Beer, Martin

Bonilauri, P.

Dauber, Malte

Errington, J.

Hjulsager, C.

Hoffmann, Bernd

Isaksson, M.

LeBlanc, N.

Revilla-Fernandez, S.

Stadejek, T.

Wernike, Kerstin

German

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11nstitut für Virusdiagnostik, Friedrich-Loeffler-lnstitut, Greifswald-Insel Riems 21stituto Zooprofilattico Sperimentale della Lombardia e deii'Emilia Romagna, Reggio Emilia, ltaly 3Abteilung für experimentelle Tierhaltung und Biosicherheit, Friedrich-Loeffler-lnstitut, Greifswald - Insel Riems 4Animal Health and Veterinary Laboratories Agency, Merrythought, Calthwaite, Penrith, Cumbria, UK 5Swedish National Veterinary Institute, Virologisk molekylärdiagnostik, Uppsala, Sweden 61nstitute for Veterinary Disease Control, Austrian Agency for Health and Food Safety GmbH, Mödling, Austria 7National Veterinary Institute, Technical University of Denmark, Copenhagen, Denmark 8National Veterinary Research Institute, Pulawy, Poland VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNG VON RT-PCR METHODEN ZUR DETEKTION UND DIFFERENZIERUNG VON PRRS-VIREN K. Wernike1, P. Bonilauri2 , M. Dauber3, J. Errington4, N. LeBianc5, S. Revilla Fernandez6, C. Hjulsager7, M. lsaksson5 , T. Stadejek8, M. Beer1, B. Hoffmann 1 Infektionen mit dem pareinen reproduktiven und respiratorischen Syndrome Virus (PRRSV) sind weit verbreitet und führen sowohl in Zucht- als auch in Mastbetrieben zu erheblichen finanziellen Schäden. Aufgrund genetischer und antigener Unterschiede werden zwei Genotypen, der europäische (EU, Genotyp 1) und der nordamerikanische (NA, Genotyp 2) differenziert. Der direkte Erregernachweis basiert hauptsächlich auf der Detektion viraler RNA mittels RT-PCR oder real-time RT-PCR. Um die verschiedenen, in der Diagnostik eingesetzten PCR-Methoden hinsichtlich diagnostischer und analytischer Sensitivität zu vergleichen, wurde ein europaweiter Ringtest durchgeführt. RNA diverse NA- und EU-PRRSV-Stämme, darunter auch "exotische" osteuropäische lsolate, wurden durch die Teilnehmer mittels kommerzieller Kits oder in-hause Methoden untersucht. Insgesamt wurden von den 7 teilnehmenden Laboren 19 Datensätze zurückgesandt, die mit 15 verschiedenen Assays generiert wurden. 4 kommerzielle Kits und 11 in-hause Methoden, darunter 8 im real-time Format, kamen zur Anwendung . Zwischen den eingesetzten Methoden zeigten sich deutliche Unterschiede hinsichtlich der analytischen und diagnostischen Sensitivität, sowohl unter Verwendung kommerzieller Kits als auch der in-hause Methoden. Im Allgemeinen traten die größten Probleme bei der Detektion der EU-, speziell der nicht EU-1 Stämme auf. Die enorme genetische Variabilität dieser Stämme resultiert in einem hohen Risiko für Mismatch in Primer- und/oder Sondenbindungsregionen und daraus folgenden Mängeln in der diagnostischen und/oder analytischen Sensitivität. Um die in der Diagnostik eingesetzten Assays entsprechend anzupassen, wurden alle in diesem 33 Ringtest eingesetzten Stämme sequenziert und die Sequenzen öffentlich zugängl ich gemacht. Hauptproblem in der PRRSV-Diagnostik per PCR sind falsch-negative Ergebnisse. Unter Verwendung der für diesen Ringtest ausgewählten Stämme zeigte kein Kit oder Assay eine optimale analytische und diagnostische Sensitivität. Um eine maximale diagnostische Sicherheit zu erreichen, ist eine Kombination verschiedener Kits/Assays aktuell empfehlenswert. Korrespondenzadresse: Dr. Kerstin Wernike Institut für Virusdiagnostik F ried rich-Loeffler -Institut Südufer 10 17493 Greifswald-Insel Riems E-Mail: Kerstin .Wernike@fli.bund.de 34 DEUTSCHE VETERINÄRMEDIZINISCHE GESELLSCHAFT E. V. Tagung der Fachgruppe AVID Veterinärmedizinische I nfektionsd iag nosti k 31. Arbeits- und Fortbildungstagung -Virologie -26. bis 28. September 2012 in Bad Staffelstein I Kloster Banz 

Vergleichende Untersuchung von RT-PCR Methoden zur Detektion und Differenzierung von PRRS-Viren

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Vergleichende Untersuchung von RT-PCR Methoden zur Detektion und Differenzierung von PRRS-Viren

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