xSuplemento. Edição dos resumos do 43º Congresso Nacional de Genética

FABRIS, J. D.

FIGUEIREDO, J. E. F.

MOTTA, L. P.

ROCHA, W. D. da

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;OTIMIZAÇÃO DE PARÃMETROS PARABIOLÍSTICA EM CANA-DE-AÇÚCAR UTILIZANDOO GENE GUS. Maria Cristina Falco AugustoTulmann Neto e Eugênio César Ulian. Depto deGenética - ESALQ -USP, e Centro de TecnologiaCopersucar, Piracicaba - SP.A utilização da bioIística como forma de introduçãode genes de interesse em plantas requer um estudopreliminar de otimização de alguns parâmetrosenvolvidos no processo, como por exemplo a distânciada suspensão de particulas ao tecido alvo, a pressãoutilizada no disparo e a quantidade de DNAprecipitado nas partículas. Utilizando-se calosembriogênicos de cana-de-açúcar como tecido alvo e ogene da ~-glucuronidase (GUS) como gene repórter,foram testados os parâmetros citados. A avaliação sedeu por análise histoquímica da expressão GUS.Quantificou-se também a diminuição da expressão dogene ao longo do tempo. Os experimentos foramrealizados em equipamento desenvolvido no Centro deTecnologia Copersucar. Não houve diferençassignificativas entre os valores de distância do alvo(testou-se 5,0, 8,0, 11,0, 14,0 e 17,0 cm) ede. quantidade de DNA (0,1, 0,5, 1,0, 2,5 e 5,0ug/disp aro}. Para pressão de disparo, 8 Kgf/cm 'apresentou maior expressão GUS (entre 7, 8, 9, 10 e11 Kgfl cm ' testados). Optou-se então, por utilizarnos experimentos futuros a distância de 14,0 em doalvo, a pressão de disparo de 8 Kgf/cm2 e 1,0 v.g deDNA/disparo.CAPESPREDiÇÃO DE ESTRUTURA E MODELAGEM MOLECULAR DE BiP(Binding Protein) DA SOJA [G/ycine max L. (Merrill)) USANDOBIOLOGIA COMPUTACIONAL. Wanderson Duarte da Rocha'; LuizPacheco Motta2; José Domingos FabriS'; José Edson FontesFigueiredoZ. 'Universidade Federal de Viçosa. INúcleo de BiologiaAplicada, CNPMS/Embrapa, Sete Lagoas, Minas Gerais.Proteinas de estresse catalizam hidrolise de ATP ligado através demudança confonmacional de dois dominios com topologia PI3P~P(XP(Xcircundando o nucleotideo. BiP (Binding Protein) pertence a farnilia deproteinas de estresse. Um cDNA de BiP da soja foi seqüenciado(Figueiredo e Fontes, dados não publicados) e a proteina deduzida foicomparada com a estrutura cristaloqráfica do sítio de ligação de ATP deHSC70 cítooíasmátíca de leveduras usando os programas Rasmol eProwin. A estrutura conservada de BiP da soja no domínio de ligação deATP consiste de 234 residuos fonmando díade quase simétrica. BiP dasoja possui os domínios I e Ii com subdomínios IA e liA e subdomíniosIB e l1B conservados com relação a estrutura de HSC70 e resíduoslocalizados na mesma posição, ou diferente, mas com funõessemelhantes aos resíduos Asp10; Asp199 e Asp199 a Glu175 deLigação de Mg2+ e Ca2+; Asp11; Gln137; Asp154 acidicos no sítio ativoe Glu175; Asp199, Lys71; Asp199 e Asp206 que coordenam a ligaçãode áqua em HSC70. Modificações na seqüência de arninoácidos em BiPnão alteram o modelo da estrutura terciária da proteína.Recursos financeiros RHAE-CNPq/Embrapa.D.63D.65D.64EXPERIMENTOS PRELIMINARES VISANDO A OBTENÇÃO DEPLANTAS TRANSGÊNICAS DE ARROZ (01)'%a saliva L.) RESISTENTESA HERBICIDA E A ESTRESSES OSMÓTlCOSPedro A. L. Bittencourt\ Grácia M. S. Rosinhal, Adriana T.Ferreiral & José A. Petersl! IUFPELlFAEM - Dept" de Botânica,Campus Universitário - Caixa Postal, 354 - CEP 96010-900 -PelotaslRS - 2Centro Nacional de Pesquisa de Recursos Genéticos eBiotecnologia, EMBRAPA, Caixa Postal 02372, Brasília/DF, 70770Brasil.A engenharia genética oferece, atualmente, a possibilidade