ACMG) and the Association for Molecular Pathology (AMP) criteria into five levels, ranging from benign to pathogenic. The minigene method was used to assess the impact of variants with potential to interfere in the splicing mechanism. The analysis of germline variants identified the genetic cause of CHH in 24 out of the 81 patients (29.6%). Causal variants were distributed across 10 of the 169 genes belonging to the virtual genetic panel, with GNRHR, FGFR1, ANOS1, and CHD7 being the most frequently affected genes. Notably, the expansion of the genetic panel did not significantly increase the diagnostic rate; however, this study broadened the mutational spectrum of the disease by identifying several previously undescribed variants. Most of the identified variants were classified as variants of uncertain significance (VUS), but the VUS rate did not significantly differ between patients and controls, except for the EGF gene, where VUS were found exclusively in patients. These findings suggest that most of these rare variants are not directly related to the studied phenotype, but rather reflect the genetic background of the Portuguese population. Regarding the oligogenic inheritance, a frequency of 6.2% was observed among patients (5/81), a statistically higher value compared to controls. The functional study of a variant identified in the CHD7 gene (NM_017780.4: c.4354G>T, p.Val1452Leu), increased the diagnostic rate to 30.9%, highlighting the importance of functional studies in reclassifying VUS. This work emphasized the genetic complexity of CHH, reinforcing the need for an indepth understanding of the disease to improve diagnosis, prognosis, genetic counseling, and treatment, as well as to clarify the biological processes that may contribute to the development of targeted therapies in the future.Este trabalho foi financiado pela Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) através da Bolsa de Doutoramento 2020.04924.BD e dos projetos PTDC/SAUGMG/098419/2008, UIDB/00709/2020 (https://doi.org/10.54499/UIDB/00709/2020), CEECINST/00016/2021/CP2828/ CT0002 (https://doi.org/10.54499/CEECINST/00016/2021/CP2828/CT0002) e pelo Sidra Medicine, um membro da Qatar Foundation, SDR400038

Relatório de Estágio Pedagógico

O ensino da Ciência nas escolas desempenha um papel crucial na formação dos alunos, permitindo o desenvolvimento de competências fundamentais, tais como pensamento crítico e raciocínio lógico, estimula a curiosidade e a criatividade, promove a compreensão do mundo natural e prepara os alunos para enfrentar os desafios do futuro, uma vez que vivemos numa sociedade cada vez mais baseada na ciência e na tecnologia. No presente estudo investigativo, foram utilizadas metodologias ativas, nomeadamente, uma atividade laboratorial prática e a realização de uma palestra, no âmbito de abordagem Ciência-Tecnologia-Sociedade-Ambiente em ensino não formal, numa turma do 10º ano de escolaridade, na temática da Nanotecnologia. A atividade prática em ensino não formal, realizada num laboratório de investigação, da Universidade da Beira Interior, além de permitir o envolvimento dos alunos no processo ensino-aprendizagem, tem o objetivo principal de incrementar a motivação dos alunos para a aprendizagem de Física e Química A. A análise das respostas aos questionários de escala de atitudes, permitiu verificar que os alunos estão interessados em participar em atividades de ensino não formal e que o envolvimento neste tipo de atividades, promove uma melhoria da motivação dos alunos para a aprendizagem de Física e Química. A narração de uma história e o uso de plataformas de tecnologia de informação e comunicação, nomeadamente vídeos e simulações, em ensino formal, na temática Tipos Fundamentais de Energia, na mesma turma, foram aplicados no presente trabalho investigativo, tendo a finalidade de promover a aquisição de conhecimentos científicos e a correção de preconceções na temática de Energia. Para essa avaliação foram aplicados questionários conceptuais, na turma de intervenção e numa turma de comparação. A análise dos questionários aplicados nas turmas permitiu verificar, que em termos gerais, a estratégia adotada na turma de intervenção permitiu uma maior eficiência.The teaching of science in schools plays a crucial role in the formation of students, allowing the development of fundamental skills, such as critical and logical thinking, stimulates curiosity and creativity, promotes an understanding of the natural World and prepares students to the challenges of the future, since the society increasingly based on science and technology. In the present investigative study, active methodologies were used, namely, a practical laboratory activity, in the area of Nanotechnology, in a research laboratory at the University of Beira Interior and a lecture made by a Chemistry researcher, also in the same area, within the scope of the Science-Technology-SocietyEnvironment approach in non-formal education. The practical activity in non-formal education, allowing the involvement of students in the teaching-learning process, with the main objective to increase student´s motivation to learn Physics and Chemistry and promote positive attitude towards science. The analysis of the responses to the attitudes scale procedures, allowing to verify that the students are interested in participating in non-formal education activities and the involvement in this type of activities, promotes an improvement of the students' motivation for the learning Physics and Chemistry. Storytelling and the use of information and communication technology platforms, namely videos and simulations, in formal education, on the theme Fundamental Types of Energy, in a 10th grade class, were also applied in the present investigative study, with the aims to promote the acquisition of scientific knowledge and to correct common misconception in the subject of Energy. For this evaluation, conceptual tests were applied in the intervention and comparison classroom. The analysis of the results allowed verifies that, in general, the strategy adopted in the intervention class allows greater efficiency

Impact of High Frequency repetitive Magnetic Stimulation on Astrocytes Subjected to Ischemia

