壳寡糖对猪蓝耳病灭活疫苗的佐剂活性研究

Abstract

目的研究探讨不同聚合度、不同脱乙酰度的壳寡糖对猪蓝耳病灭活疫苗(PRRSV)的免疫佐剂活性。方法不同聚合度和脱乙酰度的壳寡糖COS(聚合度2-8,脱乙酰度>95%)、COSNAC(聚合度2-8,乙酰度>90%)、HCOS(聚合度2-20,脱乙酰度>95%)、50%COS(聚合度2-8,脱乙酰度≈50%)、生理盐水和油乳佐剂ISA206分别与PRRSV灭活疫苗配伍,以肌肉注射的方式免疫BalB/C小鼠,以单独注射生理盐水的小鼠作为空白对照组,初次免疫四周后进行加强免疫,加强免疫四周后进行再次加强免疫,每次免疫两周后ELISA法检测小鼠血清中PRRSV特异性N蛋白抗体的滴度及亚型、亚类;再次加强免疫两周后MTT法测定免疫小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应,流式细胞术测定免疫小鼠脾脏淋巴细胞CD4~+、CD8~+、CD3~+和CD19~+细胞亚群的比例,中性红比色法检测免疫小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果再次加强免疫后,寡糖COSNAC可显著增强小鼠血清中PRRSV抗体的滴度,其增强作用弱于阳性对照组;COSNAC可显著提高免疫小鼠血清中IgGl、IgG2a、IgG2b抗体的含量;COSNAC组、50%COS组IgG2b亚类抗体与PRRSV组相当,其中以COSNAC组IgG2b抗体产生的水平最高,但不及ISA206组。COSNAC组、50%COS组IgM亚类抗体显著高于PRRSV组;MTT法的结果表明,与抗原对照组和阳性对照组相比较,HCOS能明显增强免疫小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖反应,并且HCOS促进B淋巴细胞增殖的作用明显强于ISA206组;经流式细胞术测定,寡糖COS、HCOS、COSNAC均可显著提高免疫小鼠脾脏淋巴细胞CD4~+T细胞和CD8~+T细胞的比例,寡糖COS、HCOS、COSNAC均可显著提高CD3~+细胞的含量及CD3~+/CD19~+细胞的比值,此外50%COS可显著提高CD19~+细胞的比值,并且显著降低CD3~+/CD19~+细胞的比值;经中性红比色法测定,与ISA206组相比较,COSNAC免疫后小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能显著提高,该作用经LPS和PRRSV抗原诱导后明显增强。结论壳寡糖可增强小鼠对PRRSV灭活疫苗的免疫应答,是一种新型的免疫佐剂,可用于猪蓝耳病等灭活疫苗的开发中