ALVES, S. A. O.

CARDOSO, J. de N. O.

CORDEIRO, I. M. C. C.

LAMEIRA, O. A.

REIS, I. N. R. de S.

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         Introdução  O paricá (Schizolobium parahyba var amazonicum (Huber ex Ducke) Barneby) ocorre em floresta primária e secundária de terra firme, de crescimento extremamente rápido [1]. De acordo com Melo [2], a espécie pode fornecer boa matéria-prima para a obtenção de celulose para papel, com fácil branqueamento e excelente resistência obtida com o papel branqueado. Segundo Falesi & Santos [3], a cultura do paricá vem despertando interesse entre produtores rurais e madeireiros devido ao valor comercial da madeira para a produção de laminados de excelente qualidade, como também pelo crescimento rápido da espécie, principalmente nos primeiros anos. De acordo com Mantell et al. [4], calos são definidos como tecidos constituídos por células não diferenciadas, que se desenvolvem como resposta a uma lesão química ou física sob determinadas condições hormonais. Os calos podem ser obtidos a partir de um fragmento de tecido de determinada planta e possuem a capacidade de se diferenciar em tecidos, órgãos e até embriões, podendo regenerar plantas inteiras [5, 6, 7]. Nem todas as células em um explante contribuem para a formação de calos, no entanto, o mais importante é que existem certos tipos de células de calos que são competentes para regenerar estruturas organizadas, enquanto outros tipos de células não parecem ser competentes para expressar a totipotencialidade [8]. O presente trabalho teve como objetivo induzir calos em segmentos nodais e cotiledonares em paricá, na presença de 2,4-D.  Material e métodos   Como fontes de explante foram utilizadas plântulas germinadas in vitro  com 20 dias de cultivo. Os tratamentos testados foram constituídos de 4 concentrações de 2,4-D (0, 2, 4 e 6 mg.L-1) e 2 fontes de explante (segmento nodal – SN e segmento cotiledonar – SC). Os segmentos nodais , medindo em torno de 0,5 cm, foram inoculados na posição horizontal, enquanto que segmentos cotiledonares de aproximadamente 0,5 cm2 foram inoculados com a superfície adaxial voltada para o meio de cultivo. Ambos os explantes foram inoculados em frascos contendo 40 mL de meio de cultura básico MS [9] com as concentrações de NH4NO3 e Fe-EDTA reduzidas a metade (demais componentes em suas concentrações normais), sacarose (3%), ágar (0,6%), pH 5,8, e suplementado com o antioxidante ácido cítrico (0,1%), na presença ou ausência de 2,4-D, e mantidos no escuro em sala de crescimento sob temperatura de 24 ± 1ºC. O delineamento experimental adotado foi inteiramente casualizado, em arranjo fatorial 4 x 2 (4 concentrações de 2,4-D e 2 fontes de explante), com 4 repetições, totalizando 32 unidades experimentais, sendo que cada parcela foi constituída por um frasco contendo 3 explantes. Aos 20 dias após a instalação do experimento, avaliaram-se o percentual de explantes com calos; área dos explantes cobertas por calos, levando em consideração as seguintes notas: 1, 2, 3 e 4 para os explantes que apresentavam, respectivamente, 25, 50, 75 e 100% da área coberta com calos; a textura (friável ou compacta); coloração dos calos e oxidação. Os dados foram submetidos a análise de variância e quando efeito significativo, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey ao nível de 5% de probabilidade através do programa estatístico Sisvar. Para a análise estatística, os dados de percentual de explantes com calos foram transformados para arcsen (X/100)½.  Resultados e Discussão   A formação de calos iniciou-se a partir de décimo dia de cultivo nos dois explantes. Conforme a Figura 1, não houve indução de calos em segmentos cotiledonares na ausência de reguladores de crescimento, enquanto que 90% dos segmentos nodais formaram calos sob essa mesma condição.    ________________ 1. Mestre em Agronomia, Universidade Federal Rural da Amazônia.  