Ischemic stroke (IS) is caused by the reduction or blockage of blood flow to the brain and is the third most common cause of death in Portugal. Due to its ability to improve the most frequent clinical sequelae left by brain ischemia, high-frequency repetitive transcranial magnetic stimulation (HF-rTMS) has been considered a promising therapeutic strategy for IS. The observed improvements have been associated with changes in neurons and their synaptic liaisons. However, the hypothesis that this technique modulates astrocytes, potentiating their neuroprotective capabilities, was also raised. With the present work, we aim to clarify which mechanisms triggered by highfrequency repetitive magnetic stimulation (HF-rMS) in astrocytes contribute to its neuroprotective effects. Neuron-glia and astrocyte cortical cultures subject to oxygen and glucose deprivation were used as an in vitro model of ischemia. Neuroprotection promoted by HF-rMS was evaluated through the analysis of markers of neuronal activity and morphometric analysis of neurons. The levels of growth factors in the astrocyteconditioned medium (CM) were assessed through a Growth Factor Array and glialderived neurotrophic factor (GDNF) expression was analyzed by RT-PCR and Western Blot. Our results show that neurons injured by ischemia can be rescued through the modulation of astrocytes by HF-rMS. This modulation helps to maintain the number and length of neurites and increases the number of neurons expressing c-Fos. Quantification of glutamate transporters EAAT1 and EAAT2 in astrocyte extracts showed that EAAT2 levels were not affected by HF-rMS, however, EAAT1 levels were increased in cultures subjected to OGD and HF-rMS, suggesting that HF-rMS neuroprotection may involve a reduction of excitotoxicity. Furthermore, analysis of the astrocyte CM showed that HFrMS stimulated the release of several trophic factors by astrocytes, namely GDNF. Neutralization of GDNF present in the CM impeded the recovery of neurite number and length induced by HF-rMS and blocked the increase of c-Fos+ neurons, indicating that this neurotrophic factor plays a crucial role in the neuronal recovery induced by HF-rMS. Our results show that modulation of astrocytes by HF-rMS effectively rescues neurons injured by ischemia by decreasing excitotoxicity and promoting neuroprotection through the release of GDNF by the astrocytes. This suggests that by targeting astrocytes, HF-rMS can be used to promote neuroprotection in other brain lesions.O acidente vascular cerebral isquémico (IS, do inglês ischemic stroke) é causado pela redução ou bloqueio do fluxo sanguíneo para o cérebro e é a terceira causa de morte mais comum em Portugal. A estimulação magnética transcraniana repetitiva de alta frequência (HF-rTMS, do inglês high-frequency repetitive transcranial magnetic stimulation) tem sido considerada uma estratégia terapêutica promissora para o IS, visto ter a capacidade de melhorar as sequelas mais frequentes causadas pela isquemia cerebral. As melhorias observadas têm sido associadas a alterações neuronais. Contudo, levantou-se a hipótese de esta técnica modular as astrócitos, potenciando as suas capacidades neuroprotetoras. Com o presente trabalho, pretendemos esclarecer quais os mecanismos desencadeados pela estimulação magnética repetitiva de alta frequência (HF-rMS, do inglês high-frequency repetitive magnetic stimulation) em astrócitos que contribuem para os seus efeitos neuroprotetores. Foi realizado um modelo in vitro de isquemia com culturas de astrócitos e culturas mistas de neurónios e astrócitos corticais sujeitas a privação de oxigénio e glicose (OGD, do inglês oxygen and glucose deprivation). A neuroprotecção promovida pela HF-rMS foi avaliada através da análise de marcadores de atividade neuronal e da análise morfométrica dos neurónios. Os níveis de fatores de crescimento no meio condicionado de astrócitos (CM, do inglês conditioned medium) foram avaliados através de um Array de fatores de crescimento e a expressão do fator neurotrófico derivado da glia (GDNF) foi analisada por RT-PCR e por Western Blot. Os nossos resultados mostram que a modulação dos astrócitos pela HF-rMS promove a recuperação neuronal após um insulto isquémico. Esta modulação ajuda a manter o número e o comprimento das neurites e aumenta o número de neurónios que expressam c-Fos. A avaliação dos níveis dos transportadores de glutamato EAAT1 e EAAT2 nos astrócitos mostrou que o EAAT2 não foi afetado pela HF-rMS, contudo, o EAAT1 aumentou em culturas sujeitas a OGD e HF-rMS, sugerindo que a neuroprotecção promovida pela HF-rMS pode envolver uma redução da excitotoxicidade. Além disso, a análise do CM de astrócitos mostrou que a HF-rMS estimulou a libertação de vários fatores tróficos pelos astrócitos, nomeadamente o GDNF. A neutralização do GDNF presente no CM de astrócitos impediu a recuperação do número de neurites e do seu comprimento induzido pela HF-rMS e diminuiu o número de neurónios c-Fos+, indicando que este fator neurotrófico desempenha um papel crucial na recuperação neuronal induzida pela HF-rMS. Em conjunto os resultados obtidos mostraram que a modulação de astrócitos pela HF-rMS é capaz de recuperar os neurónios lesionados pela isquemia, diminuindo a excitotoxicidade e promovendo a neuroprotecção através da libertação de GDNF pelos astrócitos. Esta observação sugere que, ao modular os astrócitos, a HF-rMS pode ser utilizada para promover a neuroprotecção em outras lesões cerebrais

