Protease halofil dapat dimanfaatkan pada proses fermentasi makanan seperti pada pembuatan kecap ikan. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh bakteri halofilik dari isolat bittern tambak garam Madura dan mengisolasi protease halofil ekstraseluler serta menentukan pengaruh konsentrasi NaCl terhadap aktivitas spesifik protease halofil. Bakteri halofilik ditumbuhkan pada media HSB (Halophlie Synthetic Broth). Penentuan aktivitas protease dilakukan dengan menggunakan substrat azokasein dan kadar protein diukur dengan menggunakan metode Lowry. Berdasarkan penelitian diperoleh bakteri halofilik isolat bittern tambak garam Madura yang tumbuh optimal pada konsentrasi NaCl 4 %(b/v), dengan aktivitas spesifik protease halofil ekstraseluler tertinggi pada fraksi 4 (60-80 %) sebesar 58,537 Unit/mg protein. Adanya penambahan garam NaCl akan meningkatkan aktivitas protease halofil. Pada penelitian ini, aktivitas spesifik protease halofil meningkat menjadi 113,78 Unit/mg protein dengan konsentrasi optimal NaCl 0,750 M