Av. Tancredo Neves, 2501, Montese, Belém-PA, CEP 66077-530. Bolsista CAPES. E-mail: naiff_agro@yahoo.com.br. 2. Orientador/Pesquisador, Dr. da Embrapa Amazônia Oriental. Trav. Dr. Enéas Pinheiro s/nº, Caixa Postal 48, Belém-PA, CEP 66095-100. 3. Doutoranda em Sistemas Agroflorestais. Universidade Federal Rural da Amazônia. Av. Tancredo Neves, 2501, Belém-PA, CEP 66077-530. 4. Graduanda do 8º semestre de Agronomia. Universidade Federal Rural da Amazônia. Av. Tancredo Neves, 2501, Montese, Belém-PA, CEP 66077-530.  5. Mestre em Botância Tropical, Museu Emílio Goeldi. Av. Tancredo Neves, 1901, Terra Firme, Belém-PA, CEP 66077-530.Efeito do 2,4-D na Indução de Calos em Paricá a Partir de Segmentos Nodais e Cotiledonares  Iulla Naiff Rabelo de Souza Reis1, Osmar Alves Lameira2, Iracema Maria Castro Coimbra Cordeiro3, Joseane de Nazaré Oliveira Cardoso4, Sérgio Augusto Oliveira Alves5 Essa diferença de resposta entre explantes extraídos da mesma planta é justificada pelo fato de que segmentos nodais  apresentam maior atividade meristemática em relação aos cotilédones, que contêm maior número de células diferenciadas. Lima [10] não verificou formação de calos em sangra d’água (Croton urucurana Baill) na ausência de 2,4-D, enquanto que Mesquita [11] constatou que na ausência de reguladores de crescimento, 35%  dos explantes foliares lechieira (Litchi chinensis Sonn.) formaram calos. Segundo Watt [12], a indução de calos de Eucalyptus foi obtida em meio MS com concentrações de 1 a 5 mg.L-1 de 2,4-D, na ausência de luz. Nos estudos de Santos [13] sobre Coffea arabica e Coffea canephora  verificou-se que para os explantes nodais, a produção de calos não apresentou diferença significativa nas diferentes concentrações de 2,4-D utilizadas (0; 0,5 e 1 mg.L-1). Na investigação de Goleniowski et al. [14] com Ambrosia tenuifolia , observaram que concentrações de 2,4-D em meio de cultura entre 0,02 e 2 mg.L-1 resultaram em boa produção de calos, e doses mais elevadas foram menos eficientes. Rodrigues [15] induziu calos em diversos tipos de explantes (segmentos nodais, ápices, discos foliares, epicólitos e cotilédones) de cupuaçu (Theobroma grandiflorum Wildenow wx. Sprengel) e verificou que os cotilédones foram os mais responsivos à formação de calos na presença de 2,4-D. A concentração de 6 mg.L-1 de 2,4-D proporcionou maior cobertura por calos (71%), diferindo estatisticamente dos demais tratamentos. Em relação aos segmentos cotiledonares não foi observada diferença significativa entre os tratamentos em que houve suplementação de 2,4-D (Figura 2). De acordo com a Figura 2, segmentos nodais  apresentaram maior área coberta por calos em todas as concentrações de 2,4-D estudadas, sendo significativamente superiores aos segmentos cotiledonares. Mesquita [11] constatou que na concentração de 4 mg.L-1 de 2,4-D a quantidade de calos formada foi bastante reduzida em lechieira, e que a ocorrência de calos com maior volume foi obtida quando se utilizou concentrações de 2 e 6 mg.L-1 2,4-D, respectivamente. Segundo Soares [16], a concentração de 3 mg.L-1 de 2,4-D foi a mais eficiente em relação a maior área coberta por calos (80%) em Inga vera  subsp. Affinis. Na pesquisa de Santos [17] sobre indução de calos em salix (Salix humboldtiana  Willd), o maior percentual de calos friáveis (90%) foi obtido na presença de 6 mg.L-1 de 2,4-D, sendo que concentrações mais elevadas reduziram o percentual de calos formados. Os calos formados em explantes de paricá, iniciados a partir do quinto dia de cultivo apresentaram-se translúcidos até o décimo quinto dia, assumindo no momento da avaliação coloração bege, e a partir daí cores mais escuras até a total oxidação após 35 dias de inoculação. Este fato pode ter ocorrido em função da exaustão de nutrientes ou liberação de substâncias fenólicas no meio de cultivo, sendo que a transferência para novo meio de cultura deve ser feita em torno de 20 dias após a inoculação. Quanto à textura, os calos foram predominantemente friáveis.  Referências   [1]  DUCKE, A. 1939. As leguminosas da Amazônia brasileira.  