Objetivou-se com este trabalho comparar o potencial de obtenção de propágulos de tamareira via embriogênese somática nas variedades Medjool, Zahidi, Deglet Nour, Khadrawy e Halawy, utilizando meio de cultura definido e em interação com luz vermelh

DAMIÃO FILHO, C. F.

NUNES, R. F. de M.

ROCHA, A. M. M. R.

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Embriogênese Somática em TamareiraRegina Ferro de Melo Nunes1,  Carlos Ferreira Damião Filho2 eAdália Maria Monteiro Rodrigues Rocha3IntroduçãoA tamareira  Phoenix  dactilifera L.  é  uma  palmeira  do  gênero  Phoenix,  que  pode  serpropagada de diversas formas:  por sementes,  rebentos,  gemas e por cultivo  in  vitro de seustecidos.A propagação  por  cultura  de  tecidos  apresenta  algumas  vantagens  em  relação  aosmétodos convencionais de propagação tais como: a) rapidez e aumento na taxa de multiplicação,b)eliminação de pragas e doenças e auxiliando no melhoramento  genético das espécies.  Emtamareira,  Bhansali  &  Kaul  (1991),  verificaram  que  dentre  os  métodos  de  cultivo  in  vitro,  aembriogênese somática tem proporcionado bons resultados quanto a regeneração de plântulas,tornando-se o método mais freqüentemente utilizado para essa palmeira. Embriogênese somáticaé  o  processo  de  desenvolvimento  de  embriões  a  partir  de  células  somáticas,  podendo  serrealizado de maneira direta, na qual os embriões se originam diretamente dos tecidos, sem aproliferação  do  calo  e  indireta  quando  o  calo  é  formado,  mantido  e  proliferado  antes  dodesenvolvimento dos embriões. Em ambos os casos o meio de cultura é um fator determinante,onde a presença de auxinas em concentrações variadas, funciona como o indutor da formaçãodos embriões somáticos. Dentre as auxinas, o ácido 2,4 – Diclorofenoxiacético (2,4-D) segundoAl-Salih  et  al.  (1987) tem promovido em tamareira a indução de embriões somáticos,  quandoutilizado  em  concentrações  variando  de  10  a  100  mg/l.  Comparando-se  com  o  ácidoNaftalenoácetico (NAA), o 2,4-D tem mais implicação na freqüência de anormalidades. Na cultivarde tamareira Deglet Nour, baixas doses de 2,4-D (1,0 mg/l) e de NAA (10 mg/l) foram suficientespara induzirem calos embriogênicos (Falcone & Marcheschi ,1988). Normalmente no processopropagativo in vitro, qualquer parte da planta pode ser utilizada como explante, Nazeri  et  al.  (1993)  obtiveram a formação de embrióides  de tamareira nas variedades“Estamaram” e  “Kabkab”  utilizando extremidades de caules,  gemas laterais  e  parte  de folhasjovens  quando  cultivaram  sobre  meio  de  Murashige  e  Skoog  (1962).  Matter  (1986)  obteveembrióides  nas  cultivares  de  tamareira  Barhee  e  Hallawy  utilizando  ápices  meristemáticoscultivados em meio de Murashige e Skook (1962) com as auxinas NAA e 2,4-D.Na cv. Khadrawi, Sharma et al (1984) obtiveram embrióides e plantas viáveis a partir decalos de gemas auxiliares e extremidade de ápices caulinares._1Eng. Agr. Ph.D. Pesquisador da Embrapa Semi-Árido, Caixa Postal 23, 56300-000, Petrolina-PE;2Eng. Agr. Ph.D. Professor da FCAVJ – Departamento de Biologia Aplicada a Agropecuária.3 Eng.Agr. M.Sc. Pesquisador da EBDA – Juazeiro-BA, E-mail: ebdajua@lkn.com.brA embriogênese somática é influenciada pelo tipo de luz incidente na cultura. Calero et al(1990), estudaram os efeitos da luz vermelha, azul e branca em explantes de tamareira cultivadossobre o meio de Shenck & Hildebrant (1972) e verificaram que a luz vermelha, isoladamente foiefetiva nesse processo, quando comparada com os efeitos da luz azul, branca e do escuro. Objetivou-se  com  este  trabalho  comparar  o  potencial  de  obtenção  de  propágulos  detamareira via embriogênese somática nas variedades Medjool, Zahidi, Deglet Nour, Khadrawy eHalawy, utilizando meio de cultura definido e em interação com luz vermelha.Material e MétodosO experimento foi conduzido inicialmente no Laboratório de Cultura de Tecidos de Plantasdo Departamento de Biologia Aplicada a Agropecuária e, numa Segunda etapa, em condições deripado,  na  Fazenda  Experimental  de  Horticultura,  ambos  departamentos  da  Faculdade  deCiências Agrárias e Veterinárias de Jaboticabal – UNESP.Utilizou-se como explantes sementesdas cinco variedades de tamareira,( Medjool, Zahidi, Deglet Nour, Khadrawy e Halawy) indicadascomo mais importantes e de cultivo disperso mundialmente. As sementes foram obtidas de frutosmaduros,  lavadas  em  água  corrente  e  secadas  à  sombra.  