MALDI-TOF质谱技术分析加州海兔口腔神经节中超微量Leu-Leu多肽酶

利用丙酮 -水 -酸 (4 8∶ 5 0∶ 2 V/ V)萃取系统 ,从加州海兔 (Aplysia California,AC)口腔神经节中提取 L eu- L eu多肽酶 ,并用反相 HPL C进行纯化。选用具有三对 L eu- L eu结构的酸性多肽 (acidic peptide,AP)作为探针 ,以基质辅助激光解吸电离飞行时间 (MAL DI- TOF)质谱技术研究了海兔口腔神经节中的超微量 L eu- L eu多肽酶。对 L eu- L eu多肽酶的活性与类型及温度处理效果进行讨论。本技术也适用于分析其他组织与细胞中存在的各种超微量多肽

固氮酶金属簇纯化及分析装置的研制

介绍了一台用普通分光光度计（配有自制的简易流动式比色池）、样品收集器、双笔记录仪、恒流泵、液相色谱柱及厌氧箱等装配成的厌氧型制备液相色谱装置，主要用于棕色固氮菌固氮酶金属簇的分离纯化及定性定量分析。实验结果证明，该装置具有简单、快速、准确的特点。这台装置也可在常压下对各种蛋白质、糖类及核酸等生物大分子进行分离纯化和定性定量分析。对与该装置配套使用的自制碱性ＮＭＦ蒸馏装置和ＭＣ金属簇高效浓缩装置也作了说明

激光强度影响酸性多肽解吸电离和稳定性的研究

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术研究了激光强度对酸性多肽 (acidicpeptide,AP)解吸电离和稳定性的影响。实验结果表明了过强的激光强度会影响AP的稳定性 ,并引起部分AP分解成 3～ 8种新的多肽结构。优化最佳激光强度是准确分析多肽质谱结构信息的关键

差速离心结合蛋白质组学技术研究受镉盐胁迫后的牙鲆肝差异蛋白质

人工构建镉盐污染源,选用差速离心结合双向凝胶电泳(2D-PAGE)法,高效提取、分离和筛选牙鲆(Paralichthys olivaceus,PO)受镉盐胁迫后的肝脏全蛋白和差异蛋白质。实验结果表明:选用直接裂解法提取牙鲆肝(PO liver POL)全蛋白质且用2D-PAGE分离,可获得约800个蛋白斑点,其中镉盐诱导了11个差异蛋白斑点。以相对离心力为1000×g、12000×g和100000×g的差速离心法,分别制备了3种沉淀蛋白和1种胞浆蛋白,称为POL组分Ⅰ、POL组分Ⅱ、POL组分Ⅲ和POL组分Ⅳ(胞浆蛋白),蛋白斑点数目分别为380、550、500和850个,总计2280个,明显高于直接裂解法。比较分析法发现,差速离心结合2D-PAGE分离技术可获得牙鲆肝脏受镉盐胁迫后表达的54个差异蛋白质,并适合于用肽质量指纹(peptide mass fingerprint,PMF)图谱技术鉴定。本实验所建立的差速离心结合蛋白质组学技术可高效提取、分离和鉴定组织全蛋白或差异蛋白,并能有效地筛选出蛋白指示物

金乌贼视神经节蛋白质组分离方法的初步研究

选用TCA/丙酮沉淀法、缓冲液法、柱层析法、裂解液法和裂解液-超速离心法分别提取金乌贼视神经节蛋白质,其中蛋白质得率较高的方法有裂解液-超速离心法、裂解液法,其次为TCA/丙酮沉淀法.经双向凝胶电泳分离,并采用Melanie 4 Trial软件统计蛋白质斑点数目.发现pH 5~8范围的载体两性电解质适合于分离视神经节蛋白质组,其电泳图谱中多数蛋白质斑点清晰可见,显示出高分辩率、重复性好和易取样供质谱分析的优点,适合于开展视神经节蛋白质组学研究.裂解液-超速离心法是金乌贼视神经节最佳蛋白质提取方法

