A fully validated microbiological assay for daptomycin injection and comparison to HPLC method

Daptomycin (DPT) was the first lipopeptide antibiotic available for commercialization. It is active against gram-positive bacteria, including resistant strains. This work aimed to develop and validate a turbidimetric microbiologic assay to determine daptomycin in an injectable form. A 3x3 design was employed, at concentrations of 1, 2 and 4.0 µg/mL. The microorganism test used was Staphylococcus aureus ATCC 6538p, and Antibiotic Medium 3 was used as the culture medium. Method validation demonstrated that the bioassay was linear (r=0.9995), precise (RSD=2.58%), accurate (recovery 100.48± 2.11%), and robust. Degradation kinetics was also performed in an alkaline medium, indicating that daptomycin degradation follows first order kinetics under these conditions. The analyses of degraded solutions showed that daptomycin degradation products do not possess bactericidal activity. The bioassay was compared to HPLC method that was previously developed and no significant difference was found between them (p>;0.05). The method proved to be appropriate for daptomycin injection quality control.A daptomicina (DPT) é o primeiro lipopeptídeo cíclico disponível para comercialização. Possui atividade frente a bactérias gram-positivas, incluindo cepas resistentes. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um ensaio microbiológico turbidimétrico para quantificar a daptomicina na forma injetável. Empregou-se delineamento 3x3, nas concentrações de 1,0; 2,0 e 4,0 µg/mL. Como micro-organismo teste foi usado Staphylococcus aureus ATCC 6538p, e Meio para Antibióticos nº 3 foi empregado como meio de cultura. A validação do método demonstrou que o ensaio foi linear (r=0,9995), preciso (RSD=2,55%), exato (recuperação de 100,48 ± 2,11%) e robusto. A cinética de degradação em meio alcalino foi avaliada, indicando que a daptomicina segue cinética de primeira ordem nessa condição. A análise das soluções degradadas mostrou que os produtos de degradação da daptomicina não possuem atividade antimicrobiana. O bioensaio foi comparado com o método por CLAE previamente desenvolvido e não houve diferença significativa entre ambos (

Indução de aderência intrabdominal por prótese de retícula de polipropileno : estudo experimental em ratos

INTRODUCTION: The correction of groin hernias using a transperitoneal videolaparoscopic method with a polypropylene mesh is becoming increasingly common. This could lead to an increased incidence of adhesion formation. MATERIALS AND METHODS: The incidence of adhesions induced by mesh placement and by reperitonization was observed in 40 male adult Wistar rats, randomly allocated to four groups of 10 rats (Group A = no mesh, no reperitonization; B = no mesh, reperitonization; C = mesh, no reperitonization; D = mesh and reperitonization). After opening the abdominal cavity, the iliac fossa was identified and a peritoneal opening, measuring about 2 by 2 cm, was done on the parietal wall. In the rats in which a polypropylene prosthesis was used, a piece of Marlex mesh, measuring about 1.5 by 1.5 cm was placed on the peritoneal opening. A simple suture was performed in the animals submitted to reperitonization, using a 5.0 monofilamentar polypropylene thread on a cardiovascular (atraumatic) needle. The animals were killed 15 days after the operation. Macroscopic analysis was done by an investigator blinded to intervention group. Fisher’s exact test and the c2 test were used for statistical analysis of the results. A P < 0.05 was considered as significant. RESULTS: Adhesions were significantly more common in the groups in which the prosthesis was placed (59% vs. 95%; P = 0.01), as well as in the groups in which reperitonization was performed (58% vs. 100%; P = 0.03). CONCLUSIONS: The results suggest that polypropylene mesh placement and reperitonization are each independent factors that have a role in inducing the formation of adhesions.INTRODUÇÃO: A correção de hérnias na virilha através de um método videolaparoscópico transperitoneal está se tornando cada vez mais comum. Contudo, este método poderia levar a um aumento na incidência de formação de aderências. MATERIAIS E MÉTODOS: A incidência de aderências induzidas pela colocação de retícula e pela reperitonização foram observadas em 40 ratos Wistar adultos, machos, divididos aleatoriamente em quatro grupos com 10 ratos cada um (Grupo A = sem retícula, sem reperitonização; B = sem retícula, com reperitonização; C = com retícula, sem reperitonização; D = retícula e reperitonização). Após a abertura da cavidade abdominal, a fossa ilíaca foi identificada e fez-se uma abertura de aproximadamente 2 x 2 cm na parede parietal. Nos ratos em que uma prótese de polipropileno foi utilizada, uma retícula Marlex com 1,5 x 1,5 cm foi colocada sobre a abertura peritoneal. Nos outros animais, a reperitonização foi feita com sutura simples, utilizando-se fio de polipropileno monofilamentar 5.0 com uma agulha cardiovascular (atraumática). Os animais foram sacrificados 15 dias depois da operação. A análise macroscópica foi realizada por um investigador cego quanto ao grupo de origem dos animais. A análise estatística utilizou o teste exato de Fisher e o c2. Um P < 0,05 foi considerado significativo. RESULTADOS: As aderências foram significativamente mais comuns nos grupos nos quais a prótese foi utilizada (59% vs. 95%; P = 0,01), assim como nos grupos nos quais foi feita a reperitonização (58% vs. 100%; P = 0,03). CONCLUSÕES: Os resultados sugerem que a retícula de polipropileno e a reperitonização são fatores independentes entre si quanto à indução de formação de aderências

