Iversen, Freddy

Langmyhr, Eyolf

Tertnes, Gunnar

Norwegian Bokmål

Fiskeridirektoratets digitalarkiv

Nr. 3 / 8 6  1 UTVASKING AV TMAO OG FLYKTIGE NITROGENFORBINDELSER FRA FISK LAGRET I IS 8 V  Eyolf Langmyhr, Gunnar Tertnes og Freddy Iversen Sentrallaboratoriet, Fiskeridirektoratet Postboks 185, 5001 Bergen I N N H O L D S F O R T E G N E L S E  Seksion Side 1 INNLEDNING . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .  2 . . . . . . . . . . . . . . . . . .  2  MATERIALE OG METODER 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .  2.1 PrØvemateriale 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . .  2.2 ForsØksbetingelser 2  2.3 Opparbeidelse av prØver . . . . . . . . . . . . . . .  2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .  2 . 4  Analysemetoder 3 . . . . . . . . . . . . . . . . .  3 RESULTATER OG DRØFTING 3 Tabell 1. Volum av tinevann. Tabell 2. Utvasking av tØrrstoff. Tabell 3 .  Utvasking av ninhydrinreaktive forbindelser Fig. l. Andelen av TMAO og flyktige nitrogenforbindelser funnet i smeltevannet fra rund pale Lagret i is ved + 3  grader C. Fig. 2. Andelen av TMAO og flyktige nitrogenforbindelser funnet i smeltevannet fra blØgget pale lagret i is ved +3 grader C. Fig. 3. Andelen av TMAO og flyktige nitrogenforbindelser funnet i smeltevannet fra slbyd og hodekappet pale lagret i is ved +3 grader C. Fig. 4. Andelen av TMAO og flyktige nitrogenforbindelser funnet i smeltevanet fra sl@yd og hodekappet pale lagret ved +25 grader C. Fig. 5 .  Andelen av hypoxantin, inosin og inosinmonofosfat f~nnet i smeltevannet fra rund pale lagret i is ved +3  grader C. Fig. 6. Andelen av hypsxantin, inosin og inosinmonofosfat funnet i sineltevannet fra blSgget pale lagret i is ved t3 grader C. Seks ion Side Fig. 7 .  Andelen av hypoxantin, inosin og inosinmonofosfat funnet i smeltevannet fra sl$yd og hodekappet pale lagret i is ved +3 grader C. Fig. 8. Andelen av hypoxantin, inosin og inosinmonofosfat funnet i smeltevannet fra slØyd og hodekappet pale lagret i is ved +25 grader C. i 3 4 LITTERATUR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .  1 4  VEDLEGG Analyseresultater - rund pale lagret i is ved +3 grader C. . . . . , . . . . . , . . . . . . . . . . I S  Analyseresultater - blØgget pale lagret i is ved +3 grader C. . . . , . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7  Analyseresultater - slayd, hodekappet pale lagret i is ved +3 grader C. . . . . . . . . . . . . . . . . 1 9  Analyseresultater - clØyd, hodekappet pale lagret i is ved +25 grader C. . . , , . . . , . , . . . 22 Analyseresuitater - i tinevann fra rund pale lagret i is ved +3 grader C. , . . , , . . , . . , , , . 23 Analyseresultater - i tinevann fra blØgget pale lagret .i is ved + 3  grader C. . . . . . . . , . . , 25  Analyseresultater - i tinevann fra slØyd og hodekappet pale lagret i is ved +3 grader C. . . . 2 7 Analyseresultater - i tinevann fra slØyd og hodekappet pale lagret i is ved +25 grader C. . . . 