Edição dos anais do 50º Congresso Brasileiro de Olericultura, 2010, Guarapari

BOARI, A. de J.

OLIVEIRA A. C. S.

PANTOJA, K. de F. C.

SOUSA, C. M. de

SOUZA, C. do A.

Repository Open Access to Scientific Information from Embrapa

Detecção de Piper yellow mottle virus da pimenteira do reino nos estadosde Minas Gerais, Espírito Santo e Amazonas.Hortic. bras., v. 28, n. 2 (Suplemento - CD Rom), julho 2010 952SOLIVEIRA ACS; BOARI AJ; SOUSA CM; PANTOJA KFC; SOUZA, CA. Detecção de Piper yellow mottle virus da pimenteirado reino nos estados de Minas Gerais, Espírito Santo e Amazonas. 2010. Horticultura Brasileira 28: S952-S956.Detecção de Piper yellow mottle virus da pimenteira do reino nos estados deMinas Gerais, Espírito Santo e Amazonas.Ana Carolina Sonsim de Oliveira1; Alessandra de Jesus Boari1; Cristiane Melo deSousa2; Késsia de Fátima Cunha Pantoja2; Caroline do Amaral Souza21 Embrapa Amazônia Oriental – Trav. Enéas Pinheiros s/n, Marco, 66095-100 Belém-PA,ajboari@cpatu.embrapa.br, 2 UFRA – Avenida Perimetral, 250, 1Belém - PA, 66077-830,carolsonsim@hotmail.com; cris.ufra@hotmail.com; kessiapantoja@yahoo.com.br;caroline_agro07@yahoo.com.brRESUMONo Brasil, os maiores estadosprodutores de pimenta do reino são Pará,Espírito Santo, Bahia e Minas Gerais.Entretanto, as doenças como as viroses vêmcontribuindo com a redução da produçãobrasileira. No Brasil, já foram relatados osvírus Cucumber mosaic virus (CMV), Piperyellow mottle virus (PYMoV) e um isométricoainda não identificado, sendo o segundo, atéentão, relatado apenas no Estado do Pará.Os sintomas causados por estes vírus sãoclorose, mosqueado, mosaico, clareamentode nervuras, deformação foliar, nanismo eredução da produção de frutos. O PYMoV édisseminado por cochonilhas e mudasinfectadas. No estado do Pará, maior produtorde pimenta do reino, o PYMoV se encontrabastante disseminado e ocorre em maiorincidência que o CMV. O fato de este vírusser disseminado por mudas infectadas levoua hipótese de que lavouras de outros estadosbrasileiros produtores de pimenta do reinotambém tivessem infectadas por esse vírus.Assim, o objetivo desde trabalho foi avaliaramostras de folhas de pimenteira do reinoprovenientes dos estados de Minas Gerais,Espírito Santo e Amazonas quanto apresença do PYMoV. Foram avaliadas 21amostras do Amazonas, 11 de Minas Geraise 11 do Espírito Santo. O PYMoV foidetectado nos três estados e, provavelmente,o vírus foi introduzido nesses por meio deestacas infectadas.Palavras-chave: PYMoV, disseminação,Piper nigrum L.ABSTRACTDetection of Piper yellow mottle viruson black pepper (Piper nigrum) in theStates of Minas Gerais, Espirito Santoand Amazonas, Brazil.The largest Brazilian states whereblack pepper (Piper nigrum L.) is cultivatedare Pará, Espírito Santo, Bahia and MinasGerais. However, diseases such as viruseshave been contributing to  reduce pepperBrazilian production. Cucumber mosaic virus(CMV), Piper yellow mottle virus (PYMoV) andan unidentified isometric particle have beenreported but PYMoV has been so far reportedonly in the State of Pará. Chlorosis, mottling,mosaic, vein discoloration, leaf distortion,stunting and reduced numbers of berries perspike are the main symptoms showed byinfected plants. The PYMoV is spread bymealybugs and infected stem cuttings andseedlings. In the state of Pará, PYMoV iswidespread and occurs in higher incidencethan CMV. The fact that PYMoV is transmittedby infected stem cutting and seedlings led tothe hypothesis