COVID-19 outcomes in people living with HIV: Peering through the waves

Objective: To evaluate clinical characteristics and outcomes of COVID-19 patients infected with HIV, and to compare with a paired sample without HIV infection. Methods: This is a substudy of a Brazilian multicentric cohort that comprised two periods (2020 and 2021). Data was obtained through the retrospective review of medical records. Primary outcomes were admission to the intensive care unit, invasive mechanical ventilation, and death. Patients with HIV and controls were matched for age, sex, number of comorbidities, and hospital of origin using the technique of propensity score matching (up to&nbsp;4:1). They were compared using the Chi-Square or Fisher's Exact tests for categorical variables and the Wilcoxon for numerical variables. Results: Throughout the study, 17,101&nbsp;COVID-19 patients were hospitalized, and 130&nbsp;(0.76%) of those were infected with HIV. The median age was&nbsp;54&nbsp;(IQR:&nbsp;43.0;64.0) years in&nbsp;2020 and 53&nbsp;(IQR:&nbsp;46.0;63.5) years in&nbsp;2021, with a predominance of females in both periods. People Living with HIV (PLHIV) and their controls showed similar prevalence for admission to the ICU and invasive mechanical ventilation requirement in the two periods, with no significant differences. In&nbsp;2020, in-hospital mortality was higher in the PLHIV compared to the controls (27.9%&nbsp;vs.&nbsp;17.7%; p&nbsp;=&nbsp;0.049), but there was no difference in mortality between groups in&nbsp;2021 (25.0%&nbsp;vs.&nbsp;25.1%; p &gt; 0.999). Conclusions: Our results reiterate that PLHIV were at higher risk of COVID-19 mortality in the early stages of the pandemic, however, this finding did not sustain in&nbsp;2021, when the mortality rate is similar to the control group

Incipient parallel evolution of SARS-CoV-2 Deltacron variant in South Brazil

With the coexistence of multiple lineages and increased international travel, recombination and gene flow are likely to become increasingly important in the adaptive evolution of SARS-CoV-2. These processes could result in genetic introgression and the incipient parallel evolution of multiple recombinant lineages. However, identifying recombinant lineages is challenging, and the true extent of recombinant evolution in SARS-CoV-2 may be underestimated. This study describes the first SARS-CoV-2 Deltacron recombinant case identified in Brazil. We demonstrate that the recombination breakpoint is at the beginning of the Spike gene. The 5′ genome portion (circa 22 kb) resembles the AY.101 (Delta), and the 3′ genome portion (circa 8 kb nucleotides) is most similar to the BA.1.1 (Omicron). Furthermore, evolutionary genomic analyses indicate that the new strain emerged after a single recombination event between lineages of diverse geographical locations in December 2021 in South Brazil. This Deltacron, AYBA-RS, is one of the dozens of recombinants described in 2022. The submission of only four sequences in the GISAID database suggests that this lineage had a minor epidemiological impact. However, the recent emergence of this and other Deltacron recombinant lineages (XD, XF, and XS) suggests that gene flow and recombination may play an increasingly important role in the COVID-19 pandemic. We explain the evolutionary and population genetic theory that supports this assertion, concluding that this stresses the need for continued genomic surveillance. This monitoring is vital for countries where multiple variants are present, as well as for countries that receive significant inbound international travel