29 I INNLEDNING VannlSseliyc forbindelser i fisk vaskes ut av smelt~i~annet ved lagling i is og av s j4vannet ved lagring i R S W .  Utvaskingen ved lagring i RSW er unders#kt i prosjektet. "Unders$kelse over kvalitet av fisk lagret i kjq5lt sjdvann og i is" (Tertnes et al. 1982 - 1983). For 4 undersSke utvaskinyen ved lagring i is ble det satt opp en :>er.ie eksperimenter hvor det ble +:att vare på smeltevannet. 2 MATERIALE OG METODER Forsq5ket ble utfgrt med pale, 300 - 500g, fanget i april 1983. Det ble brukt hel pale, blggget pale og slSyd og hodekappet pale. 2.2 Forsdksbetinselser Fisken ble lagret i vanlige fiskekasser med is. Det var en variant pr. kasse. Kassene ble lagret på kjq5lerom ved +3 grader C .  1 tillegg ble en kasse med slflydl kodekappet fisk lagret ved ca. +25 grader C. * Hver Ircisse inneholdt 20 kg fisk, (34 is ble etterfylt nAr det va1 n@civend.ig. Smeltevannet ble samlet i beholdere som var pl;s.i.sert i isbad, Et.ter 1 ,  3 ,  6, 9 ,  13  og 1 6  d$gn ble prflver tatt ut for analyse og beholderen som samlet tinevann ble erstattet med en ny. 2.3 Opparbeidelse av pr@ver Hver fisk ble filetert og skinnet. Skinn, ryggbein og eventuelt hode og innvoller ble samlet i en t.arert hornogenisator, og vekten ble notert. FrSven ble tilsatt en lik mengde med 10% triklireddiksyrel@sning (TCA) og homogenisert. Hornogenatet ble filtrert. Deretter ble filetene behandlet på samme mate. Avfallet ble homogenisert s å  raskt som mulig etter filetering. Filtra-?.et ble brukt i analysene. Volumet av srneii:.ev,?.-r:riet b l e  m 8 l t .  i(3r ana l . y se  b l e  9 d e l e r  vann b l a n d e t  med 1 (:le1 GO'?; SCA-lgsning og  f i l t r e r t .  2 . 4  Ana lvseme tode r  T o t a l t  f l y k t i g  N og t r i m e t y l a m i n n k s y d  (TMAO) b l e  b e s t e m t  ved m i k r c ~ d i f f u s j o n  (Conway o g  Ryrne ,  1!33.3). T r i m e t y l a m i n  ( T M A )  b l e  b e s t e m t  k o l o r i m e t r i s k  med e k s t r a k s j o n  ved  - 1.5 gr;~c:ler C som besk reve t ,  av  Ru1larc:l t3g C ( ~ l l . . i n s  ( i !r)80) . Dimety1ami.n ( D M A )  b l e  bes temt .  k o l o r i m e t r i s k .  (Dnwden, 13383 .  I-Iypoxantin,  i n o s i n  (ly inc~sinmci>nci>f o s f f 9 t  ( IMP) b l e  beskemt  vecl HPLC. 20 m l  T C A - e k s t ~ a k t  b l e  j u s t e r t  med 30% XOH t.11 c a .  p 3  5  og  f o r t y n n e t  t i l  50 m l .  Ko lanne :  RP-8, 2 5  x 4 , 6  m m .  P a r t i k k e l d i a m e t e r :  10 prn.  Mobi l  f a s e :  85% 0,01 M KH2P0,+, 8 %  NeOH, 7% H O ,  1 , 2 rnl/m.in. R(>mtemperati.lr. 2 T @ r r s t . o f  i s m e l t e v a n n  b l e  b e s t e m t  vecl i nndamping  til t @ r r h e t .  ved 105 g r a d e r  C .  N i n h y d r i n r e a k t i v e  s t o f f e r  b l e  b e s t e m t  k o l o r i m e t r i s k  e t t e r  r ea l c s jnn  med ninhyc3rj.n. S e r  in b1.e b r u k t  som stanc:lard . 3 RESULTATER OG DRØFTING F i s k e n  som 1 2  p& k j g l e r o m  ( c a . + . 