that pepper crops from otherBrazilian states were also infected by thisDetecção de Piper yellow mottle virus da pimenteira do reino nos estadosde Minas Gerais, Espírito Santo e Amazonas.Hortic. bras., v. 28, n. 2 (Suplemento - CD Rom), julho 2010 953SConsiderada uma das principais especiarias no mundo, a pimenta-do-reino (Pipernigrum L.) tem grande importância para o comércio agrícola, sendo o Vietnã o maior produtore exportador, seguido da Índia, Indonésia e Brasil. A produção brasileira de pimenta do reino,prevista para a safra 2009/2010, é de 35 mil toneladas, 90% produzidas no Pará, onde osmaiores polos produtores são Castanhal, Tomé-Açu e Baião. O setor gera cerca de 25 milempregos diretos e 100 mil indiretos. Durante a colheita, que dura de três a quatro meses,são mobilizadas 50 mil pessoas. Na última safra, a cultura gerou ao estado do Pará umareceita de US$ 90 milhões. De 1999 a 2008 foram US$ 783 milhões (Sampaio, 2009). Osestados do Espírito Santo, Bahia, Minas Gerais, Maranhão, Ceará e Paraíba são responsáveispor cerca de 10% da produção brasileira. A produtividade média, que já foi de 3 a 3,5 ton/ha,hoje é de 2,5 ton/ha devido, principalmente às doenças e dentre elas as viroses.No Brasil, já foram relatados os vírus Cucumber mosaic virus (CMV), Piper yellowmottle virus (PYMoV) e um isométrico ainda não identificado, sendo os dois primeirosverificados no Estado do Pará. O PYMoV causa os sintomas de deformação foliar, mosqueado,mosaico, clareamento das nervuras, manchas cloróticas (Figura 1) e redução da produçãode frutos (Albuquerque et al., 1999; Brioso et al., 2000; Duarte et al. 2000). No estado doPará este vírus já identificado nos municípios de Tomé-Açu, Santa Izabel do Pará, Acará,Altamira, Abaetetuba, São Francisco, Peixe Boi, Moju, Mocajuba, Belém e Baião, agravandoas perdas de produção da cultura (Pantoja et al, 2009). O PYMoV já foi detectado nascultivares Guajarina, Cingapura, Bragatina, Perumkodi, Balankota, Apra, Kuthiravally,Kotanadan, Iaçará e Pannyur (Boari et al. 2009; Pantoja et al. 2008).Segundo Silva  (2002), o PYMoV pode ser transmitido pela cochonilha Planacoccuscitri e pelo percevejo de renda  Corythucha ciliata e, segundo Bhat et  al. (2003), pelacochonilha Ferrisia virgata, por enxertia e mecanicamente.Nos estados de Minas Gerais e Espírito Santo apenas o CMV foi relatado infectandopimenteiras do reino (Maciel-Zambolim et al., 1990).Assim, o objetivo desde trabalho foi avaliar amostras de folhas de pimenteira do reinoprovenientes dos estados de Minas Gerais, Espírito Santo e Amazonas quanto a presençado PYMoV.Os resultados obtidos darão subsídios à elaboração de estratégias de controle davirose de pimenta do reino.MATERIAL E MÉTODOSForam avaliadas amostras de pimenta do reino dos municípios ou capital: Manaus-AM (21 amostras), Boacaiúva-MA (11 amostras) e Linhares-ES (11 amostras). As amostrasvirus. In order to evaluate the incidence ofPYMoV, leaf samples   were collected inpepper crops in the States of Minas Gerais,Espírito Santo and Amazonas. About 21samples from Amazonas, 11 from MinasGerais and 11 from the Espírito Santo wereevaluated. PYMoV was detected in all states,and probably it was introduced in those statesthrough infected stem cuttings.Keywords: PYMoV, dissemination, Pipernigrum L.Detecção de Piper yellow mottle virus da pimenteira do reino nos estadosde Minas Gerais, Espírito Santo e Amazonas.Hortic. bras., v. 28, n. 2 (Suplemento - CD Rom), julho 2010 954Sde