Assessment of risk scores to predict mortality of COVID-19 patients admitted to the intensive care unit

ObjectivesTo assess the ABC2-SPH score in predicting COVID-19 in-hospital mortality, during intensive care unit (ICU) admission, and to compare its performance with other scores (SOFA, SAPS-3, NEWS2, 4C Mortality Score, SOARS, CURB-65, modified CHA2DS2-VASc, and a novel severity score).Materials and methodsConsecutive patients (≥ 18 years) with laboratory-confirmed COVID-19 admitted to ICUs of 25 hospitals, located in 17 Brazilian cities, from October 2020 to March 2022, were included. Overall performance of the scores was evaluated using the Brier score. ABC2-SPH was used as the reference score, and comparisons between ABC2-SPH and the other scores were performed by using the Bonferroni method of correction. The primary outcome was in-hospital mortality.ResultsABC2-SPH had an area under the curve of 0.716 (95% CI 0.693–0.738), significantly higher than CURB-65, SOFA, NEWS2, SOARS, and modified CHA2DS2-VASc scores. There was no statistically significant difference between ABC2-SPH and SAPS-3, 4C Mortality Score, and the novel severity score.ConclusionABC2-SPH was superior to other risk scores, but it still did not demonstrate an excellent predictive ability for mortality in critically ill COVID-19 patients. Our results indicate the need to develop a new score, for this subset of patients

Modelagem de um escore de mielotoxicidade quimioterápica na predição de neutropenia febril em tumores hematológicos

A neutropenia induzida pela quimioterapia é o mais comum efeito adverso da quimioterapia sistêmica para o câncer e é frequentemente complicada por neutropenia febril (NF). O uso profilático de fatores de crescimento hematopoiéticos pode reduzir o risco, a severidade e a duração da NF. Na prática clínica atual, a decisão de administrar ao paciente profilaxia com fatores de crescimento é baseada principalmente no potencial mielotóxico dos esquemas de QT, mas riscos específicos dos regimes não são definidos. Em muitos estudos, a toxicidade da quimioterapia é analizada em termos de alta dosagem versus baixa dosagem, sem uma regra geral que considere os diferentes esquemas de QT em uma única escala. O objetivo desse estudo é validar uma classificação de toxicidade de um esquema de QT e avaliar sua utilidade em um modelo de predição de risco de neutropenia febril em pacientes com câncer hematológico no começo de um ciclo de quimioterapia. Foram avaliados prospectivamente duzentos e sessenta e oito pacientes e acompanhados durante 1053 ciclos de quimioterapia na Bélgica, entre 2001 e 2005. Informações relevantes foram coletadas no começo do primeiro ciclo e o número de dias de neutropenia febril foi contabilizado no acompanhamento dos pacientes [dicotomizada (sem neutropenia versus >= dia de NF)]. A relação entre o desfecho e as co-variáveis foi analisada usando a Equação de Estimativa Generalizada (GEE). Um regime de quimioterapia agressiva é o maior preditor de NF [razão de chances (OR) 5.2 (3.2-8.4)]. Os outros preditores independentes são: doença subjacente, o comprometimento de medula óssea, superfície corporal = 1 day of FN)]. Aggressive chemotherapy regimen is the major predictor of FN [odds ratio 5.2 (3.2 - 8.4)]. The other independent predictors are the underlying disease, an involvement of bone marrow, body surface<= 2m², a baseline monocyte count <150/µl and the interaction between the first cycle in the same treatment line and a baseline hemoglobin dosage. A rule of prediction of FN was computed with these characteristics: sensitivity 78.6%, specificity 62.3%, positive predictive value 42.7% and negative predictive value 89.1%. Further studies are needed to validate this score