Effects of short-chain fatty acids on Aliarcobacter butzleri’s virulence

Aliarcobacter butzleri has commonly been associated with diseases in both humans and animals and is therefore classified as a moderate hazard to human health. This bacterium may be found in various environments on a large scale, such as soils, waters and the food chain, being a major source of transmission and contamination. Moreover, it has been associated with diarrheal and non-diarrheal gastrointestinal diseases, whose main symptoms include abdominal pain, nausea and fever. Despite the research available on this microorganism, its response to host’s resistance colonization mechanisms remain underexplored. Short-chain fatty acids (SCFA) have been taken into study as mechanisms of resistance to colonization and are produced through the microbial fermentation of non-digestible carbohydrates in the intestine, being responsible for the maintenance of intestinal and metabolic health in humans. As SFCA are one of the multiple adverse conditions A. butzleri faces until it reaches its preferred colonization site, the intestine, this work aims to evaluate the effects of SCFA on the virulence and survival of this bacterium. Therefore, the bacterium’s growth, gene expression, motility, biofilm formation and adhesion and invasion abilities were evaluated with different types and concentrations of SCFA. The majority of the assays were conducted with eight A. butzleri isolates and, in general, lower concentrations showed no significant effect on bacterial growth, whereas the higher concentrations revealed an increase of the lag phase and/or growth inhibition, in a strain-dependent manner. Regarding the evaluation of putative virulence genes expression, it was observed an overexpression by most concentrations tested for the flaA and luxS genes. At a concentration of 130mM_SCFA, the ciaB gene also displayed an overexpression. The motility of most strains used in the study presented a decrease in this virulence factor. Also, the results of the biofilm formation of this bacterium showed a strain-dependence considering the concentration used. Furthermore, the SCFA tested appeared to affect the bacterium’s ability to adhere and invade the Caco-2 cell line, showing a trend to reduce these virulence features. Altogether, through the analysis of the results obtained from this study, it is noticeable that SCFA present a modulatory effect on A. butzleri’ survival and virulence, in a straindependent form. Regardless, it is possible to conclude that SCFA have an important role during the infection process, with the modulation of A. butzleri’ virulence being a point for further investigation.Aliarcobacter butzleri tem sido comumente associada a doenças prevalentes tanto em humanos como animais e como tal é classificado como um risco moderado para a saúde humana. A. butzleri pode ser encontrada em diversos ambientes, tais como solos, águas e até mesmo a cadeia alimentar, sendo esta uma grande fonte de transmissão e contaminação. Esta bactéria tem sido associada a doenças gastrointestinais diarreicas e não diarreicas, cujos principais sintomas podem incluir dores abdominais, náuseas e febre. Atualmente, diversos trabalhos abordam o potencial papel patogénico deste microrganismo, porém os seus mecanismos de virulência ainda não se encontram suficientemente explorados de modo a clarificar a sua patogenicidade, nomeadamente no que diz respeito à sua resposta aos mecanismos de resistência à colonização do hospedeiro. Os ácidos gordos de cadeia curta (AGCC) são ácidos gordos orgânicos produzidos pela fermentação microbiana de carboidratos não digeríveis no intestino, e são responsáveis por manter a saúde intestinal e metabólica do Homem, funcionando como mecanismo de resistência à colonização por agentes patogénicos. Considerando que para chegar ao seu local preferencial de colonização, o intestino, A. butzleri tem de ultrapassar diversas barreiras, sendo uma dessas os AGCC, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos dos AGCC na virulência e sobrevivência desta bactéria. Deste modo, para avaliar o comportamento das estirpes de A. butzleri, selecionadas para este estudo (n=8), na presença de AGCC, inicialmente foi realizada a análise de curvas de crescimento com uma duração de 48 horas, na presença e ausência destes compostos. Com isto foi possível verificar que os isolados são maioritariamente afetados pelas concentrações mais elevadas de AGCC, apresentando em geral um aumento da fase lag ou mesmo uma inibição de crescimento, em concentrações como 130 mM ou 172 mM de uma mistura de AGCC. No entanto, este comportamento parece ser dependente de estirpe. Para avaliar de que forma estes compostos podem influenciar os mecanismos de virulência de A. butzleri, procedeu-se seguidamente ao estudo da influência de AGCC na expressão dos genes putativos de virulência geralmente associados a fatores de virulência deste microrganismo (cadF, ciaB, flaA e luxS, associados às capacidades de adesão e invasão, motilidade e formação de biofilme). Para tal, usou-se a metodologia de transcrição reversa seguida de PCR em tempo real (RT-qPCR), através do qual se observou que quando na presença de concentrações de AGCC semelhantes às encontradas no intestino, a expressão de alguns genes sofre alteração, como flaA e luxS que mostraram ser sobre-expressos na presença da maioria das concentrações usadas. O mesmo comportamento foi verificado com ciaB na presença de 130 mM de AGCC, consequentemente sugerindo um possível efeito dos AGCC nos fatores de virulência da bactéria. A. butzleri é uma bactéria móvel com a presença de um flagelo na sua extremidade, e como tal a motilidade é um fator de virulência bastante importante. Assim, a motilidade bacteriana foi analisada pelo método de difusão em agar a 4 % na presença de AGCC, verificando-se uma diminuição da motilidade na presença das concentrações mais elevadas de AGCC, na maioria dos isolados testados. A capacidade de formação de biofilmes de A. butzleri é outro dos fatores bastante investigados, uma vez que este é responsável por aumentar a resistência da bactéria a fatores extrínsecos potencialmente prejudiciais à sua sobrevivência. O método de violeta de cristal em placas de 24 poços na presença de AGCC foi a metodologia selecionada para efetuar a avaliação desta capacidade. Os resultados mostraram um comportamento dependente da estirpe, onde os isolados de A. butzleri W12-1, DQ40A1 e INSA2756 foram afetados positivamente pelos AGCC, verificando-se um aumento da capacidade de formação de biofilme. Contrariamente ao verificado com os isolados anteriores, as estirpes INSA3800 e INSA4015 apresentaram uma redução na formação de biofilme na presença das concentrações de AGCC utilizadas. Por último, procedeu-se também à avaliação do efeito de A. butzleri sob a influência de AGCC em células de adenocarcinoma colorretal humano, Caco-2. Este estudo consistiu na realização de ensaios de adesão e invasão, onde a linha celular foi infetada pela bactéria em solução com os AGCC, com uma multiplicidade de infeção de 100. A estirpe representativa utilizada mostrou uma redução da capacidade de adesão e invasão na presença das concentrações de 90 e 130 mM das misturas de AGCC. Concluindo, é possível afirmar, através dos resultados obtidos, que A. butzleri é afetado pelos AGCC de forma dependente de estirpe, e que os AGCC apresentam um efeito modulatório na sua sobrevivência e virulência. Estes compostos, presentes ao longo do intestino, têm um papel importante durante o processo de infeção, podendo ser explorado na modulação da virulência A. butzleri