Manaus foram provenientes da unidade de observação da Embrapa Amazônia Ocidental.As amostras foram acondicionadas em sacos plásticos e imediatamente encaminhadas parao Laboratório de Fitopatologia da Embrapa Amazônia Ocidental, Belém-PA para seremanalisadas quanto à presença do PYMoV utilizando o teste molecular PCR. De Minas Geraisavaliaram-se amostras dos cultivares Cingapura e Apra; do Espírito Santo Guajarina, Uruacu,Cingapura, Apra, Kotanadan, Bragatina, Espírito Santo e Iaçará; e do Amazonas os cultivaresKuthiravally, Iaçará, Cingapura, Guajarina, Bragatina e Apra.Para realizar o teste de PCR fez-se a extração de ácido nucléico a partir de folhasnovas, segundo o protocolo de Gibbs & Mackenzie (1997), modificado. Cem miligramas dotecido foliar foi macerado em almofariz gelado com 1,6 mL do tampão de lavagem (10 mMTris-HCl pH 8.0; 1 mM EDTA pH 8.0; 2 M NaCl e BSA a 0.05%)  juntamente com 10 µL doantioxidante ß-mercaptoetanol. Após a centrifugação a 13.000 rpm e descarte dosobrenadante foram adicionados 800 uL do Tampão CTAB (2% CTAB (cetyl trimethylammonium bromide); 1.4 M NaCl; 0.1 M Tris-HCl pH 8.0 e 0,5% de ß-mercaptoetanol).Depois de misturado este foi colocado em banho maria a 55oC por 15-30 minutos. Em seguida,foram homogeneizados com 800 µL de clorofórimio:isoamílico (24:1) e centrifugados a 13.000rpm e então transferiu a fase aquosa para um novo aonde repetiu-se uma vez a clarificaçãodo extrato. Coletou-se 600 µL da fase aquosa e foram adicionados 600 µL de isopropanol e60 µL de acetato de amônio 7,5M e posteriormente incubados por 1 hora no freezer. Apóscentrifugação o sedimento foi lavado com álcool 70% e posteriormente secados, ressupendidocom 50 µL de água ultrapura autoclavada e armazenados a -20 oC.Em seguida, fez-se o teste de PCR e para isso foram utilizados 3 ìl do ácido nucléico,3 uL do tampão de reação 10X, 1,5 µL de MgCl2 (25 mM), 0,25 µL de dNTP (10 mM), 0,15 uLda Taq DNA Polimerase, 0,25ìl dos primers específicos para PYMoV e 16,6 uL de água ultra-pura. A reação consistiu de 30 ciclos de 94 oC, 49,5 oC e 72 oC, com duração de um minutoalém de uma extensão de 72 oC por 10 minutos. Fragmentos de DNA foram observados efotografados sob luz UV após a corrida eletroforética em gel de agarose (1,0%) e coloraçãoem GelRed. RESULTADOS E DISCUSSÃOO PYMoV foi detectado, por meio do PCR, nas amostras provenientes dos estados deMinas Gerais, Espírito Santo e Amazônas (Figura 2). Em Minas Gerais o PYMoV foi detectadoem duas amostras, uma do cultivar Apra e outra de Cingapura; Em Espírito Santo foi detectadoem três de amostras: de Uruacu, bragatina e uma não identificada; no Amazonas também foidetectado em três amostras sendo uma amostra do cultivar Kuthiravally, uma de Cingapurae outra de Apra.O fato da pimenteira do reino ser de propagação vegetativa contribui para a disseminaçãodo vírus por meio da comercialização de estacas e/ou mudas. Em uma avaliação préviaobservou-se que o principal vírus que ocorre  no estado do Pará é o PYMoV e não o CMVcomo se imaginava por esse último ser disseminado por pulgões. Outra observação importanteno estado do Pará é o desconhecimento dos sintomas de viroses por parte dos produtores,viveiristas, fiscais agropecuários  e extensionistas. Além da comercialização de mudas infectadaspelos viveiristas o que agrava ainda mais a disseminação do vírus no Brasil.Detecção de Piper yellow mottle virus da pimenteira do reino nos estadosde Minas Gerais, Espírito Santo e Amazonas.Hortic. bras., v. 28, n. 2 (Suplemento - CD Rom), julho 2010 955SAGRADECIMENTOSAo CNPq e FINEP pelo apoio financeiro e bolsas.REFERÊNCIASALBUQUERQUE FC; TRINDADE DR; POLTRONIERI LS; DUARTE, ML R; BRIOSO PST;REZENDE JAM; KITAJIMA EW. 1999. Evidências preliminares da ocorrência do vírus domosqueado da pimenteira-do-reino (Piper yellow mottle virus - PYMoV) no Brasil. 