3  g r a d e r  C )  v a r  d e k k e t  av  i s  i h e l e  f(i>rs$k,i,perj-c:)(-leri, ner;s n som 1 .  V& r(~mtempf?rat: i tr ,  h v o r  t e m p e r a t u r e n  v a r  oppe  i 26 g r a d e r  C ,  hadde  s p a r s o m t  med i s  e t t e r  he lg r in .  Mer-igcrlen smcil. tevctnn v a r  5 t d r s  k f r a  ( len ki iszen som s t o  ved r(:)mt.empercttur. Av cle prc;ovene som lå p8 k j$lerr_>m v a r  ( l e t  itiin.st - .  a v r e n n i n g  f r a  k a s s e n  med b l S g g e t  I ( T a b e l l  1 ) .  D r t t e  k a n  s k y l d e s  a t  crfenrie k a z s e n  v a r  p l a s s e r t  niellom k a s s e n e  med cfe t o  a n d r e  v a r i a n t e n e ,  ci>g (:len v a r  ~ i -o i l~?( je .~  b e d r e  i s o l e r t  på sicrfene enn  k a s s e n e  som s t o  y t t e r s t . .  T a b e l l  1 .  Volum a v  t i n e v a n n .  T a b e l l e n  v i s e r  mengde o p p s a m l e t  t i n e v a n n .  F i s k e n  e r  l a g r e t  i is ved  + 3  g r a d e r  C og  ved  +25 gra(:ler C .  Mengde t 4 r r s t o f f  i s m e l t e v a n n e t  b l e  b e s t e m t  og  e r  i t a b e l l  2  v i s t  i f o r h o l d  t i l  mengde f i s k  i k a s s e n e .  Av d e  k a s s e n e  som b l e  l a g r e t  p4 k j S l e v a n n  b l e  d e t  v a s k e t  u t  mest t g r r s t o f f  f r a  f i s k e n  som kun v a r  b l d g g e t ,  litt m i n d r e  f r a  d e n  som v a r  s l g y d  o g  h o d e k a p p e t ,  og m i n s t  f r a  d e n  r u n d e  f i s k e n .  Det.te s k y l d e s  s a n n s y n l i g v i s  b l o d  f r a  d e n  b lØgge te  f i s k e n .  F r a  d e n  k a s s e n  med s l @ y d  f i s k  som b l e  l a g r e t  ved  r o m t e m p e r a t u r  b l e  d e t  s a m l e t  opp  v e l  5 g a n g e r  mer s m e l t e v a n n  e n n  f r a  d e n  t i l s v a r e n d e  k a s s e n  pA k j g l e r o m .  D e t  b l e  i m i d l e r t i d  b a r e  v a s k e t  u t  l i tt  mer e n n  d o b b e l t  mengde t g r r s t o f f  i P$pet a v  f  ( ~ r s r p k e t .  T a b e l l  2 .  U t v a s k i n g  a v  t . $ r r s t . o f  f  . T a b e l l e n  v i s e r  mengde t g r r s t o f f  f u n n e t  i t i n e v a n n e t  i f o r h ( , l d -  t i l  mengde f i s k .  Dggn Rund, +'3' C O O O B l Ø y g e t , + 3  C S1@yd1+3 C S l$yd ,+SS  C g/lOOg g/IOOg g/IOOg c f /  1 [ J t v a s k i n g  a v  n i n h y d r i n r e a k i ~ i v e  f ( ~ r b . i n d e l s e r  v a r  . ~ f i . $ ~ c , t :  i s l g y d  f i s k  og m i n s t  i r u n d  f i s k  ( T a b e l l  3 ) .  D e t  e r  i k k e  f u n n e t  noen a n a l y s e  over s ammense tn ingen  a v  blod i f i s k ,  men (:jet s y n e s  n a t u r l i g  4 a n t a  a t  d e t t e  f o r h o l d  s k y l d e s  e t  h g y e r e  i n n h o l d  a v  f r i e  amin (3sy re r  i muske l  erin i bl.cr~d. Forhc~>lc:let miillom f i t v i ~ s k i n g  av n i n h y d r i n r e a k t i v e  f o r b i n d e l s e r  f r a  f i s k  l a g r e t .  i .i s ~irec'f r(3mtemperC3tur (]g p å  kj@l.erom e r  c3mt:rent sc::m f o r  i-itvi2sk.ing a v  t g r r s t o f  f  . T a b e l l  3 , r J tvask ing  a v  i i in!