As  mesmas  foram  adquiridas  naEmbrapa – Semi-Árido em Petrolina-PE.Foram obtidas 50 plântulas, de cada variedade, utilizando o processo descrito por Tisserat(1982).  Tais  plântulas  foram  fontes  de  explantes,  constituídos  pelos  embrióforos  (“bainhas”cotiledonares). Estes foram excisados na sua porção terminal em pedaços de aproximadamente0,5  cm  de  comprimento,  contendo  o  eixo  embrionário  ou  parte  dele.  Os  explantes  foramesterilizados superficialmente com a imersão em solução aquosa de etanol a 70%, com enxágüesem água destilada e,  posteriormente  imersos (sob agitação contínua)  em solução aquosa dealvejante comercial clorado a 20%, durante 10 minutos. Na câmara asséptica, foram enxaguadoscom água esterilizada, e inoculados individualmente no meio da cultura Schenck & Hildebrandt(1972)  suplementado  com 1,0  mg/L de  2,4-D;  0,1  mg/L de  benziladenina  (BA)  e  10  g/L desacarose. O meio foi semi solidificado com ágar (0,8% p/v) e o pH ajustado para 5,8 antes daautoclavagem. Distribuiu-se alíquotas de 10 ml do meio de cultura em tubos de vidro esterilizados.Para cada variedade, foram feitas 50 repetições (50 tubos de cultura) mantendo-se tal número porsubstituição dos frascos eventualmente contaminados.Após a incubação, os explantes foram imediatamente submetidos a luz vermelha (655 + 20nm).Como fonte de luz foram utilizadas três lâmpadas do tipo GRO-lux (que emitem 39,92% nafaixa do vermelho, 630-700nm), montadas em caixa provida de janela. Tal janela foi coberta porcamadas  de  papel  celofane  vermelho,  em  número  suficiente  para  aumentar  e  selecionar  aemissão de luz na faixa do vermelho, em 655nm. Para determinação da luz emitida, foi utilizadoum quantômetro (sensor de quantum), marca QSPAR, da Hansatech, específico para a região dovermelho.  O  tratamento  com  luz  vermelha  foi  fornecido  durante  duas  semanas.  Após  esseperíodo, os calos obtidos dos explantes, foram transferidos para o meio de cultura de Murashide &Skoog  (1962),  sem  reguladores  de  crescimento,  para  indução  dos  embriões  somáticos.  Taisculturas foram mantidas sob luz (3000 lux), com fotoperíodo de 16 horas, a 28 + 2oC, por duas atrês semanas. Os embriões somáticos, foram transferidos para novo meio de cultura de Murashide& Skoog (1962) suplementado com 2  mg/L de cada um dos reguladores de crescimento:  NAA;ácido naftoxiacético (NOA) e BA, objetivando a formação de plântulas com raízes e caules a partirdos embrióides . Após três semanas nesse meio, as plântulas foram submetidas à aclimatação,com o aumento da temperatura de 28oC para 32oC. Em seguida foram removidas dos tubos decultura, lavadas em água corrente e tratadas por meio minuto com carbendazim (0,2%) e comestreptomicina  (0,1%),  e  novamente  enxaguadas  com  água  destilada.  Antes  do  plantio  emembalagens plásticas  (30x15x10cm),  contendo  mistura  de terra,  areia  e  matéria  orgânica,  naproporção  de  1:1:1,  previamente  esterilizada,  manteve-se  as  plantas  em  condições  de  altaumidade  (70-90%),  cobrindo-se  as  embalagens  com  sacos  plásticos.  Após  dois  meses,  nacondição  ex  vitro,  as  plantas  foram  transferidas  para  o  campo.  O  delineamento  utilizado  foiinteiramente  casualizado  em parcelas  subdivididas  no “tempo”  tendo  como parcelas  as  cincovariedades  de  tamareira  estudadas  e  como  subparcelas  os  oito  tempos  de  germinação.Osparâmetros  de  avaliação  foram:  porcentagem  de  germinação  e  comprimento  do  embrióforoapresentados na Tabela 1.Resultados e DiscussãoPara a  percentagem de germinação  não  houve interação significativa  entre  os  fatoresanalisados  variedades  X  tempo  de  germinação.  