Modelização e análise de desempenho de geradores termoelétricos aplicados no aproveitamento da energia do corpo humano

O elevado custo de energia, a poluição ambiental e o aquecimento global são alguns dos grandes problemas que a humanidade tem enfrentado atualmente. Para minimizar, de alguma forma, estes problemas, os cientistas têm concentrado as suas atividades na procura de formas alternativas de obtenção de energia e de realizar a sua captura. O efeito termoelétrico converte energia térmica em eletricidade. Na Bioengenharia, é possível conceber aplicações com módulos termoelétricos que aproveitam a energia térmica do corpo humano para a converter em energia elétrica, que possam alimentar dispositivos microeletrónicos e sensores autónomos. Os desempenhos dos módulos termoelétricos dependem dos vários parâmetros. A correta avaliação e simulação desses desempenhos é fundamental tanto no seu desenvolvimento quanto na sua aplicação em sistemas completos.The high cost of energy, environmental pollution and global warming are among the major problems that the humanity is currently facing. To somehow minimize these problems, scientists have focused their activities on finding alternative ways of obtaining energy and harvesting it. The thermoelectric effect converts thermal energy into electricity. In Bioengineering, it is possible to design applications with thermoelectric modules that take advantage of the thermal energy of human body to convert it into electrical energy, which can be used to feed microelectronic devices and autonomous sensors. The performance of thermoelectric modules depends on the various parameters and its evaluation and simulation are fundamental in the development and in its application in complete systems

Estratégias de Marketing Digital no Turismo: Um Estudo sobre a Perspetiva do Consumidor Turístico

Que o turismo é uma das principais atividades que mais contribui para o crescimento e desenvolvimento de um país ou região, já não é novidade nos dias de hoje. Este é um setor que possibilita o progresso socioeconómico de determinado destino e que envolve os esforços de diversos operadores representativos de diversos outros setores, que entre si constroem relações negociais e contribuem mutuamente para o sucesso de ambas as áreas. O setor turístico é caracterizado pela sua forte conexão entre os seus operadores e os seus consumidores e esta ligação tem vindo a ser adaptada consoante as melhorias tecnológicas que se têm desenvolvido, sendo hoje em dia bastante influenciada por todo o meio digital que envolve a sociedade atual. Com as mais recentes transformações digitais, não só os setores se adaptaram como também os seus consumidores, que por sua vez se tornaram mais informados, exigentes e com um comportamento de compra mais digital, passando a utilizar meios digitais com mais frequências em todas as fases do seu processo de tomada de decisão e compra. Desta forma, o turismo reconheceu a oportunidade e começou cada vez mais a integrar as diversas plataformas digitais nas suas estratégias de negócio, nomeadamente nas suas estratégias de marketing. Através destas plataformas, os operadores turísticos conseguem se destacar da sua concorrência e conseguem obter um contacto mais direto com o seu público-alvo, o que lhes permite arrecadar informações sobre o perfil e comportamento deste, que serão essenciais para a definição de estratégias futuras. Perante este cenário, este estudo propõe-se a alcançar o objetivo geral de compreender qual a perspetiva dos consumidores turísticos, em relação às ferramentas e processos digitais que são utilizados pelos operadores turísticos. Para tal, a metodologia aplicada consistiu na difusão online de inquéritos, a indivíduos pertencentes às gerações Y e Z, residentes em território nacional, e através dos quais se obteve uma amostra de 251 respondentes. Através dos resultados obtidos foi possível concluir que o consumidor de turismo apresenta uma frequência de uso significativa de meios digitais e que se assistiu a um reconhecimento positivo do aumento das estratégias de marketing digital no setor do turismo, evidenciando deste modo a eficiência das ferramentas digitais aplicadas pelos operadores turísticos.That tourism is one of the main activities that contributes most to the growth and development of a country or region, is no longer something new these days. This is a sector that enables the socioeconomic progress of a given destination and that involves the efforts of several operators representing several other sectors, who build business relationships with each other and mutually contribute to the success of both areas. The tourism sector is characterized by its strong connection between its operators and its consumers and this connection has been adapted according to the technological improvements that have been developed, being nowadays greatly influenced by all the digital media that surround today's society. With the most recent digital transformations, not only the sectors have adapted but also their consumers, who in turn have become more informed, demanding and with a more digital purchasing behavior, starting to use digital media more frequently at all stages of their decision-making and purchasing process. In this way, tourism recognized the opportunity and increasingly began to integrate the various digital platforms into its business strategies, particularly its marketing strategies. Through these platforms, tour operators are able to stand out from their competition and gain more direct contact with their target audience, which allows them to gather information about their profile and behavior, which will be essential for defining future strategies. Given this scenario, this study aims to achieve the general objective of understanding what is the perspective of portuguese tourism consumers, regarding the digital tools and processes used by tourism operators. To this end, the methodology applied consisted of online dissemination of surveys to individuals belonging to generations Y and Z, residing in the national territory, and through which a sample of 251 respondents was obtained. Through the results obtained, it was possible to conclude that the tourist consumer has a significant frequency of use of digital media and that there has been a positive recognition of the increase in digital marketing strategies in the tourism sector, thus highlighting the efficiency of the digital tools applied by the tourism operators