~ydri r i reakt . j j ' i r t~  f o r b i n d e l s e r .  T a b e l l e n  viser mengde n i n h y d r i n r e n k t i v e  f ( ~ r b . i r , d e l s r ; r  f 1-1nnrt i t . . inevannet  i f(:)rhc:)lc2 t i l  mengde f . i s k .  s e r i n  or br111:t s o m  stan[:la..rc:!, O O O Dqign Rund, + 3  C Blqigget,  +3 C SlGyd, +.3 C slqiyd, c25OC mg/ 100g mg/ 100g ing/ 100g mg/ l 0 0 g  U t v a s k i n g  a v  t .otalt  f l y k t i g  n i t r o g e n ,  TMAO, TMA og DMA er  v i s t  i F i g .  1 -4 .  U t v a s k i n g e n  a v  TMAO synes å v.%re l a n g t  l a v e r e  enn  u t . vask ingen  a v  TMA og D N A .  Dette s k y l d e s  s a n n s y n l i g v i s  a t  TMAO c m s e t t e s  til TMA og  DMA, og d e r f o r  e r  o g s å  summen av TMAO, TMA og DMA som f i n n e s  i v a n n e t  v i s t .  Døgn F i a .  1 .  Andelen av TMAO os flvktise nitroqenforbindelser Lunnrt i smeltevannet fra rund oale lacrret: i is ved c3 qrader C. Fis. 3. Andelen av TMAO oq flyktiqe nitroaenforbindelser funnet i smeltevannet fra sldyd oq hodekappet pale laqret i is ved +3 grader C. Av de prØvene som ble lagret p& kjØlerom er utvaskingen av TMAO og nedbrytningsproduktene stØrst for slØyd fisk (Fig. 3) og minst for blbgget fisk (Fig. 2 ) .  Andelen av totalt flyktig nitrogen som ble funnet i smeltevannet var imidlertid stØrst for rund fisk (Fig. 1 ) .  Det faktum at utvaskingen av TMAO, DMA, TMA og total flyktig nitrogen var lavest for blØgget fisk kan delvis forklares ved det mindre volum smeltevann (Tabell 1 ) .  Utvaskingen fra fisken som ble lagret ved romtemperatur var over 3 ganger hØyere enn for fisk lagret p& kjØleron (Fig. 4 ) .  Fis. 4. Andelen av TMAO (39 flyktiqe nitroqenforbintlelser fi.lr\.net. i smeltevannet fra sldyd oq hodekappet pale laqret ved f 2 5  arader c .  Sammenlignet med pale lagret i RSW (Tertnes et al., 1 9 8 2 - 1 9 8 . 3 )  var utvaskingen lavere for fisk lagret p& kjolerom, men h@yere for fisk lagret ved romtemperatur. Konsentrasjonen av inosinmonofosfat, inosin og hypoxantin i fisk og smeltevann ble ogsa bestemt. Det ble ikke funnet inosin monofosfat i noen av prØvene med smeltevann fra rund fisk (Fig. 5 ) .  Utvaskingen etter 1.3 dØgn er stØrst fra slSyd fisk (Fig. 7) mens etter 16 dager ble det vasket ut mest inosin fra blggget fisk ' (Fig. 6). F i s .  5 .  Andelen a v  h v p o x a n t i n ,  i n o s i n  o s  i n o s i n m o n o f o s f a t  funnet i s m e l t e v a n n  f r a  rund pale l a q r e t  i i s  ved + 3  qrader C .  Fis. 6. Andelen av hvnoxantin, inosin os inosinmonofosfat funnet i smeltevannet fra bldsqet pale lasret i is ved +3 srader C. il: c m > aJ il: .- Døgn Fis. 7. Andelen av hy~oxantin, inosin os inosinmonofosfat funnet i smeltevannet fra slByd os hodekap~et pale laqret i is ved +3 grader C. Som ventet ble det vasket mest ut fra fisken som ble lagret ved romtemperatur (Fig. 8 ) .  Etter 16 dØgn ble over 60% av totalt inosinmomofosfat og inosin funnet i smeltevannet. 