datransferência de genes úteis às cultivares comerciais, permitindoincorporar características herdáveis sem a destruição de genótiposvaliosos que se tem obtido como resultado de muitos anos decruzamentos e seleção, possibilitando assim a obtenção de resultados pormetodologia menos sujeita a variação genética não controlável. Atransferência de DNA através do método biolístico, permitirá aintrodução de genes de interesse sem alterar a base genética doscultivares preferidos pelo agricultor. Em nossos experimentos estarnosotimizando a eficiência de transformação genética, principalmente para asvariedades locais do tipo indica, via método biolístico analisando aexpressão transiente utilizando o gene reporter uidA (GUS). Comoexplantes de transformação estamos utilizando embriões imaturos, calosprimários de embriões maduros e outros explantes alternativos comopanículas imaturas e gemas axilares. Como objetivo final destesexperimentos visamos a transformação de arroz com o gene bar(fosfinotricina acetiltransferase) que confere resistência ao herbicidaFINALE<I> (Hoechst AG, glufosinato de amônia) e do gene mtlD(manitol-I-fosfato dehidrogenase) que provoca acúmulo de manitol,aumentando assim a capacidade de ajustamento osmótico, permitindoque as plantas possuam uma maior tolerância, por exemplo, à salinidadee ao deficit hídrico.Suporte financeiro: CNPq e FAPERGSD.66Production of transgenic peanut (Arachis hypogaea L.)plants throu~ electroporation of immature leavesM.C. Pestana I , Y.L.M. de Pádua', M. M. Pinheiro', D.E. deOliveira' and E. Mansur'I. Universidade Federal do Rio de Janeiro, 1.8., LGMVIDG, RJ- Brazil2. Universidade do Estado do Rio de Janeiro, I. 8., LabmitIDBCG,RJ-BraziIElectroporation-mediated DNA delivery to plant protoplasts is a wellestablished procedure. More recently, it has been shown that a1so intactcells, both in suspension cultures and as part of organized tissues, can takeup DNA through electroporation. ln the present study we established atransformation protocol for peanut based on the electroporation of immatureleaves. Plant regeneration (22 shootsIexplant, after 45 days culture period)was obtained upon continued culture of exp1ants on MS medium containing22v.M 6-benzilaminopurine (BAP) plus 5v.M AgNO, and incubated at35±2°C. Some parameters related to the efl:iciency of DNA delivery topeanut irnrnature leaves, such as electric pulse, electrolyte concentration andco-incubation conditions were previously studied, using ttansient GUSexpression assays. The plasmids used were pTDE4 and pGUSINT,containing the GUS gene coding region driven by the CaMV promoter andthe npt-ll gene under the control of the nopaline sintase (NOS) promoter.Leaves from 2-day-old seedlings were excised and electroporated with fieldstrength of 625V/cm discharged from a 900v.F capacitor. Afterelectroporation, explants were transferred to regeneration mediumcontaining 100rng/L kanamicin. Resistant regenerants were obtained at afrequency of 5%. The presence of foreign DNA into putative transgenicplantlets was demonstrated using PCR prirners designed to amplify a 20bpsequence of the npt-lI gene. Three out of eight plants were PCR positive andthe PCR products hybridized with a npt-Il probe. ln order to confirm DNAintegration into genomic DNA, Southem blot anaIysis is currently beingperformed.Supported by Capes and Cepuerj197

Predição de estruturas e modelagem molecular de BIP (Binding Protein da soja (Glycine max L. (Merrill) usando biologia computacional.

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