Formulation and characterization of taxifolin delivery systems as an anti-Human Papillomavirus drug

Cancer is a leading cause of mortality worldwide, with over 19.3 million cases reported in 2020, resulting in approximately 10 million deaths. Various risk factors have been associated with the development of cancer, including age, genetic predisposition, ethnicity, environmental exposure, lifestyle, and infections caused by bacteria, parasites, or viruses. Human papillomavirus (HPV) is the primary causative agent of cervical cancer, which is the fourth most common cancer in women worldwide, responsible for over 340,000 deaths in 2020. This cancer is characterized by the overexpression of oncoproteins E6 and E7, which disrupt cell cycle regulation and proliferation, compromising the functions of tumor suppressor proteins p53 and pRb, respectively. Despite the availability of preventive HPV vaccines, their administration is not universally carried out. Consequently, efforts continue to develop effective therapies for this type of cancer to achieve a successful cure. In this regard, flavonoids have demonstrated remarkable therapeutic potential, offering an accessible and effective approach, allowing their use in less developed countries with limited healthcare resources. Taxifolin is a flavonoid with several anticancer properties, having shown particular relevance in cervical cancer therapy due to its ability to enhance the inhibition of oncoprotein E6, thereby increasing p53 expression and inducing apoptosis. However, the use of taxifolin is limited due to its very low aqueous solubility and low stability. Consequently, its poor bioavailability restricts its applications in cancer therapies. Thus, this master's dissertation aims to develop delivery systems for the encapsulation of taxifolin to improve its bioavailability and effectiveness in HPV-positive cells. To achieve this, various delivery systems consisting of chitosan, gelatin, and taxifolin were formulated. Initially, several ratios of systems composed solely of low molecular weight chitosan and gellan gum were tested. The most favourable ratio exhibited a size of 238.07 ± 31.18 nm, a PdI of 0.29 ± 0.08, and a zeta potential of +22.56 ± 2.83 mV and was chosen to proceed with the studies and attempt taxifolin encapsulation. For the incorporation of taxifolin into the delivery systems, various types of chitosan (5 kDa, low molecular weight, and high molecular weight) were tested at various taxifolin ratios. Systems composed of low molecular weight chitosan (LMW CH/GG/TAX) had a size of 276.23 ± 30.68 nm, a PdI of 0.36 ± 0.06, and a zeta potential of +30.80 ± 5.66 mV. Delivery systems formed by high molecular weight chitosan (HMW CH/GG/TAX) showed a size of 272.82 ± 53.58 nm, a PdI of 0.33 ± 0.10, and a zeta potential of +23.59 ± 5.94 mV, while systems composed of 5 kDa chitosan (5 kDa CH/GG/TAX) had a size of 249.00 ± 12.58 nm, a PdI of 0.35 ± 0.10, and a zeta potential of +17.35 ± 5.64 mV. Regarding encapsulation efficiency, LMW CH/GG/TAX exhibited an efficiency of 65%, while the remaining systems encapsulated only 55%. Scanning electron microscopy (SEM) was also performed for all formulated samples, and it was possible to observe that all systems exhibited a spherical and uniform morphology. In addition, Fourier-transform infrared spectroscopy (FTIR) and UV/vis spectroscopy were conducted to verify the presence and interactions of compounds in the delivery systems. Finally, in vitro release assays were performed at two different pH levels, one representative of the tumor microenvironment (pH 5.8) and one representative of physiological pH (pH 7.4). The results showed that HMW CH/GG/TAX systems released approximately 45% and 80% of taxifolin at pH 5.8 and pH 7.4, respectively. LMW CH/GG/TAX systems released 25% at pH 7.4 and approximately 70% at pH 5.8. The 5 kDa CH/GG/TAX systems released between 20% and 40% at the two different pH levels. Based on all the gathered information regarding the characterization of the delivery systems, only the most favourable formulation, LMW CH/GG/TAX, proceeded to cellular assays, where internalization assays were conducted on healthy cells and HPV-positive cells. The results demonstrated that the delivery systems were capable of internalizing into both cell lines; however, it is expected that they will solely exert an effect on HPV-positive cells due to their specific action against oncoprotein E6.O cancro representa uma das principais causas de mortalidade em todo o mundo, registando mais de 19,3 milhies de casos em 2020, resultando em aproximadamente 10 milhies de mortes. Diversos