20 Døgn Fis. 8. Andelen av hvuoxantin. inosin os inosinmonofosfat funnet i smeltevannet fra sldyd os hodeka~~et pale lasret i is ved ~ 2 5  grader C. For fisk som lagres i is ved lave temperaturer vil kun en beskjeden mengde flyktige nitrogenforbindelser lekke ut i smeltevannet. Dersom fisken blir lagret ved hØye temperaturer kan utvasking av flyktige nitrogenforbindelser ha betydning ved fastlegging av kvalitet ved kjemisk analyse. 4 LITTERATUR B i ~ l l a r d ,  F .  A .  oc: C c t l l i n s ,  J .  ( 1380)  . An iniproveci mi- tJ -~i : )d  -ka ~ i r - i a lyze  t r i m e t h y l a m i n e  i n  f i s h  arid t h e  irtt;erEeren(:e of  ammc>n:i-~-~.m a n d  c l in ie thy lamine .  F i s h i n g  B u l l e t i n ,  7 8  ( 2 ) ,  465  - .  Conw;~iy, R .  I .  o g  Byrne ,  A .  ( 19.3'3) . An abso rp t i c3n  ~ p p a r a t r u r >  f o r  i:hp m i c r o d e t e r m i n a t i o n  o f  c e r t a i n  v o l a t i l e  s u b s t . a n c e s .  Biochem.  J .  2 7 ,  419-429 .  Dowc:Ien., H .  C .  ( 1 3 3 8 ) .  The de t e rm . ind t i c )n  o f  smalil arnc::i.rrit.s cf ( : l imethylamine i n  bic>.log.iclial f l u i d s  , Bioc:hem. ,J. 3 2 ,  455- .d i? .  T e r t n e s ,  G . ,  L o s n e g a r d ,  N .  o g  Lan.gmyhr, E .  ( 1 3 8 2 - 1 9 8 3 ) .  U n d e r s @ k i l s e  over  k v a l i t e t  a v  f i s k  l a g r e t  i k j f l l t  s j d v a n n  o g  i i s ,  I1 - SV. F i s k e r i d i r e k t o r a t e t . ,  R a p p o r t e r  og  m e l d i n g e r .  N r .  5 / 8 2 ,  N r .  65/82, N r .  8 / 8 3 ,  N r .  9 / 8 3 .  V E D L E G G  1 Analiseresultater - rund pale l a s re t  i is ved +3 qrader r .  1 6  Analyseresultater - rund pale lagret i is ved i-3 grader C. TMAO, flyktige nitrogenforbindelser, hypoxantin (Hx), inosin ( I IxR)  og inosinmonofosfat (IMP) i rund pale lagret i is ved +3 grader C. Filet DØgn TMAO-N T0t.fl.N TMA-N DMA-N Hx HxR IMP mg/100g mg/100g mg/100g mg/100g mg/lOOg mg/100g my/lOGg Avfall DØgn TNAO-N T o t . .  fl. N TNA-N DMA-N Hx HxR IMP mg/100g mg/100g mg/100g mg/100g mg/100g rng/lOOg mg/l(l0g O -21,2 41 1 O, 44 O; 14 8,R 9,6 69,O 1 17,5 5,3 O, 5 7  0,30 20,3 16,7 89,s 3 17,8 7 1 4  O, 76 0,98 16,3 38,7 71,3 6 15,7 11,6 1'41 2,27 IS, 1 28,1 20, X 9 13,7 . 16,R 3,12 5,08 22,6 78,3 4, 4 13 10,l 23,7 5,28 10,46 15, l 21,6 4 1 4  16 6 , 3 31,O 7,41 12, 36 33,5 31,6 7,? V E D L E G G  2 Analyseresultater - bl@qqet pale laqret i is ved +3 qr;xder C .  18 Analyseresultater - blggget pale lagret i is ved + 3  grader C. TMAO, flyktige nitrogenforbindelser og hypoxantin (Hx), inosin (HxR) og inosinmonofosfat (IMP) i blggget pale lagret i is ved +3 grader C. Filet DBgn TMAO-N T0t.fl.N TMA-N DMA-N HX HxR IMP mg/100g mg/100g mg/100g mg/100g mg/100g mg/lOOg mg/lOOg Avfall DØgn TMAO-N Tot . fl. N TMA-N PMA-N Hx HxR IMP mg/IOOg mg/IoOg mg/100g mg/IOOg mg/IOOg mg/100g mg/100g V E D L E G G  3 20 Analyseresultat.er - slqjyd, hodekappet pale lagret i is ved c3 grader C. TMAO, flyktige nitrogenforbindelser, hypoxantin (Hx), inosin (HxR) og inosinmonofosfat (IMP) i slSyd, hodekappet pale lagret i is ved +3 grader C. Filet DØgn TMAO-N Tot. fl. N TMA-N DNA-N 14 x HxR IMP mg/IOOg mg/IOOy mg/IOOg mg/IOOg mg/10Og mg/10Qg mg/IOOg Avfall DØgn TMAO-N Tot.fl.N TMA-N DNA-N Hx HxR IMP mg/IOOg mg/lOOg mg/lOOg mg/lOOg mg/lOOg mg/IOQg mg/100g V E D L E G G  4 Analvseresultater - sldyd, hodekappet pale l a s r e t  i is ved 4-25 grader C .  