Serviço floresta. Ministério da Agricultura. Serviço de Publicidade Agrícola. Rio de Janeiro. p.88. [2]  MELO, C. F. M. de. 1973. Relatório ao Instituto Brasileiro de Desenvolvimento Florestal sobre a viabilidade do aproveitamento papeleiro do Paricá (Schizolobium amazonicum ). Belém: EMBRAPA-CPATU. 6 p. [3]  FALESI, I. C., SANTOS, J. C. dos. 1996. Produção de mudas de paricá (Schizolobium amazonicum Huber). Belém: FCAP. 16 p. [4]  MANTELL, S.H.; MATTHEWS, J.A.; McKEE, R.A. 1994. Princípios de biotecnologia em plantas: uma introdução à engenharia genética. 344p. [5]  PIERIK, R.L.M. 1990. Cultivo in vitro de las plantas superiors. Martins Nijoff. 326p. [6]  TORRES, A.C.; CALDAS, L.S. 1990. Técnicas e aplicações de cultura de tecidos de plantas. Brasília: ABCTP/EMBRAPA. 433p. [7]  PAIVA, R.; PAIVA, P.D. O. 2001. Textos acadêmicos: cultura de tecidos. Lavras: FAEPE/UFLA. 97p. [8]  PINTO, J.E.B.P.; LAMEIRA, O.L. 2001. Micropropagação e metabólitos secundários in vitro  de plantas medicinais. Lavras: UFLA/FAEPE. 102p. [9]  MURASHIGE, T.; SKOOG, F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiologia Plantarum, Copenhagen, v. 15, p. 473-497. [10]  LIMA, E.C. 2004. Micropropagação, calogênese e anatomia foliar de sangra d’água (Croton urucurana Baill). Dissertação de Mestrado, Curso e Pós-graduação em Agronomia, UFLA, Lavras, 105p. [11]  MESQUITA, A.C. 1999. Estabelecimento in vitro  de lechieira (Litchi chinensis Sonn) através do cultivo de segmentos foliares e nodais e análise bioquímica de calos. Dissertação de Mestrado, Curso e Pós-graduação em Agronomia, UFLA, Lavras, 67p. [12]  WATT, M.P.; BLAKEWAY, R..; TERMIGNONI, R.; JAIN, S.M. 1999. Somatic embryogenesis in Eucalyptus grandis and E. dunni. In: JAIN, S.M.; GUPTA, P.K.; NEWTON, R.J. (Ed.). Somatic embryogenesis in  woody plants. Boston: USA, v.5, p.63-78. [13]  SANTOS, C.G. 2001. Micropropagação e caracterização bioquímico-anatômica em Coffea arabica e Coffea canephora. Dissertação de Mestrado, Curso e Pós-graduação em Agronomia, UFLA, Lavras, 110p. [14] GOLENIOWSKI, M.E.; SILVA, G.L.; TRIPPI, V.S. 1992. Effect of phytohormones on sesquiterpene lactone production in callus culture of Ambrosia tenuifolia . Phytochemistry, Oxford, v.31, n.7, p.2359-2361. [15]  RODRIGUES, E.F. 2000. Desenvolvimento de eixo embrionário in vitro  e calogênese de cupuaçu (Theobroma grandiflorum Wildenow wx. Sprengel) e estabelecimento do ápice caulinar de bacuri (Platonia insignis Martius). Tese de Doutorado, Curso e Pós-graduação em Agronomia, UNESP, Jaboticabal, 60p. [16]  SOARES, G. de A. 2003. Aspectos do cultivo in vitro  do ingazeiro (Inga vera Willd. Subsp. Affinis (DC.) T.D. Penn.). Dissertação de Mestrado, Curso e Pós-graduação em Agronomia, UFLA, Lavras, 90p. [17]  SANTOS, B.R.; PAIVA, R.; MARTINOTTO, C.; NOGUEIRA, R.C.; PAIVA, P.D.de O. 2005. Indução de calos friáveis em explantes foliares de Salix (Salyx humboldtiana Willd). Ciência Rural, Santa Maria, v.35, n.3, p.510-514.     020406080100Explantes com calos (%)0 2 4 62,4-D (mg.L-1)SNSCaAaAaAaA aAaBaAbB Figura 1 – Percentual de segmentos nodais  (SN) e cotiledonares (SC) que formaram calos, em meio MS adicionado de 2,4-D. Embrapa Amazônia Oriental, Belém-PA, 2007. Letras distintas entre si comparam: minúsculas, as médias entre concentrações de 2,4-D e maiúsculas, as médias entre explantes, ao nível de 5% de probabilidade pelo Teste de Tukey.   01020304050607080Área coberta por calos (%)0 2 4 62,4-D (mg.L-1)SNSCcAaAbAbA aBaBaBbB Figura 2 – Área coberta por calos em segmentos nodais  (SN) e cotiledonares (SC) inoculados em meio MS adicionado de 2,4-D. Embrapa Amazônia Oriental, Belém-PA, 2007. Letras distintas entre si comparam: minúsculas, as médias entre concentrações de 2,4-D e maiúsculas, as médias entre explantes, ao nível de 5% de probabilidade pelo Teste de Tukey.   

Efeito do 2,4-D na indução de calos em paricá a partir de segmentos nodais e cotiledonares.

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Efeito do 2,4-D na indução de calos em paricá a partir de segmentos nodais e cotiledonares.

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