fatores de risco j· foram associados ao desenvolvimento de cancro, incluindo predisposiÁ„o genÈtica, estilos de vida, infeÁies provocadas por bactÈrias, parasitas ou vÌrus, etnia, exposiÁ„o ambiental e idadeO vÌrus do papiloma humano (HPV) È o principal agente causador de cancro do colo do ?tero, que, por sua vez, È o quarto cancro mais comum em mulheres em todo o mundo e respons·vel por mais de 340.000 mortes, apenas em 2020. Este tipo de cancro caracterizase pela excessiva express„o das oncoproteÌnas E6 e E7, que alteram a regulaÁ„o do ciclo celular e a sua proliferaÁ„o, comprometendo as funÁies das proteÌnas supressoras de tumores p53 e pRb, respetivamente. Encontram-se disponÌveis vacinas preventivas anti-HPV, no entanto, a sua administraÁ„o n„o È globalmente realizada. Consequentemente, permanecem em andamento esforÁos para o desenvolvimento de terapias eficazes destinadas para este tipo de cancro com o objetivo de se obter uma cura eficaz. Neste sentido, os flavonoides tÍm demonstrado um not·vel potencial terapÍutico, oferecendo uma abordagem acessÌvel e eficaz, permitindo a sua utilizaÁ„o em paÌses em desenvolvimento e onde, geralmente, os cuidados de sa?de s„o muito limitados. A taxifolina È um flavonoide com v·rias propriedades anticancerÌgenas, j· tendo mostrado particular relev‚ncia na terapia do cancro do colo do ?tero devido ao facto de potenciar a inibiÁ„o da oncoproteÌna E6, fazendo assim com que haja um aumento da express„o da p53, induzindo apoptose. Contudo, o uso da taxifolina È limitado devido ‡ sua baixa solubilidade aquosa e baixa estabilidade. Por conseguinte, a sua fraca biodisponibilidade limita as suas aplicaÁies em terapias do cancro. Desta forma, esta dissertaÁ„o de mestrado tem por objetivo desenvolver sistemas de entrega para a encapsulaÁ„o eficiente de taxifolina visando melhorar a sua biodisponibilidade e efeito em cÈlulas HPV positivas. Para isso, foram desenvolvidos v·rios sistemas de entrega, constituÌdos por quitosano, gelana e taxifolina. Primeiramente, foram testados v·rios r·cios de sistemas formulados apenas com quitosano de baixo peso molecular e gelana. O r·cio mais favor·vel apresentou um tamanho de 238,07 ± 31,18 nm, um PdI de 0,29 ± 0,08 e um potencial zeta de +22,56 ± 2,83 mV e foi o escolhido para prosseguir com os estudos e tentar a encapsulaÁ„o de taxifolina. Para a incorporaÁ„o de taxifolina nos sistemas de entrega, foram testados v·rios tipos de quitosano (5 kDa, baixo peso molecular e alto peso molecular) em v·rios r·cios de taxifolina. Os sistemas constituÌdos por quitosano de baixo peso molecular (LMW CH/GG/TAX) apresentaram um tamanho de 276,23 ± 30,68, um PdI de 0,36 ± 0,06 e um potencial zeta de +30,80 ± 5,66 mV. Por sua vez, os sistemas de entrega formados por quitosano de alto peso molecular (HMW CH/GG/TAX) mostraram um tamanho de 272,82 ± 53,58 nm, um PdI de 0,33 ± 0,10 e um potencial zeta de +23,59 ± 5,94 mV, enquanto os sistemas compostos por quitosano de 5 kDa (5 kDa CH/GG/TAX) apresentaram um tamanho de 249,00 ± 12,58 nm, um PdI de 0,35 ± 0,10 e um potencial zeta de +17,35 ± 5,64 mV. Relativamente ‡ eficiÍncia de encapsulaÁ„o de taxifolina, os sistemas LMW CH/GG/TAX apresentaram uma eficiÍncia de 65% enquanto os restantes sistemas apenas encapsularam 55%. Foi ainda realizada microscopia eletrÛnica de varrimento (SEM) ‡s amostras dos sistemas formulados e foi possÌvel verificar que todos os sistemas apresentaram forma esfÈrica e uniforme. AlÈm disso, foi tambÈm realizada espetroscopia de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e espetroscopia de UV/vis para verificar a presenÁa e interaÁies dos compostos presentes nos sistemas de entrega. Por fim, foram realizados ensaios de libertaÁ„o in vitro a 2 pHs diferentes, um representativo do microambiente tumoral (pH 5.8) e um representativo do pH fisiolÛgico (pH 7.4). Os resultados mostraram que os sistemas HMW CH/GG/TAX libertaram cerca de 45% e 80% de taxifolina a pH 5.8 e pH 7.4, respetivamente. Os sistemas LMW CH/GG/TAX libertaram 25% a pH 7.4 e cerca de 70% a pH 5.8. Os sistemas 5 kDa CH/GG/TAX libertaram entre 20% e 40% nos 2 diferentes pHs. Com base em toda a informaÁ„o obtida sobre a caracterizaÁ„o dos sistemas de entrega, apenas o mais favor·vel, a formulaÁ„o LMW CH/GG/TAX, prosseguiu para ensaios celulares, onde foi realizado ensaio de internalizaÁ„o em cÈlulas saud·veis e cÈlulas HPV positivas. Os resultados demonstraram que os sistemas de entrega foram capazes de internalizar nas duas linhas celulares, no entanto, È expect·vel que taxifolina apenas tenha efeito nas cÈlulas HPV positivas, devido ‡ aÁ„o especifica contra a oncoproteÌna E6