1999. In:CONGRESSO PAULISTA DE FITOPATOLOGIA, XXII, 36. Anais... Jaboticabal: UNESP. p.36.BHAT AI; DEVASAHAYAM S; SARMA YR; PANT RP 2003. Association of a Badnavirus inblack pepper (Piper nigrum L.) transmitted by mealbug. Current Science, 84:1547-1550.BOARI AJ; OLIVEIRA, ACS; PANTOJA KFC; TREMACOLDI CR; SOUZA CA; SOUSA, C. M.2009. Avaliação do banco de germoplasma de pimenteira-do-reino quanto à presença dePiper yellow motlle virus. 2009. In: CONGRESSO PAULISTA DE FITOPATOLOGIA, 35. Anais... São Pedro-SP: SPF p.35.BRIOSO PST; POZZER L; SILVA S; KITAJIMA EW; POLTRONIERI, LS; DUARTE MLR.2000. Amplificação de fragmento específico do PYMoV a partir de pimenta do reino. In:XXXIII CONGRESSO BRASILEIRO DE FITOPATOLOGIA, 438. Anais ... Belém – PA: SBFp. 438.DUARTE MLR; ALBURQUEQUE FC, POLTRONIERI LS; TRINDADE DR; KITAJIMA EW;BRIOSO PST. Mosqueado amarelo da pimenta-do-reino. Belém: Embrapa Amazônia Oriental,2000, 20 p. (Embrapa Amazônia Oriental, Documentos, 62).GIBBS A; MACKENZIE A. 1997. A primer pair for amplifying part of the genome of all potyviridsby RT-PCR. Journal of virology methods 63: 9-16.MACIEL-ZAMBOLIM E; CARVALHO MG; MATSUOKA K 1990. Caracterização parcial dovirus do mosaico do pepino isolado da pimenta-do-reino. Fitopatologia Brasileira, 15:220-225.PANTOJA KFC; BOARI AJ; OLIVEIRA ACS; SOUZA CM; SOUZA, CA. 2009. Levantamentode viroses em pimenteira-do-reino no estado do Pará. In: 7º SEMINÁRIO DE INICIAÇÃOCIENTÍFICA DA UFRA E 13º SEMINÁRIO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DA EMBRAPA 61.Anais .... Belém-PA: p. 61.SAMPAIO L. Comunidade Internacional debaterá a produção de pimenta do reino. Disponívelem http://www.sagri.pa.gov.br/?q=node/292, acessado em 03 de maio de 2010.SILVA DPP DE; JONES P; SHAW MW. 2002. Identification and transmission of Piper yellowmottle virus and Cucumber mosaic virus infecting black pepper (Piper nigrum) in Sri Lanka,Plant Pathology 51: 537–545.Detecção de Piper yellow mottle virus da pimenteira do reino nos estadosde Minas Gerais, Espírito Santo e Amazonas.Hortic. bras., v. 28, n. 2 (Suplemento - CD Rom), julho 2010 956SFigura 1. Planta de pimenta do reino com sintomas de viroses e redução de frutos. (Symptoms on PYMoV-infected black pepper plant). Belém-PA, Embrapa Amazônia Oriental, 2010.Figura 2. Produtos do PCR de PYMoV. 1. Marcador 1 kb ladder; 2. Controle positivo PYMoV; 3. Controlesadio; 4. Cingapura AM; 5. Bento BAG; 6. Kuthiravally AM; 7. Apra - AM; 8. Apra - MG; 9. Cingapura - MG;10. Bento - BAG; 11. Uruacu - ES; 12. Bento - BAG; 13. Bragantina ES; 14 cv. não identificada - ES; 15.Bento - BAG; 16. Apra BAG. (PCR products of PYMoV. 1. Plus 1kb ladder; 2. Positive control, 3. Negativecontrol, 4. Cingapura - AM; 5. Bento - BAG; 6. Kuthiravally - AM; 7. Apra - AM; 8. Apra - MG; 9. Cingapura -MG; 10. Bento - BAG; 11. Uruacu - ES; 12. Bento - BAG; 13. Bragantina - ES; 14 non identificated cv. - ES;15. Bento - BAG; 16. Apra - BAG). Belém-PA, Embrapa Amazônia Oriental, 2010.1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16500pb-

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