Entretanto,  houve  diferença  significativa  napercentagem  de  germinação  para  as  diferentes  variedades  sendo  a  cultivar  Zahidi  a  queapresentou  menor  percentagem  (Tabela  1).  Observações  semelhantes  foram  registradas  porTisserat (1979 a) e Nasir et al. (1994) com essas mesmas variedades.Com relação ao número de raízes secundárias  a variedade Medjool apresentou o melhorresultado, porém quanto ao comprimento dessas raízes a cultivar Deglet Nour mostrou-se superiornão diferindo estatisticamente da Medjool e Zahidi (Tabela 2), estes resultados evidenciaram queestas variedades são importantes ao trabalho de multiplicação da tamareira e estão de acordocom Rhiss et al. (1979).Tabela 1. Porcentagem de germinação e comprimento do embrióforo em variedades de  tamareira. Jaboticabal-SP, 1999.+ Médias seguidas da mesma letra, nas colunas, não diferem entre si pelo teste de Tukey, ao nível de 5%de probabilidade.A análise estatística revelou diferença entre as variedades quanto ao número de raízes noprocesso de multiplicação in vitro(Tabela 2). Quanto maior o tempo que permanece no cultivo hámaior comprimento de raízes, porém o número de folhas não alterou. Estes resultados corroboramafirmações feitas por Duarte (1982) e Pierik (1990) que encontraram alto número de raízes emvariedades cultivadas em um período de mais tempo de cultivo in vitro.VariedadesGerminação(%)Comprimento do embrióforo(cm)Medjool 70,7 a 13,55 bZahidi 43,0 b 13,11 bDeglet Nour 70,6 a   13,69 abKdadrawy 53,4ab 14,72 aHalawy 50,0ab 14,54 aTabela 2. Número médio de raízes secundárias (NRS), comprimento de raiz primária, (CRP) comprimento de raizes secundária (CRS) e número e comprimento de folhas (NF e CF) de tamareira, Jaboticabal-SP, 1999. Variedades    NRS          CRP       CRS            NF          CFMedjool 2,28 a+ 4,90 ab 24,30ab 1,28 a 11,65 aZahidi 1,60 b 3,87 b 22,17ab 1,19 a 9,95 acDeglet Nour 1,92 b 4,10 b 26,55 a 1,20 a 10,80abKdadrawy 1,58 b 5,75 a 21,28 b 1,19 a 9,45 cHalawy 1,83 b 3,95 b 20,55 b 1,22 a 9,40 c+ Médias seguidas da mesma letra, nas colunas, não diferem entre si pelo teste de Tukey, ao nível de 5%de probabilidade.Não houve diferença significativa para o número de folhas entre as variedades (Tabela 2),Porém elas diferiram quanto ao comprimento de folha.  A variedade Medjool apresentou maiorcomprimento porém não diferiu da Deglet Nour. Quanto ao comprimento de raízes primárias esecundárias  as  variedade  Khadrawy  e  Deglet  Nour  apresentaram  os  maiores  comprimentos(Tabela 2). ConclusõesAs variedades Medjool e Deglet Nour apresentaram maiores percentuais de germinação. Opoder germinativo das sementes foi praticamente acima de 50%. A maior parte das variedades de tamareira estudadas mostraram-se aptas para a formaçãode mudas “in vitro”, com destaque para Medjool e Deglet Nour. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICASAL-SALIH, A.A., BADER, S.M., JARRAH, A.Z., AL-DADI, M.T. A comparative morphological and anatomical study of seed embryo culture derived seedling of Phoenix dactylifera L. Date Palm Journal, Baghdad, v.4, n.2, p.137-52, 1987.BHANSALI, R.R.;  KAUL, R.K. Into future: date through tissue culture. Indian Horticulture, New Delhi, v.36, n.3, p.6-10, 1991.CALERO, N.; BLANC, A.; BENDADIS, A. Effects conjugués de la BAP e de la lumiére rouge sur l’embryogénese somatique dans des gaines cotyledonaires de palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) en culture “in vitro”. Bulletin de la Societé Botanique de France, Lettres Botaniques, Paris, v.137, n.1, p.13-19, 1990. FALCONE, A.M.;  MARCHESCHI. G.L. Embriogenini somatica “in vitro” da tessuti de palma de datters (Phoenix dactylifera L.) resultati peliminari. 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Embriogênese somática em tamareira.

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Embriogênese somática em tamareira.

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