As tensões entre as perspetivas informativa e política da comunicação de risco e de crise: A comunicação das organizações públicas portuguesas sobre os incêndios florestais

Os incêndios florestais em Portugal fazem parte de problema global associado às mudanças climáticas que, nos últimos anos, têm aumentado a intensidade e a frequência de desastres naturais em todo o mundo. A comunicação de desastres naturais, contudo, envolve tensões entre dois propósitos distintos da comunicação das organizações públicas: a proteção da população versus a preservação da reputação. Nesse sentido, investigámos qual perspetiva – informativa ou política (Frandsen & Johansen, 2020d) – prevaleceu, ao nível da mensagem, na comunicação de risco e crise das organizações públicas nacionais portuguesas implicadas diretamente no enfrentamento aos incêndios florestais em 2017, 2018 e 2019. Para isso, desenvolvemos um modelo original a que denominámos Modelo Loop, composto por um loop de 12 meses com seis fases cronologicamente delimitadas que se repetem infinitamente: (1) Prevenção; (2) Preparação; (3) Alerta; (4) Socorro; (5) Recuperação; e (6) Avaliação. O nosso estudo empírico adotou uma abordagem que combinou métodos quantitativos e qualitativos na análise dos dados. Analisámos o conteúdo (Bardin, 2014) de 1.151 mensagens emitidas por 10 organizações públicas conforme 10 variáveis do Modelo Loop. Também verificámos a presença ou a ausência dos 13 fatores que formam o Indicador da Qualidade Informativa em Incêndios Florestais (IQI-IF), um indicador agregado de análise multivariada que nos permitiu avaliar objetivamente a qualidade informativa, relacionada com a perspetiva informativa da comunicação de risco e crise, das mensagens emitidas em cada fase do Modelo Loop. A nossa principal conclusão foi que a comunicação dos incêndios florestais oscilou entre as perspetivas informativa e política, com marcada predominância da perspetiva informativa, exceto na fase Prevenção, que apresentou o IQI-IF negativo nos três anos analisados.Forest fires in Portugal are part of a global problem associated with climate change, which in recent years has intensified the frequency and severity of natural disasters worldwide. Natural disasters communication, however, involves tensions between two distinct purposes in the communication of the public organisations: protecting the public versus preserving reputation. In this regard, we investigated which perspective – informational or political (Frandsen & Johansen, 2020d) – prevailed in the messaging of risk and crisis communication by Portuguese national public organisations directly engaged in tackling forest fires in 2017, 2018, and 2019. To achieve this, we developed an original model called the Loop Model, which comprises a 12-month loop with six chronologically defined phases that repeat indefinitely: (1) Prevention; (2) Preparation; (3) Alert; (4) Rescue; (5) Recovery; and (6) Evaluation. Our empirical study adopted a mixed-methods approach, combining quantitative and qualitative analyses of the data. We conducted a content analysis (Bardin, 2014) of 1,151 messages issued by 10 public organisations according to 10 variables in the Loop Model. We also examined the presence or absence of the 13 factors that constitute the Informational Quality Indicator for Forest Fires (IQI-FF), a composite multivariate analysis indicator that allowed us to objectively evaluate the informational quality, related to the informational perspective in risk and crisis communication, within the messages issued at each phase of the Loop Model. Our main conclusion was that forest fires communication fluctuated between the informational and political perspectives, with a marked predominance of the informational perspective, except in the Prevention phase, which showed a negative IQI-IF across the three years analysed

Crisis Communication and Image Management: The Strategic Role of Social Media for Destination Management Organizations in a Crisis Context