22 Analyseresultater - siq5ydI hodekappet pale lagret i ic ved + 2 5  grader C. TMAO, flyktige nitrogenforbindelser, hypoxantin (Hx), inosin (HxR) og inosinmonofosfat (IMP) i slgyd, hodekappet pale lagret i is ved +25 grader C. Filet Dggn TMAO-N Tot . fl. N TMA-N DMA-N Hx HxR IMP ing/ 100g mg/ 100g mg/ l OOg mg/ 10Og mg/ 100g my / 100g mg/ l Q0g Avfall DØgn TMAO-N Tot.fl.N TMA-N DMA-N Hx HxR IMP mg/100g mg/IOog mg/IOOg mg/IOOg mg/lOOg mg/lOOg tng/10Oy V E D L E G G  5 Analvseresultater - i tinevann fra rund pale laqret i is ved +3 crrader C. 24 Analyseresultater - i tinevann fra rund pale lagret i is ved c3 grader C. TMAO, flyktiye nit.rogenforbindelser, hypoxantin, inosin og inosinmonofosfat i tinevann fra rund pale lagret ved c3 grader C .  Tinevann Ddgn TMAO-N Tot. fl. N TMA-N DMA-N Hx HxF? IMP mg/l mg/l ms/l my/l my/l m c ~ / l  my/l V E D L E G G  6 Analvsesesultater - i tinevann fra blGsset pale lasret i is ved +3 srader C .  2 6  Analyseresultater - i tinevann fra bl@gget pale lagret. i i s  ved +3 grader C. TMAO, flyktige nitrogenforbindelser, hypoxantin, inosin c)g inosinmonofosfat i tinevann fra blqigget pale lagret ved +3 grader C. Dqign TMAO-N Tot.fl.N mg/l mg/l Tinevann TMA-N DMA-N ms/l mg/l HxR m£r/l IMP mg/l V E D L E G G  7 A n a l v s e r e s u l t a t e r  - i t i n e v a n n  f r a  s l @ y d  os h o d e k a p p e t  p a l e  l aq re t  i i s  ved  +3 s r a d e r  C .  28 Analyseresultater - i tinevann fra sl@yd og hodekappet pale lagret i is ved +3 grader C. TMAO, flyktige nitrogenforbindelser, hypoxantin, inosin og inosinmonofosfat i tinevann fra sl@yd og hodekappet pale lagret ved +3 grader C. Tinevann D@gn TMAO-N T0t.fl.N TMA-N DMA-N Hx HxR IMF ms/l mg/l mg/l mg/l l ~ns/l mg/l V E D L E G G  8 Analyseresultater - i tinevann fra sl@ytj oq hodekappet pale laqret i is ved +25 crrac:ler C. 3 0 Analyseresultater - i tinevann fra sl@yd og hodekappet pale lagret i is ved +25 grader C. TMAO, flyktige nitrogenforbindelser, hypoxantin, inosin og inosinmonofosfat i tinevann fra slbyd og hodekappet pale lagret ved +25 grader C. Tinevann DØgn TMAO-N Tot .fl.N TMA-N DMA-N HxR IMP Hx mg/l ms/l mcr/l mg/l mg/l ing/ l mg/l 

Utvasking av TMAO og flyktige nitrogenforbindelser fra fisk lagret i is

NORA - Norwegian Open Research Archives

https://fdir.brage.unit.no/fdir-xmlui/bitstream/11250/131416/1/rom_1986_03.pdf

Utvasking av TMAO og flyktige nitrogenforbindelser fra fisk lagret i is

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Fiskeridirektoratets digitalarkiv

NORA - Norwegian Open Research Archives