杂合抗菌肽Scy-Hep3在毕赤酵母中的分泌表达及其抗菌活性

为获得体外稳定表达的高抗菌活性新型抗菌肽,通过重叠延伸PCR技术获得了拟穴青蟹抗菌肽Scygonadin (简记为Scy)和斜带石斑鱼抗菌肽Hepcidin 3 (简记为Hep3)的杂合抗菌肽基因scygonadinhepcidin3 (简记为scy-hep3),将scy-hep3与毕赤酵母Pichia pastoris的p PIC9K质粒连接,构建了分泌型表达载体p PIC9K-scy-hep3,用电转化法将其转化至毕赤酵母GS115菌中,经甲醇诱导表达和亲和纯化后获得杂合抗菌肽Scy-Hep3,并进行抗菌活性分析。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/p PIC9K-scy-hep3,用体积分数为0. 5%的甲醇诱导表达24 h,分泌表达上清液中获得了稳定表达的相对分子质量约24 000的表达产物,与预期杂合抗菌肽Scy-Hep3的大小相符;抗菌活性结果表明,杂合抗菌肽Scy-Hep3具有广谱抗菌活性,对被测的3种革兰氏阳性菌(溶壁微球菌Micrococcus lysodeikticus、谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus)和4种革兰氏阴性菌(施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri、荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和弗氏志贺氏菌Shigella flexneri)具有较强的抗菌活性(最小抑菌浓度MIC<12μmol/L);对比于单一的抗菌肽Scy和Hep3,杂合抗菌肽Scy-Hep3的抗菌活性显著增强。本研究结果将为杂合抗菌肽Scy-Hep3的生产和开发应用提供数据资料。国家自然科学基金资助项目(41676158);;福建省科技重大专项(2017NZ0004);;中央高校基本科研业务费专项(20720180117

Optimization of beta lactam antibiotics regimens against bloodstream infection caused by Pseudomonas aeruginosa

目的制定某院beta内酰胺类在铜绿假单胞菌(PA)血流感染中的治疗方案。方法收集某院2015年至2016年血培养中铜绿假单胞菌共64株,测定; beta内酰胺类(哌拉西林/他唑巴坦,头孢他啶,头孢吡肟,亚胺培南,美罗培南)对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)。用蒙特卡洛模拟计算多种治疗; 方案的达标率(PTA)和累积反应分数(CFR)。结果经验治疗时,哌拉西林/他唑巴坦4.5 g(q6 h),头孢他啶2 g(q8 h),头孢吡肟2; g(q8 h),亚胺培南1 g(q6 h),美罗培南1 g(q8 h, q6 h),共6种方案的CFR值> 90%;目标治疗时,当MIC≥16; mug·mL~(-1)时,模拟的所有方案达标概率值均 90% at; experiential therapy,when MIC≥16 mug·mL~(-1) at target therapy,PTA of; all regimens < 90%. Conclusion when the patient was PA bloodstream; infection,we suggest TZP 4.5 g (q6 h),CAZ 2 g(q8 h),FEP 2 g(q8 h),IPM 1; g(q6 h) and MEM 1 g(q8 h,q6 h) regimens at experiential therapy,and; combined with other antibiotics at target therapy when MIC≥16; mug·mL~(-1)