The COVID-19 pandemic has presented unprecedented challenges to tourism destination managers, underscoring the critical relevance and impact of crises triggered by disasters on the tourism industry. In times of crisis, a destination’s image can be severely compromised, leading to a slowdown in the local economy and the disruption of commercial activities, resulting in a reduction in tourist flows and revenue. These disruptions emphasize the urgent need for contemporary strategies aimed at safeguarding the image of tourism destinations, restoring visitor confidence, and mitigating the perceived risk associated with the destination. Social media has emerged as an essential tool for crisis response and recovery, establishing itself as a crucial dialogical space between organizations and consumers. However, a gap in the literature persists concerning the integration of social media use by Destination Management Organizations (DMOs) to project the image of destinations, promote their brands, and reposition themselves in the market during periods of uncertainty. In this context, the present thesis seeks to explore the strategic role of social media for DMOs during crises in the tourism industry, with the COVID-19 pandemic as a research setting. To achieve this, the following specific objectives are defined: (i) to assess the existing literature on the use of social media in tourism during crises and explore the implications of these practices; (ii) to investigate the communication tactics and image management strategies adopted by DMOs across different social media platforms; (iii) to analyze the behavior of the digital audience in response to the communication strategies implemented by DMOs in crisis contexts; and (iv) to explore the image of destinations projected on social media throughout the various phases of a long-term crisis. To achieve these objectives, the study analyzed the official social media accounts of DMOs in Brazil and Portugal across three digital platforms (Facebook, Instagram, and Twitter) from 2020 to 2021. The study is organized into four principal sections: First, a systematic review of the literature on social media usage in crisis contexts within tourism was conducted, encompassing 70 peer-reviewed articles. Second, a content analysis model was developed to examine the messages published by DMOs, allowing for the identification, analysis, and comparison of crisis management and communication strategies. Third, sentiment analysis of user comments was performed to evaluate public perceptions of the organizations' communication. Finally, a visual content analysis of the DMOs' posts was conducted, focusing on the pandemic phases (pre-, during, and post-lockdown). The findings reveal that the Portuguese DMO exhibited significantly higher social media activity compared to its Brazilian counterpart, highlighting two distinct approaches to destination image management during the crisis, as evidenced by strategies, content, and user behavior. Notably, Instagram proved particularly effective in delivering promotional and emotionally resonant content. The main contributions of the thesis include (i) a conceptual framework outlining seven social media mechanisms for managing crises in tourism, (ii) a model for assessing the effectiveness of communication and image recovery strategies, (iii) insights into user engagement patterns and sentiments, demonstrating Instagram's effectiveness in managing destination image and the positive impact of engaging and inspirational content, and (iv) an analysis of Portugal’s social media image projection, indicating increased engagement during lockdown periods and emphasizing the importance of aligning content with the destination’s identity. This thesis provides valuable guidance for both academics and practitioners, offering practical frameworks and recommendations to enhance social media strategies and maintain brand visibility during crises.A pandemia de COVID-19 impôs desafios sem precedentes aos gestores de destinos turísticos, evidenciando a relevância e o impacto das crises provocadas por catástrofes na indústria do turismo. Em momentos de crise, a imagem de um destino pode ser gravemente comprometida, levando a uma desaceleração da economia local e à interrupção das atividades comerciais, o que resulta numa redução do fluxo turístico e das receitas geradas. Estas disrupções sublinham a necessidade urgente de estratégias contemporâneas por parte dos gestores de destinos, com o objetivo de salvaguardar a imagem dos locais turísticos, restaurar a confiança dos visitantes e minimizar a perceção de risco associada ao destino. As redes sociais afirmaram-se como uma ferramenta essencial na resposta e recuperação de crises, consolidando-se como um espaço dialógico crucial entre organizações e consumidores. No entanto, existe uma lacuna na literatura no que se refere à integração do uso de redes sociais pelas Organizações de Gestão de Destinos (OGDs) para a projeção da imagem dos destinos, promoção das suas marcas e reposicionamento no mercado durante períodos de incerteza. Neste contexto, a presente tese tem como objetivo explorar o papel estratégico das redes sociais para as OGDs durante crises na indústria do turismo, tendo por cenário de trabalho a COVID-19. Para tal, delineiam-se os seguintes objetivos específicos: (i) avaliar a literatura existente sobre a utilização do social media no turismo em períodos de crise e explorar as implicações dessas práticas; (ii) investigar as estratégias de comunicação e gestão de imagem adotadas pelas OGDs em diferentes plataformas de social media; (iii) analisar o comportamento do público digital face às estratégias de comunicação implementadas pelas OGDs em contextos de crise; e (iv) explorar a imagem dos destinos projetada no social media ao longo das diferentes fases de uma crise de longo prazo. Para alcançar esses objetivos, foram analisadas as contas oficiais das OGDs do Brasil e de Portugal em três plataformas digitais (Facebook, Instagram e Twitter) durante os anos de 2020 e 2021. O estudo é estruturado em quatro partes principais: inicialmente, uma revisão sistemática da literatura abordando o uso das mídias sociais em contextos de crise no turismo foi realizada, cobrindo 70 artigos revisados por pares. Em seguida, foi desenvolvido um modelo de análise de conteúdo para as mensagens publicadas pelas OGDs para identificar, analisar e comparar as estratégias de gestão e comunicação de crise. O terceiro estudo envolveu uma análise de sentimentos dos comentários dos usuários para avaliar a percepção do público em relação à comunicação das organizações. Finalmente, foi conduzida uma análise do conteúdo visual publicado pelas OGDs, considerando as fases da pandemia (antes, durante e após o isolamento). Os resultados indicam que a organização portuguesa apresentou uma atividade significativamente maior no social media em comparação com a organização brasileira, revelando duas abordagens distintas na gestão da imagem dos destinos durante a crise, refletidas nas estratégias e nos conteúdos publicados, bem como no comportamento dos usuários. Destaca-se que o Instagram foi particularmente eficaz para a comunicação com conteúdo promocional e emocional durante a crise. As principais contribuições da tese incluem: (i) um framework conceitual detalhando sete mecanismos de social media essenciais para a gestão de crises no turismo; (ii) um modelo para avaliar a eficácia das estratégias de comunicação e recuperação de imagem durante crises; (iii) insights sobre padrões de engajamento e sentimentos dos usuários, evidenciando a eficácia do Instagram na gestão da imagem do destino e o impacto positivo de conteúdos envolventes e inspiradores; e (iv) uma análise da projeção da imagem de social media de Portugal, que revela maior engajamento durante os períodos de bloqueio e ressalta a importância de alinhar o conteúdo com a identidade do destino. A tese oferece diretrizes valiosas para acadêmicos e profissionais, proporcionando estruturas práticas e recomendações para aprimorar as estratégias de social media e manter a visibilidade da marca durante crises