Bacteremia por Enterococcus faecium resistente à vancomicina em hospital terciário : epidemiologia, susceptibilidade aos antimicrobianos e mortalidade

Introdução: Enterococcus faecium resistente à vancomicina (EFRV) surgiu como um importante patógeno multirresistente e de etiologia potencialmente letal nas infecções associadas aos cuidados de saúde em todo o mundo. Objetivo: O objetivo deste estudo de coorte retrospectivo foi avaliar os fatores associados à mortalidade em pacientes com bacteremia causadas por EFRV em um grande hospital de referência terciária no sul do Brasil. Métodos: Foram avaliados todos os casos documentados de bacteremia identificados entre maio de 2010 e julho de 2012. Regressão de Cox foi realizada para determinar se as características relacionadas ao hospedeiro ou o tratamento antimicrobiano estavam associadas com a mortalidade por qualquer causa em 30 dias. No total, 35 pacientes documentados com bacteremia por EFRV foram identificados durante o período de estudo. Resultados: A mediana do escore APACHE-II da população do estudo foi 26 (IQR 10). A mortalidade global em 30 dias foi de 65,7%%. Todos isolados de EFRV eram sensíveis à linezolida, daptomicina e quinopristina - dalfopristina. A linezolida foi o único agente antimicrobiano com atividade in vitro contra EFRV que foi administrada à coorte. Após a análise multivariada, o tratamento com linezolida (HR 0,08, 95% CI, 0,02-0,27) e a presença de insuficiência renal aguda no início da bacteremia (HR 4,01, 95% CI, 1,62-9,94) foram associadas de forma independente com o desfecho principal. Conclusão: Apresentação com insuficiência renal aguda e ausência de tratamento com um antibiótico eficaz representa um risco de mortalidade em pacientes com bacteremia por EFRV.Background: Vancomycin-resistant Enterococcus faecium (VREF) has emerged as a relevant multidrug-resistant pathogen and potentially lethal etiology of health care-associated infections worldwide. Objective: The objective of this retrospective cohort study was to assess factors associated with mortality in patients with VREF bacteremia in a major tertiary referral hospital in southern Brazil. Methods: All documented cases of bacteremia identified between May 2010 and July 2012 were evaluated. Cox regression was performed to determine whether the characteristics related to the host or antimicrobial treatment were associated with the all-cause 30-day mortality. In total, 35 patients with documented VREF bacteremia were identified during the study period. Results: The median APACHE-II score of the study population was 26 (IQR 10). The overall 30-day mortality was 65.7%. All VREF isolates were sensitive to linezolid, daptomycin and quinopristin-dalfopristin. Linezolid was the only antimicrobial agent with in vitro activity against VREF that was administered to the cohort. After multivariate analysis, linezolid treatment (HR, 0.08; 95%CI, 0.02 – 0.27) and presence of acute kidney injury at the onset of bacteremia (HR, 4.01; 95%CI, 1.62 – 9.94) were independently associated with the main outcome. Conclusion: Presentation with acute kidney injury and lack of treatment with an effective antibiotic poses risk for mortality in patients with VREF bacteremia

Modelagem de um escore de mielotoxicidade quimioterápica na predição de neutropenia febril em tumores hematológicos