分光光度法测定茶制品中儿茶素含量的研究

依据儿茶素与香草醛的显色反应原理,用分光光度法对茶制品中儿茶素含量进行测定,建立香草醛—盐酸法测定茶制品中儿茶素含量的方法.结果表明显色剂和催化剂的添加量及反应时间等因素对测定均有影响.该法检测波长为500mm,反应时间为15h,反应温度(20±1)℃,以儿茶素为标准样品,线性范围10～100ug/mL,线性关系良好(r=0.999),相对标准偏差<1%.该法操作简便,其它辅助材料无干扰,可用于原料药和制剂中儿茶素含量的测定

生物电化学电解池的设计及应用

根据生物大分子的生理特性，设计了三种不同的电化学电解池，分别用于研究猪脾铁蛋白、细菌铁蛋白的电化学特性，以及电诱导棕色固氮菌表达新生理特性。说明了电解池的设计特点，给出了电解池示意图。实验结果表明，猪脾铁蛋白及细菌铁蛋白能直接从铂电极上获得还原电子，是非电极惰性蛋白质。棕色固氮菌能在电调控下被诱导成抗氨阻遏的菌株，合成固氮酶。这三种电解他也适合用于分析各种酶、蛋白质及细胞的电化学特性，并具有快速、准确、方便等特点

细菌铁蛋白电子光谱和释放铁动力学的新颖特性

棕色固氮菌细菌铁蛋白(Bacterial ferritin ofAzotobacter vinelandii,AvBF)分子结构由蛋白壳、铁核和横跨蛋白壳的电子隧道组成.细菌铁蛋白由24个相同类型的亚基组成,其分子量略高于魟鱼肝铁蛋白(Liver ferritin ofDasyatis aka-jei,DALF).电泳纯的AvBF在可见光谱区内呈现出4个特征吸收峰,波长分别位于414(α峰),525(β峰),555(S峰)和585(未知)nm.经Na2S2O4还原后,其AvBF在紫外可见区内的整体吸收峰强度明显增高.经物理铂金电极还原后,AvBF的α特征吸收峰(414 nm)强度随着控制还原电位降低(-200,-400,-600 mV vs NHE)而增强.动力学研究表明,在弱碱(pH8.0)条件下,AvBF和DALF均以二分之一级反应动力学方式释放铁,均未表现出释放铁速率转换行为,认为AvBF和DALF的释放铁速率和铁蛋白蛋白壳的柔性调节速率处于同步进行状态,使铁蛋白释放铁的过程符合二分之一级反应动力学规律

利用MALDI-TOF质谱技术研究胰岛素水解和酶切过程

利用海牛卵制备的模拟微量混合内切酶体系 ,用基质辅助激光解吸电离 -飞行时间 (MALDI-TOF)质谱技术研究了胰岛素在不同酸碱度和还原条件下的水解和酶解过程。实验结果为研制具有高生物利用度的胰岛素纳米粒口服制剂及选择具有适当耐酸碱及还原特性的包装材料提供了科学依据

蛋白质组学技术筛选与鉴定在甲基对硫磷胁迫下牙鲆脑组织表达的差异蛋白质

以甲基对硫磷(MP)为有机磷农药污染源,采用蛋白质组学技术分离及鉴定在甲基对硫磷胁迫下,牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑组织表达的差异蛋白质,从中筛选出潜在的适合于监测甲基对硫磷污染程度的蛋白指示物。实验结果表明:在甲基对硫磷胁迫下,牙鲆脑组织表达出17个差异蛋白质,经肽质量指纹(PMF)图谱技术鉴定后,发现其中部分差异蛋白质为热休克蛋白、细胞色素P450和谷胱甘肽S-转移酶,均是与受甲基对硫磷胁迫有关的蛋白质