Ambrosio Jiménez, Pedro Pablo

Flos Bassols, Rosa

Reig Puig, Lourdes

Sánchez Fernández, Pablo

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Técnica de biopsia muscular con aguja cortante fina en peces

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Técnica de biopsia muscular con aguja cortante fina en peces pequeñosPablo Sánchez, Pedro Pablo Ambrosio, Lourdes Reig, Rosa Flos.Departament d'Enginyeria Agroalimentària i Biotecnologia, Universitat Politécnica de Catalunya. C/Comte d’Urgell 187. 08036, Barcelona, España.ResumenSe  desarrolló  una  técnica de  biopsia  muscular  con  aguja  cortante  fina  para  su aplicación en peces pequeños, analizando la supervivencia y el crecimiento tras 3 biopsias sucesivas a lo largo del tiempo frente a un grupo control.  Se usó como modelo  el  pez  dorado  (Carassius  auratus L.).  No  se  encontraron  diferencias significativas  entre  ambos  grupos  ni  en  la  supervivencia  (94,4% grupo  control, 97,2% grupo biopsia) ni en el peso medio final (16,05  0,72 g grupo control, 14,92  0,53 g grupo biopsia) ni en las tasas de crecimiento específicas (0,18  3,310-3 grupo control, 0,12   4,1610-2 grupo biopsia). Esta técnica se muestra como una herramienta  útil  para  determinaciones  in  vivo de  parámetros  bioquímicos musculares,  como la  relación  RNA/DNA,  metabolitos  musculares,  parámetros  de calidad, etc.JustificaciónEl análisis de determinados parámetros bioquímicos y fisiológicos en músculo de peces implica normalmente el sacrificio del animal, imposibilitando la repetición de las medidas sobre el mismo individuo a lo largo del tiempo. La técnica de biopsia con  aguja  cortante  fina  puede  ayudar  a  solucionar  este  problema  evitando  el sacrificio de los animales. Esta técnica, aunque con agujas de mayor calibre y peces más grandes, ya fue realizada por Grant en 1996, pero el procedimiento no fue descrito con detalle ni se valoró la influencia de la técnica sobre la supervivencia y el crecimiento de los peces.El objetivo de este trabajo fue desarrollar y valorar la eficiencia de una técnica de biopsia capaz de extraer pequeñas muestras de músculo de peces pequeños.Material y MétodosSe utilizaron 72 ejemplares adultos de Carassius auratus de 14,38  0,37 g (media SEM)  distribuidos  al  azar  en dos  grupos  (control  y  biopsia).  Cada grupo  estaba constituido por 3 unidades experimentales.  Éstas fueron repartidas en 3 acuarios según un diseño en bloques (ANOVA de 1 vía) completamente aleatorizado. Cada acuario contenía 2 unidades experimentales que compartían sistema de filtración. Los parámetros físico-químicos del agua se monitorizaron periódicamente. El agua fue esterilizada por UV cada 2-3 días. El fotoperiodo consistió en 12L y 12O. Se alimentó con una ración diaria del 1,6% del peso corporal.Este  abstract  se  publicó  originalmente  como:  Sánchez,  P.,  Ambrosio,  P.P.,  Reig,  L.  y  Flos,  R.  2003. Técnica  de  biopsia  muscular  con  aguja  cortante  fina  en  peces  pequeños.  IX  Congreso  Nacional  de Acuicultura. Libro de Resúmenes. 360-362. Ed: Consejería de Agricultura y Pesca. Junta de Andalucía.Las medidas  biométricas y las biopsias se llevaron a cabo los días 0, 22 y 47 del experimento. El procedimiento seguido durante los muestreos en los dos grupos sólo  difirió  en la  biopsia  realizada  a  los  peces del  grupo  biopsia.  Cada pez  fue anestesiado localmente mediante una inyección intramuscular de lidocaína (9l de lidocaína al 2%) en el músculo epaxial (músculo blanco) del flanco izquierdo, por debajo del primer radio de la aleta dorsal. Inmediatamente después se pesó y midió la  longitud  estándar  del  pez.  Aproximadamente  2  minutos  tras  la  inyección  del anestésico se practicó la biopsia en las inmediaciones del lugar de la punción. Para ello  se  usó  una  aguja  BIOPINCE (Amedic)  del  calibre  18 G,  montada sobre  una cánula  guía  coaxial  de  fabricación  propia  consistente  en  una  aguja  de  acero inoxidable  unida  a  un  tubo  de  plástico  solidario  con  la  pistola  de  biopsia.  Este sistema evita  extraer tejido epidérmico (que puede ser una contaminación  para según qué análisis), favorece la cicatrización y permite regular el recorrido de la aguja.  Tras  el  disparo  se  recuperó  la  biopsia  de  tejido  muscular  y  se  congeló inmediatamente en nitrógeno líquido.Como método profiláctico se aplicó una pomada antibiótica de oxitetraciclina en el lugar de la herida y se trató la zona con povidona yodada al 10%. Los peces control siguieron el  mismo protocolo  hasta llegar a la biopsia,  permaneciendo fuera del agua el mismo tiempo que los peces del grupo biopsia.Se  calculó  la  tasa  de  crecimiento  específico  (SGR)  siguiendo  la  fórmula:  SGR= 100(lnW2-lnW1)n-1, donde W1 y W2 son el peso inicial y el peso final respectivamente y n es el número de días del periodo entre muestreos.Las diferencias entre la supervivencia, los pesos y las SGR de cada grupo, fueron analizadas  con  el  software  estadístico  SPSS  v9.0  mediante  ANOVA  de  1  vía (p<0,05).  Cuando no  hubo  homogeneidad en las  varianzas  se  utilizó  el  test  no paramétrico de Kruskal-Wallis (p<0,05).aaa aaa0102030405060708090100110Supervivencia (%)Día 0 Día 22 Día 47Fig. 1. Porcentaje de supervivencia en los días 0, 22 y 47 de la experiencia para los grupos control (en negro) y biopsia (rayado). Letras iguales dentro de cada día  de  muestreo  indican  que  no  hay  diferencias  significativas  entre grupos (p<0,05). Media SEM.Resultados y discusiónFue posible extraer pequeños cilindros de tejido muscular de 1,1 mm de diámetro por 1,3 mm de largo sin afectar de forma significativa (p<0,05) a la supervivencia (Fig.  1) ni  al  crecimiento (Fig.  2).  Las tasas de crecimiento específico no fueron significativamente diferentes (0,18  3,310-3  grupo control, 0,12  4,1610-2 grupo biopsia, p<0,05).El  pez  más  pequeño  al  que  se  le  realizaron  las  3  biopsias  pesaba  10,7  g inicialmente.La técnica de biopsias sucesivas con aguja cortante fina es adecuada para la toma de  muestras  de  tejido  in  vivo en  peces  de  pequeño  tamaño  sin  afectar  a  la supervivencia ni al crecimiento en periodos cortos.aaa aaa024681012141618Peso (g)Día 0 Día 22 Día 47Fig. 2. Pesos medios en gramos en los días 0, 22 y 47 de la experiencia para los grupos control  (en negro) y  biopsia  (rayado).  Letras  iguales  dentro de cada día  de  muestreo  indican  que  no  hay  diferencias  significativas  entre grupos (p<0,05). Media  SEM.

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