A neutropenia induzida pela quimioterapia é o mais comum efeito adverso da quimioterapia sistêmica para o câncer e é frequentemente complicada por neutropenia febril (NF). O uso profilático de fatores de crescimento hematopoiéticos pode reduzir o risco, a severidade e a duração da NF. Na prática clínica atual, a decisão de administrar ao paciente profilaxia com fatores de crescimento é baseada principalmente no potencial mielotóxico dos esquemas de QT, mas riscos específicos dos regimes não são definidos. Em muitos estudos, a toxicidade da quimioterapia é analizada em termos de alta dosagem versus baixa dosagem, sem uma regra geral que considere os diferentes esquemas de QT em uma única escala. O objetivo desse estudo é validar uma classificação de toxicidade de um esquema de QT e avaliar sua utilidade em um modelo de predição de risco de neutropenia febril em pacientes com câncer hematológico no começo de um ciclo de quimioterapia. Foram avaliados prospectivamente duzentos e sessenta e oito pacientes e acompanhados durante 1053 ciclos de quimioterapia na Bélgica, entre 2001 e 2005. Informações relevantes foram coletadas no começo do primeiro ciclo e o número de dias de neutropenia febril foi contabilizado no acompanhamento dos pacientes [dicotomizada (sem neutropenia versus >= dia de NF)]. A relação entre o desfecho e as co-variáveis foi analisada usando a Equação de Estimativa Generalizada (GEE). Um regime de quimioterapia agressiva é o maior preditor de NF [razão de chances (OR) 5.2 (3.2-8.4)]. Os outros preditores independentes são: doença subjacente, o comprometimento de medula óssea, superfície corporal = 1 day of FN)]. Aggressive chemotherapy regimen is the major predictor of FN [odds ratio 5.2 (3.2 - 8.4)]. The other independent predictors are the underlying disease, an involvement of bone marrow, body surface<= 2m², a baseline monocyte count <150/µl and the interaction between the first cycle in the same treatment line and a baseline hemoglobin dosage. A rule of prediction of FN was computed with these characteristics: sensitivity 78.6%, specificity 62.3%, positive predictive value 42.7% and negative predictive value 89.1%. Further studies are needed to validate this score

MODULAÇÃO TRANSCRICIONAL DE GENES ASSOCIADOS AO SISTEMA ANTIOXIDANTE EM PACIENTES COM COVID-19: IMPACTO POTENCIAL NO SISTEMA NERVOSO CENTRAL

Introdução: O SARS-CoV-2 é capaz de infectar as células do sistema nervoso central (SNC), promovendo estresse oxidativo e inflamação. Múltiplas manifestações neurológicas como cefaléia, confusão mental, fadiga, anosmia e ageusia tem sido descritas. O mecanismo pelo qual o SARS-CoV-2 causa estas manifestações, ainda não está estabelecido. Neste sentido, o transcriptoma de indivíduos com COVID-19 pode indicar modulação transcricional que, no futuro, pode ser utilizada como biomarcador de alterações clínicas. Objetivos: Investigar a modulação transcricional de genes associados ao sistema antioxidante endógeno (KEGG N00243) no córtex pré-frontal de pacientes com COVID-19. Métodos: Utilizamos dois bioprojetos (PRJNA755712 e PRJNA755713), disponíveis no NCBI, de autópsias de córtex pré-frontal de indivíduos infectados e não infectados, totalizando 10 transcriptomas. Após, foram baixadas as sequências de mRNA e as sequências codificadoras foram utilizadas para o mapeamento das leituras dos transcriptomas. O mapeamento e a análise de expressão diferencial foram realizados no CLC Genomics Workbench 23.0.4. Foram considerados diferencialmente expressos, os genes que apresentaram p < 0,05. Resultados e discussão: A infecção pelo SARS-CoV-2 induziu um aumento na transcrição da Gpx4 (FC = 7,71) e da Nqo1 (FC = 5,83) indicando uma adaptação do organismo no combate ao estresse oxidativo. Em contrapartida, houve uma diminuição na transcrição da GstA4 (FC = -19,33), GstM2 (FC = -2,21), GstM4 (FC = -16,6), GstT1 (FC = -10,52). A glutationa S-transferase (GST) é uma enzima de fase 2 de detoxificação, que conjuga a glutationa com moléculas xenobióticas (substâncias estranhas ao organismo humano). A redução na transcrição de GSTs pode resultar em uma detoxificação ineficaz. Polimorfismos neste gene são considerados fatores de risco para esquizofrenia, transtorno bipolar e ansiedade. Além disso, estudos in vitro indicam que a perda da GSTA4 prejudica a diferenciação, remielinização e sobrevivência de oligodendrócitos, o que pode contribuir para a neurodegeneração. Conclusão: O SARS-CoV-2 pode provocar uma modulação transcricional comparável àquela observada em patologias que comprometem o SNC. As implicações de longo prazo da COVID-19 parecem incluir uma gama de distúrbios, sobretudo no SNC. Estudos complementares são necessários para aprofundar estes achados e os correlacionar com as manifestações neurológicas dos pacientes acometidos por COVID-19